malbac技术原理

malbac技术原理
MALBAC技术，即多重位点扩增基因组单细胞测序技术，是一种单细胞测序技术，可以将单个细胞的基因组DNA进行扩增和测序，从而
实现单细胞基因组测序的目的。

它的原理可以分为以下几个步骤。

第一步：单细胞分离
MALBAC技术的第一步是将单个细胞分离出来，可以采用常规的离心分离、粘贴分离或者微流控芯片分离的方法。

分离出来的单细胞需
要进行后续的扩增和测序。

第二步：整体细胞溶解和逆转录
将单细胞放入含有整体细胞裂解缓冲液的96孔板中，同时加入
逆转录酶和随机引物进行逆转录反应。

整体细胞裂解缓冲液和随机引
物的作用是获得来自单细胞不同位点的DNA模板。

第三步：MARS-MALBAC扩增
MARS-MALBAC是MALBAC技术的关键步骤，它可以扩增单个细胞的全基因组DNA。

MARS-MALBAC包括：首先，将逆转录反应得到的cDNA
进行首轮线性扩增，并加入含有一定比例略微含有错误的引物；第二，将首轮扩增产物作为后续扩增的模板，进行数轮指数扩增，以产生大
量cDNA；最后，进行线性扩增，得到适量的扩增产物。

第四步：测序
最后，对MARS-MALBAC扩增产物进行测序，得到单细胞基因组DNA的序列信息。

这个过程中需要将扩增产物用PCR产物纯化试剂进行纯化，去除空间和杂质的DNA，并进行校验、定量、文库构建和测序。

综上所述，MALBAC技术的原理基于MARS-MALBAC扩增法，其主要思想在于通过多次扩增，产生足够的扩增产物，并引入略微有误的引物，减少扩增的偏好性，并避免某些基因组区域的扩增优先。

通过MALBAC技术，可以对单个细胞的基因组进行全基因组扩增和测序，为
单细胞研究提供了有力的工具。