PAK5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭
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育部医学 细 胞 生 物 学 重 点 实 验 室，辽 宁 沈 阳 １１０１２２ 【作者简介】 李洋（１９８６－），女，辽宁葫芦岛人，讲师，博士，主要从 事肿瘤信号转导 通 路 的 研 究 工 作。 Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｍｕ＿ｌｉｙ ａｎｇ＠１６３．ｃｏｍ 【通讯作者】 李丰（１９６２－），男，辽宁锦州人，博士，教授，主要从事 肿瘤信号转导通路的研究工作。
ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１８，２６（２３）：３７０５－３７０８
【摘要】 目的：探讨 ｐ２１活化激酶 －５（ｐ２１－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ５，ＰＡＫ５）蛋白对乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用 机制。方法：观察 ＰＡＫ５过表达对乳腺癌细胞形态的影响，人乳腺肿瘤细胞 ＭＣＦ－７通过慢病毒感染稳定表 达 Ｆｌａｇ－ＰＡＫ５。然后提取感染细胞的总蛋白进行蛋白免疫印迹检测上皮 －间质转化（ＥＭＴ）标志物上皮 －钙 黏蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ），纤维连接蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）和波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）的表达。最后通过 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检 测过表达 ＰＡＫ５对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果：过表达 ＰＡＫ５蛋白能够使细胞形态由鹅卵石样像梭 形变化，下调 Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白，促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。结论：ＰＡＫ５可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生 上皮 －间质转化，促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生。 【关键词】乳腺癌；ｐ２１活化激酶 －５；上皮 －间质转化；侵袭转移 【中图分类号】Ｒ７３７．９ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－４９９２．２０１８．２３．００１ 【文章编号】１６７２－４９９２－（２０１８）２３－３７０５－０４
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆｐ２１－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ５（ＰＡＫ５）ｏｎｔｈｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｏｍｏｎｉｔｏｒｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＰＡＫ５ｏｎｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＭＣＦ７ｗａｓｓｔａ ｂｌｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈＦｌａｇ－ＰＡＫ５．Ａｎｄｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄ，ｌｙｓａｔｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｑｕａｌａｍｏｕｎｔｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈＦｌａｇ，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎａｎｄｖｉｍｅｎｔｉｎ．Ｔｈｅｎ，ｅｆｆｅｃｔｓｏｆＰＡＫ５ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｔｈｅｍｉｇｒａ ｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄＭＣＦ－７ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＴｒａｎｓｗｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｃｈａｍｂｅｒｓａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｏｖｅｒｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＡＫ５ｃａｎｃｈａｎｇｅｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｆｒｏｍ ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅｔｏｆｕｓｉｆｏｒｍ，ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＡＫ５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏＥＭＴｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ，ｐ２１－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ５（ＰＡＫ５），ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ），ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ
ＬｉＹａｎｇ，ＸｉｎｇＹａｏ，ＨａｎＦｕｙｉ，ＬｉＦｅｎｇ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ａｎｄＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓ ｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙａｎｇ１１０１２２，Ｃｈｉｎａ．
ＰＡＫ５在细胞中定位于线粒体，在多种肿瘤组织中呈高 表达，如结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌及肝癌等。在乳 腺癌中，ＰＡＫ５通过 ＰＡＫ５－Ｅｒｇ１－ＭＭＰ２信号通路促进肿瘤 细胞迁移和侵袭［２］。ＰＡＫ５对部分药物具有抵抗性，如在卵 巢癌中 ＰＡＫ５能够抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡［３］，肝细胞肝 癌顺铂治疗时，ＰＡＫ５抑制顺铂引起的细胞凋亡［４］。
的恶性转化和肿瘤细胞侵袭转移中具有重要作用，目前被认 为是肿瘤细胞信号网络的关键调节因子［１］。迄今为止 ＰＡＫ 家族共发现 ６个成员，根据其结构相似性，将它们分为两类， Ｉ类包括 ＰＡＫ１～３，ＩＩ类包括 ＰＡＫ４～６。其中，ＰＡＫ５作为 ＩＩ 类 ＰＡＫ最新发现且研究最少的成员，与肿瘤的发生发展密 切相关。
现代肿瘤医学 ２０１８年 １２月 第 ２６卷第 ２３期 ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ｄｅｃ２０１８，ＶＯＬ２６，Ｎｏ２３
?论 著? ?基础研究?
