兽用疫苗生产与质量控制PPT课件

更强更持久，如脂多糖、多糖、缓释微球、
细胞因子，免疫刺激复合物等。
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普通制品：指用一般方法制备的、未经浓 缩和纯化处理，或仅按毒（效）价标准稀 释的制品。如现有国内的大部分传统疫苗 均为普通制品。
精制生物制品：将普通制品（原制品）经 浓缩和纯化处理，去除无效成分，毒（效） 价高于普通制品效力更好，如精制破伤风 毒素和精制结核菌素等。
亚硝基胍 醋酸坨 洗衣粉
高温 紫外线
适应非易感动物 或细胞 杂交减毒
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疫苗《制造及检验规程》
任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是 国家法定标准。
疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行 生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料 证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新 《规程》才能进行生产。
配苗
传代细胞
培养收获 灭活病毒液
灭活
配苗（混匀、乳化）
原料 配制 灭菌
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菌 （毒）种分类
菌（毒）种分强毒和弱毒 强毒：通常指从得病动物体内分离到的致
病毒株，只能用于制造灭活疫苗和检验用 弱毒：通常是采用人工的方法用强毒致弱
而成，一般于制造活疫苗
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菌 （毒）种质量标准
生物学特性明显、历史清楚：形态、培养特性、 生化特性及血清免疫学特性等明显，易于鉴别； 人工感染动物引起稳定一致的临床症状和病理变 化特征；原始细菌或病毒株的来源地区、动物品 种流行资料清楚；分离鉴定资料完整；传代、保 藏和生物学特性检查方法明确。
佐剂制品：为了增强疫苗制剂诱导动物机体的免疫应答反 应，提高免疫效果，在疫苗制备的过程中加入适量的佐剂， 如氢氧化铝胶、油佐剂等，这类制品称为佐剂制品。
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二、疫苗的定义和分类
1. 疫苗定义 2. 疫苗分类
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1、疫苗定义
由特定细菌、病毒、立克次体、衣原体等 微生物及寄生虫制成的，接种动物后能产 生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均 称为疫苗，制剂的主要成分为微生物或寄 生虫。
亚单位疫苗：是指将病原体经物理或化学方法 处理，除去无效物质，提取其有效抗原部分制 备的一类疫苗，经提取、纯化，通过化学合成， 制成不同的亚单位疫苗。
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基因工程重组亚单位疫苗：利用DNA重组技术， 将编码病原微生物保护性的基因 导入原核或 真核细胞，使其在受体细胞中高效表达，分泌 保护性抗原肽链，提取肽链加入佐剂制成。该 类疫苗安全性好，副反应小（有害的反应原 少），稳定性好，便于保存和运输，但研发、 生产成本高，免疫原性较差，需多次免疫才能 得到有效保护。
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厂房、设施和仪器设备
灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；
净化设备：净化机组、无菌室、超净工作台等；
微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、 各种罐体、生化培养箱等；
乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；
冻干设备：冻干机；
灌装设备：洗烘连动线、自lent vaccine）：利用同一种微 生物（菌）毒株或同一种微生物中的单个血清型 （菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗。
多价疫苗（polyvalent vaccine）：利用同一种 微生物（菌）毒株或同一种微生物中的多个血清 型（菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗
毒力应在规定的范围以内：用于制造弱毒疫苗的 菌毒种，毒力应尽量弱一些；用于制造抗血清、 灭活疫苗和疫苗效力检测的菌（毒）种毒力应强， 且抗原性要尽量高
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菌（毒）种的筛选程序和内容
病毒分离
纯粹性试验
致病性试验
抗原性试验
原动物 实验动物 鸡胚 细胞 反应原性 免疫原性
LD50 EID50 ELD50 TCID50 血清学实验 攻毒保护实验
遗传学上相对纯一与稳定：菌毒种在传代增殖过
程中某些遗传形状会发生改变和分离，如形态特
征、毒力、反应原性、免疫原性等方面，因此要
