金黄色葡萄球菌实验标准操作程序

金黄色葡萄球菌实验标准操作程序
岗位名称检验员执行人员检验员技能要求掌握实验技能监控人员检验员监控频率实验过程检验方法对照试验作业条件在无菌室内操作
作业步骤1、超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时，通风半小时后进入无菌室操作；
2、样品用75%酒精喷洒后放入传递窗，在无菌室操作台按顺序摆放后再用75%酒精均匀喷洒；
3、操作前手用75%酒精消毒，剪样前用酒精棉球擦拭样品表面；
4、固体和半固体样品：称取25g样品，放入225ml生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，制成1:10的样品匀液。

5、液体样品：用微量移液器吸取25ml样品置盛有225ml生理盐水的无菌锥形瓶中（瓶内置适量的无菌玻璃珠），充分混匀，制成1:10的样品匀液。

6、用1mL微量移液器吸取1:10的样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入含有9ml 灭菌生理盐水试管内（吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振荡试管混匀或换用1支1mL无菌吸管反复吹打使混匀，做成1:100的稀释液。

7、按上述操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌枪头。

8、第一方法根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4m接种量分别加入3块
Baird-Parker琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。

使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

9、在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36 ℃±1℃培养1 h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36 ℃±1 ℃培养，45 h～48 h。

10、典型菌落计数和确认
10.1 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。

用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。

长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。

10.2 选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板，且同一稀释度3 个平板所
检测中心。