ＰＡＫ５通过上皮 －间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭
·３７０５·
李 洋，邢 瑶，韩馥伊，李 丰
ＰＡＫ５ｐｒｏｍｏｔｅｓｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ
ｐ２１活化蛋白激酶（ｐ２１ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ，ＰＡＫｓ）是一类保 守的丝氨酸 ／苏氨酸蛋白激酶，参与细胞内多个信号转导通 路，并在肿瘤的发生发展过程中起重 要 作用。在细胞骨架重 组、细胞极性调控、细胞迁移、基因转录调 控 ，特 别 是在细胞
【收稿日期】 ２０１８－０５－０９ 【修回日期】 ２０１８－０６－０４ 【基金项目】 国家自然科学基金资项目（编号：８１６０２５６４） 【作者单位】 中国医科大学基础医学院分子细胞生物学教研室，教
ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１８，２６（２３）：３７０５－３７０８
【摘要】 目的：探讨 ｐ２１活化激酶 －５（ｐ２１－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ５，ＰＡＫ５）蛋白对乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用 机制。方法：观察 ＰＡＫ５过表达对乳腺癌细胞形态的影响，人乳腺肿瘤细胞 ＭＣＦ－７通过慢病毒感染稳定表 达 Ｆｌａｇ－ＰＡＫ５。然后提取感染细胞的总蛋白进行蛋白免疫印迹检测上皮 －间质转化（ＥＭＴ）标志物上皮 －钙 黏蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ），纤维连接蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）和波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）的表达。最后通过 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检 测过表达 ＰＡＫ５对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果：过表达 ＰＡＫ５蛋白能够使细胞形态由鹅卵石样像梭 形变化，下调 Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白，促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。结论：ＰＡＫ５可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生 上皮 －间质转化，促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生。 【关键词】乳腺癌；ｐ２１活化激酶 －５；上皮 －间质转化；侵袭转移 【中图分类号】Ｒ７３７．９ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－４９９２．２０１８．２３．００１ 【文章编号】１６７２－４９９２－（２０１８）２３－３７０５－０４
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆｐ２１－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ５（ＰＡＫ５）ｏｎｔｈｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｏｍｏｎｉｔｏｒｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＰＡＫ５ｏｎｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＭＣＦ７ｗａｓｓｔａ ｂｌｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈＦｌａｇ－ＰＡＫ５．Ａｎｄｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄ，ｌｙｓａｔｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｑｕａｌａｍｏｕｎｔｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈＦｌａｇ，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎａｎｄｖｉｍｅｎｔｉｎ．Ｔｈｅｎ，ｅｆｆｅｃｔｓｏｆＰＡＫ５ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｔｈｅｍｉｇｒａ ｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄＭＣＦ－７ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＴｒａｎｓｗｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｃｈａｍｂｅｒｓａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｏｖｅｒｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＡＫ５ｃａｎｃｈａｎｇｅｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｆｒｏｍ ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅｔｏｆｕｓｉｆｏｒｍ，ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＡＫ５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏＥＭＴｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ，ｐ２１－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ５（ＰＡＫ５），ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ），ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ
ＬｉＹａｎｇ，ＸｉｎｇＹａｏ，ＨａｎＦｕｙｉ，ＬｉＦｅｎｇ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ａｎｄＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓ ｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙａｎｇ１１０１２２，Ｃｈｉｎａ．
ＰＡＫ５在细胞中定位于线粒体，在多种肿瘤组织中呈高 表达，如结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌及肝癌等。在乳 腺癌中，ＰＡＫ５通过 ＰＡＫ５－Ｅｒｇ１－ＭＭＰ２信号通路促进肿瘤 细胞迁移和侵袭［２］。ＰＡＫ５对部分药物具有抵抗性，如在卵 巢癌中 ＰＡＫ５能够抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡［３］，肝细胞肝 癌顺铂治疗时，ＰＡＫ５抑制顺铂引起的细胞凋亡［４］。
的恶性转化和肿瘤细胞侵袭转移中具有重要作用，目前被认 为是肿瘤细胞信号网络的关键调节因子［１］。迄今为止 ＰＡＫ 家族共发现 ６个成员，根据其结构相似性，将它们分为两类， Ｉ类包括 ＰＡＫ１～３，ＩＩ类包括 ＰＡＫ４～６。其中，ＰＡＫ５作为 ＩＩ 类 ＰＡＫ最新发现且研究最少的成员，与肿瘤的发生发展密 切相关。
现代肿瘤医学 ２０１８年 １２月 第 ２６卷第 ２３期 ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ｄｅｃ２０１８，ＶＯＬ２６，Ｎｏ２３
?论 著? ?基础研究?
ＰＡＫ５通过上皮 －间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭
·３７０５·
李 洋，邢 瑶，韩馥伊，李 丰
ＰＡＫ５ｐｒｏｍｏｔｅｓｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ
ｐ２１活化蛋白激酶（ｐ２１ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ，ＰＡＫｓ）是一类保 守的丝氨酸 ／苏氨酸蛋白激酶，参与细胞内多个信号转导通 路，并在肿瘤的发生发展过程中起重 要 作用。在细胞骨架重 组、细胞极性调控、细胞迁移、基因转录调 控 ，特 别 是在细胞
【收稿日期】 ２０１８－０５－０９ 【修回日期】 ２０１８－０６－０４ 【基金项目】 国家自然科学基金资项目（编号：８１６０２５６４） 【作者单位】 中国医科大学基础医学院分子细胞生物学教研室，教