求制造生物制品的菌（毒）种的这种改变和分离
越小越好，应经常进行挑选，纯化和克隆。
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反应原性和免疫原性优良：反应原性高，即使微 量量的抗原物质进入机体内既能产生强烈的免疫 反应，血清学上会出现很高的特意性；优良的免 疫原性物质能使免疫动物产生完善的免疫应答， 从而获得坚强的免疫力
稳定性实验
筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗 用抗体或疫苗效力检验用
冻干、冷冻或冷藏保存
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弱毒菌（毒）种的选育
弱毒菌（毒）种的选育
自然弱毒株的分离
人工诱变致弱
同源动物 （如NDV LaSota株）
异源动物 （HVT FC126株）
化学途径
物理途径 生物途径
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液状制品：湿性制品。一些灭活疫苗如兔病毒性出血症灭 活疫苗 ，诊断制品如血清、抗原等为液状制品。多数既 不耐高温和阳光，又不宜低温冻结和反复冻融，否则其效 价会受到影响，只能在低温冷暗处保存，保存时间较短。
干燥制品：液状制品加入适当稳定剂或冻干保护剂经冷冻 真空干燥处理，将96%以上水分除去后剩留疏松海绵状的 物质，为干燥制品，生物制品经干燥后能较长时间保护活 性和抗原效价。
概念：系用天然或人工改造的微生物、寄 生虫、生物毒素或生物组织及代谢产物等 为材料，采用生物学、分子生物学或生物 化学等相应技术制成的一类生物活性制品， 用于预防、治疗和诊断畜禽等动物疾病
兽用生物制品学科：是一门涉及多种学科 领域的应用科学（微生物学、免疫学、生 物化学、实验动物学、细胞学、分子生物 学、制冷学、生物工程学、管理学等）
仓储
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办公区 生活区
大门
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疫苗生产工艺流程
菌（毒）种 培养物（培养基、动
物、禽胚或细胞等） 收获抗原（培养
液、含毒组织、胚液或细胞液等） 配苗
分装 冻干成活疫苗或灭活后制成灭
活疫苗。
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细菌疫苗的制造流程
菌种
蛋白胨、肉浸液等原料
生产用种子
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诊断制品（diagnostic preparation）： 利用微生物、寄生虫及其代谢产物，或动 物血清、组织等，根据免疫学和分子生物 学原理制备，用于疫病诊断、免疫监测和 病原鉴定的一类生物制剂。
抗病血清（antiserun）：或高免血清，为 含有高效价特异性抗体的血清，能用于治 疗或紧急预防相应病原体所致的疾病。
多联疫苗（mixed vaccine）：利用不同的微生 物增殖培养物，按免疫学原理和方法组合而成的 疫苗。接种动物后能获得相应疾病的免疫保护， 一针多防，可减少劳动力和动物应激。
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—按疫苗病原菌（毒）株来源分类
同源疫苗：采用同种、同型或同源微生物制备， 应用于同类动物免疫接种的疫苗。
培养基
配制、灭菌
原料
配制、灭菌 灭活 灭活菌液
培养 菌液 菌苗原液
原料 配制、灭菌
佐剂 配苗乳化
配苗
保护剂
分装、扎盖、帖签 灭活疫苗
检验
分装冻干、扎盖帖签
活疫苗
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病毒性细胞疫苗的制造工艺流程
基础种毒
健康动物（或胚胎） 组织
细胞悬液
原料 细胞培养液
配制
配制 灭菌
生产用种毒 原料
保护剂
生长细胞 病毒液
包装设备：扎盖机、帖标机；
冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等；
污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；
检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳
培养箱、生物安全柜、动物3房3 等。
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福州大北农公司总体布局图
大动物房 小动物房
主 厂房
质检楼
锅炉房
脾林苗
污水 处理站
洁净度：按各功能间洁净度、压力、压差要求设计施 工。有10万级区、万级区和局部百级区。
六大系统：供电、供水、供汽、污水处理、净化、监 控。
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厂房、设施和仪器设备
检验设施
质检室 检验动物舍（应配备有符合各类实验动物级别
饲养设施）
仓储设施
原辅材料库 半成品库 成品库
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菌 （毒）种
菌（毒）种是疫苗生产必备的原材料，国 家对菌（毒）的保管和使用有严格的规定 和限制（生物安全问题）。
生产疫苗的菌（毒）种来源：中国兽医药 品监察所或新兽药转让单位。
