沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用

沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用
王丽思;敖长金;张兴夫
【摘要】本试验旨在研究沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用.采用不同浓度的沙葱多糖培养小鼠腹腔巨噬细胞,测定巨噬细胞的吞噬能力、能量代谢水平、IL-6的含量.结果表明,沙葱多糖能够增强巨噬细胞吞噬能力,提高能量代谢水平,促进IL-6的分泌.除在沙葱多糖对IL-6分泌影响的试验中,沙葱多糖浓度为.400μg/ml,时与空白对照组差异不显著(P>0.05),其余测定指标中,试验组各个浓度均显著高于空白对照组(P<0.05).由试验结果可知,沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用.【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2010(037)004
【总页数】3页(P50-52)
【关键词】沙葱多糖;巨噬细胞;激活作用
【作者】王丽思;敖长金;张兴夫
【作者单位】内蒙古农业大学动物科学学院,呼和浩特,010018;内蒙古农业大学动物科学学院,呼和浩特,010018;内蒙古农业大学动物科学学院,呼和浩特,010018【正文语种】中文
【中图分类】S859
沙葱(Allium Mongolicum Regel)学名蒙古韭,为百合科葱属多年生草本植物,含丰富的植物蛋白、膳食纤维和人体所需矿物质、维生素等多种营养成分。

沙葱不仅营
养价值高,而且具有一定的药用价值。

沙葱能够降血压、降血脂、具有开胃消食之
功效,食之能治赤白痢、肠炎、腹泻、胸痹诸疾,被誉为“菜中灵芝”。

多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成,是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质,因
其具有多种生物活性而越来越引起人们的关注。

张会新等(2009)报道,黑木耳多糖
可明显提高小鼠脾脏和胸腺指数,促进脾脏及胸腺的发育,促进巨噬细胞的吞噬活性。

蔡小玲等(2002)的研究结果发现,红菇多糖有显著降低胆固醇的作用。

丁辉景等(2008)研究结果表明,壳聚糖能提高血清溶菌酶的含量,增强巨噬细胞的吞噬功能。

沙葱多糖是从沙葱中提取的主要生物活性成分之一,张兴夫(2009)研究结果表明,沙
葱多糖能够提高小鼠机体的免疫能力。

为了进一步阐明其作用,本试验研究了沙葱
多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能、能量代谢水平及分泌IL-6的影响。

1 材料与方法
1.1 材料沙葱多糖为内蒙古农业大学动物科学学院营养与免疫研究室分离纯化制得;脂多糖(LPS)、噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)为Sigma公司产
品;RPMI1640为Gibco公司产品;胎牛血清和DPBS为Hyclone公司产品;中性红为天津市博迪化工有限公司产品;IL-6试剂盒为ADL公司产品。

酶标仪(BioTek)、二氧化碳培养箱(Thermo)、离心机(Sigma)、旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2 方法
1.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的制备连续2 d给小鼠腹腔注射5%蛋白胨0.2 mL,第3
天将小鼠脱臼处死,放入75%乙醇中浸泡 1～2 min,消毒。

在超净台中,将小鼠暴露腹膜后,用75%乙醇擦洗腹壁后,向小鼠腹腔注射4℃D-Hank's液5 mL,轻揉腹部2～3 min,从腹腔吸出细胞悬液于离心管中,1500 r/min离心5 min,再用冷的D-Hank's洗涤细胞2～3次,用含10%胎牛血清的 RPMI1640培养液调整细胞浓度
至1×106个/mL。

以每孔100 μL细胞悬液接种于96孔培养板中,将培养板置于37℃、5%CO2培养箱中孵育4 h后,弃去培养基,用PBS洗涤2次,洗去未贴壁的
细胞。

1.2.2 试验分组及处理试验分为空白对照组、阳性对照组和不同剂量的给药组,接
种于96孔培养板中,每组设4个重复孔。

每孔培养液总体积100 μL,给药组添加沙葱多糖的终浓度分别为50、100、200、400、800 μg/mL,阳性对照组含 LPS 终
浓度为20 μg/mL的RPMI1640培养液。

将各试验组均置于CO2培养箱(5%CO2、37℃)中孵育至所需的时间后,根据不同的测定方法进行不同处理,测定各个指标。

1.2.3 沙葱多糖对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响在培养24 h后的巨噬细胞中,每孔加入0.1%中性红生理盐水溶液100 μL,继续培养 20 min,倾去上清液,用PBS缓冲液洗3遍,每孔加入细胞溶解液(冰醋酸∶乙醇=1∶1)200 μL,室温下放置2～3 h,待细胞溶解后,在酶标仪上测定540 nm处的吸光度。

1.2.4 巨噬细胞能量代谢水平的测定采用MTT法。

将按上述条件和过程制备的96孔细胞培养板置37℃、5%CO2孵箱中继续培养24 h,加入MTT(终浓度为5
mg/mL),20 μL/孔,37 ℃孵育 4 h,弃去孔内液体 ,加入DMSO,100 μL/孔 ,充分混匀,并置微型振荡器上振荡5 min,于酶标仪上读取波长570 nm处的吸光值。