菌（毒）种保管和使用：基础种毒由中国 兽医药品监察所或其委托的保管单位进行 生产、鉴定和保管，生产用种子批由企业 生产、鉴定和保管。
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活疫苗特点
可在体内繁殖 系统免疫反应和局部免疫反应 免疫力持久，产量高，成本低 有毒力增强和反祖危险 抗原干扰现象 保存条件苛刻
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死疫苗（killed vaccine）
灭活疫苗：由完整的病毒或细菌经灭活剂灭活 后制成，即要使病原体充分死亡，丧失感染性 或毒性，又要保留其免疫原性。
《规程》来源
中华人民共和国《兽用生物制品规程》（常规疫苗） 转让单位（新兽药）
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厂房、设施和仪器设备
《GMP》证书是疫苗生产的准入证， 疫苗生产必 需拥有与生产工艺相符合的生产线
GMP 生产车间设计要求
功能区：抗原制备区、成品生产区、洗涤区、办公区。 各区域和功能间以洁净走廊相连，严格按人流物流分 开原则进行设计。
异源疫苗：采用不同种微生物的（菌）毒株制备 的疫苗，接种动物后能使其获得对疫苗中未含有 的病原体产生抵抗力，如犬在接种麻疹疫苗后， 能产生对犬瘟热的抵抗力。或采用同一种中一种 型微生物的（菌）毒株制备的疫苗，接种动物后 能使其获得对异型病原体的抵抗力。
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三、疫苗生产工艺介绍
1. 疫苗生产基本条件 2. 疫苗生产工艺流程 3. 生产中影响疫苗质量的关键环节 4. 疫苗抗原制造技术介绍 5. 疫苗检验 6. 疫苗保存
兽用疫苗生产与质量控制
张渊魁
福州大北农生物技术有限公司
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主要内容
1.兽用生物制品简介 2.疫苗的定义和分类 3.疫苗生产工艺简介 4.疫苗生产质量控制 5.疫苗研究发展趋势
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一、兽用生物制品简介
1.兽用生物制品概念 2.兽用生物制品分类
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1、兽用生物制品概念
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死疫苗特点
不能在体内繁殖 有利于制备多价或多联疫苗 比较安全，不发生全身性副反应，无毒力反祖
现象 受外界影响小，有利于保存运输 免疫剂量大，需多次免疫，成本高 只能诱导机体产生体液免疫 通常需要用佐剂或携带系统来增强其免疫效果
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基因疫苗（genetic vaccine）： 包括DNA 疫苗和RNA疫苗，是将编码某种抗原蛋白的 基因置于真核表达元件的控制下，构成重 组表达质粒DNA或RNA，将其直接注入动物 体内，通过宿主细胞的转录翻译系统合成 抗原蛋白，从而诱导宿主产生抗原蛋白的 免疫应答。
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1、疫苗生产基本条件
➢ 产品批准文号 ➢ 菌（毒）种 ➢ 疫苗《制造及检验规程》 ➢ GMP厂房、设施和仪器设备
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产品批准文号
农业部颁发批准文号 GMP证书(具备该疫苗生产线) 产品复核检验(具备生产该疫苗的能力) 标签、说明书样稿审查(符合规程规定) 省级文号？
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微生态制剂（probiotics）：又称活菌制 剂，是用非病原微生物如乳酸杆菌、双歧
杆菌等活菌制剂，口服治疗畜禽肠道正常
菌群失调引起的下痢。
副免疫制品（paraimmunity preparation）： 这类物质能通过刺激机
体，提高特异性和非特异性免疫，从而使
动物机体对其他抗原物质的特异性免疫力
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2、兽用生物制品分类
按生物制品性质分类 疫苗（vaccine）：接种动物后能产生自动
免疫和预防疾病的一类生物制剂称为疫苗。 类毒素（toxoid）：又称脱毒毒素，是指
细菌生长繁殖过程中产生的外毒素，经化 学药品（如甲醛）处理后成为无毒性但保 留免疫原性的生物制剂，接种动物后也能 产生自动免疫，产生抗毒素血清。
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2、分类
按微生物分类
1. 细菌类疫苗 2. 病毒类疫苗 3. 寄生虫类疫苗
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按疫苗抗原的性质和制备工艺分类 活疫苗（live vaccine）
弱毒活疫苗 基因缺失疫苗 基因工程活载体疫苗 病毒抗体复合疫苗：特异性高免血清与适当比
例的相应病毒组成，其特点是可以延缓病毒释 放，提高疫苗的安全性和免疫效果。