1.2.5 IL-6的测定方法采用酶联免疫法(ELISA),具体操作方法按照试剂盒说明书进行。

诱导培养24 h,于酶标仪450 nm处测定吸光度。

1.2.6 统计分析采用SAS 9.0统计软件进行方差分析及多重比较。

2 结果与分析
2.1 沙葱多糖对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响由表1可知,沙葱多糖添加浓度为100 μg/mL时,巨噬细胞吞噬中性红的能力最强,并与其他各组差异显著(P＜0.05),
表明该浓度为此时最适添加浓度。

表1 沙葱多糖不同试验处理组对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响注:同列数据肩标
相同字母表示差异不显著(P＞0.05),肩标不同字母表示差异显著(P＜0.05)。

下同。

组别多糖浓度(μg/mL) 吸光度A值空白组0 0.090±0.003E阳性对照组 20
0.097±0.002ED沙葱多糖组800 0.102±0.003CD 400 0.109±0.007C 200
0.112±0.003CB 100 0.135±0.008A 50 0.120±0.007B
2.2 巨噬细胞能量代谢水平的测定由表2可知,沙葱多糖各组的吸光度值显著高于空白组(P＜0.05),说明沙葱多糖能够显著提高巨噬细胞能量代谢水平,但沙葱多糖各组之间差异不显著(P＞0.05)。

从数值上来看,在沙葱多糖添加浓度为200 μg/mL 时,巨噬细胞的能量代谢水平最高。

表2 沙葱多糖不同试验处理组对巨噬细胞的能量代谢水平的影响组别多糖浓度(μg/mL) 吸光度A值空白组0 0.129±0.015C阳性对照组20 0.164±0.004A沙葱多糖组800 0.147±0.005B 400 0.146±0.013B 200 0.149±0.004B 100
0.147±0.004B 50 0.147±0.005B
2.3 IL-6的测定由表3可知,除沙葱多糖400 μg/mL添加浓度组与空白对照组差异不显著外(P＞0.05),其余各试验组IL-6的分泌量均显著高于空白对照组(P＜0.05),说明沙葱多糖能够促进巨噬细胞分泌IL-6,其中添加浓度为100 μg/mL 时,IL-6的分泌量最多,表明沙葱多糖的添加浓度此时以100 μg/mL 为宜。

表3 沙葱多糖不同试验处理组对巨噬细胞IL-6的影响组别多糖浓度(μg/mL) IL-6(pg/mL)空白组0 126.24±5.00F阳性对照组20 180.05±6.77D沙葱多糖组800 144.26±0.43E 400 135.50±1.50FE 200 227.35±5.83B 100 257.13±9.13A 50 206.57±3.13C
3 讨论
巨噬细胞具有抗原提呈、吞噬消化及分泌多种细胞因子等重要功能,以其在免疫应答和机体防御机制中的重要作用,而受到人们的广泛重视。

未活化的巨噬细胞的吞噬杀伤作用是有限的,巨噬细胞被激活后,其吞噬作用会增强。

戴玲等(2000)报道,蜜环菌多糖能在体外显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。

陈伟等(2005)证实,库拉索芦荟多糖也能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力。

本研究结果
显示,沙葱多糖作用下的小鼠腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬能力显著高于空白对照组(P＜0.05),说明沙葱多糖具有活化巨噬细胞,增强其吞噬能力的作用。

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶并沉积在细胞中,其浓度的高低反映了细胞数量及能量代谢水平。

程安玮等(2007)报道,甘草多糖能激活巨噬细胞,提高其能量代谢水平。

结合上述试验结果,沙葱多糖能够激活巨噬细胞,使其能量代谢更加活跃。

IL-6能够促进B细胞增殖、分化并产生抗体。

许晓燕等(2008)研究发现,黄背木耳多糖能够促进IL-6的分泌。

Tokunaka等(2000)研究报道,念珠菌葡聚糖促进体外小鼠巨噬细胞IL-6的合成。

Sekine等(1995)研究指出,双歧杆菌肽聚糖可激活小鼠腹腔巨噬细胞,使其IL-1、IL-6、TNF-α的mRNA表达增强。

本试验结果表明,沙葱多糖能促进IL-6的分泌,这说明沙葱多糖能够调节免疫功能可能与其影响IL-6的分泌有关。

沙葱多糖能够增强巨噬细胞吞噬中性红的能力,提高能量代谢水平,促进IL-6的分泌,从试验结果可看出,试验组均高于空白对照组。

综合考虑沙葱多糖的最适添加浓度为100 μg/mL。

综上所述,沙葱多糖能够激活巨噬细胞,而活化的巨噬细胞可能在沙葱多糖抗肿瘤、抗病毒等方面起到重要作用。

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