草金鱼感染拟态弧菌后脾脏和肠黏膜组织的差异蛋白组学
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第４２卷 第 ４期 ２０１８ 年 ４ 月
水 产 学 报
ＪＯＵＲＮ ＡＬ ＯＦ ＦＩＳＨＥＲＩＥＳ ＯＦ ＣＨＩＮＡ
文章 编号 ：１０００．０６１５（２０１８）０４—０５９６－０９
Ｖ Ｏ１．４２．Ｎ Ｏ．４ Ａｐｒ．， ２０１８
ＤＯＩ：１０．１ １９６４￣ｆｃ．２０１６０８１０５１０
草金 鱼感染 拟态 弧菌 后脾脏 和肠 黏膜组 织 的 差 左 异升蛋虫 白口 厶￣．口１－ｔ学子
化、应激反 应、细胞 与膜 骨架组建 、蛋 白质 折叠、氧化还 原及 铁离子运 输等８个 生物学 过程。研究结果为进 一步研 究拟 态弧菌 的致病机制及其与宿主互作机制 奠定 了基础 。
关 键 词 ：草金 鱼 ；拟 态弧 菌 ；脾 脏 ；肠 黏 膜 组 织 ；差 异 蛋 白组
中 图分类号 ：Ｓ ９４１．４２
Ｏ４ １４分 离株 人工感染实验动物草金鱼 ，利用双 向电泳（２－ＤＥ）结合质 谱技术对感染前后脾 脏和肠黏膜组织 的差异蛋 白组 学进行研究 。结果显示 ，感染后脾脏和肠黏膜 组织 中分别
有 １１个和１２个 显著差异表达蛋 白点，经ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ—ＭＳ质谱鉴定 出１９种显著差异表达蛋 白，其 中上调表达蛋 白１０种 ，下调表达蛋 白９种 ， －淀粉酶 、载脂蛋 白Ａ－Ｉ、ｐ－肌 动蛋 白
和过氧化物还原酶２为两种 组织 中共同存在 的显著差异表达蛋 白。ＧＯ注释分析表 明，显
著 差 异 表 达 蛋 白分 别 定位 于 细 胞 外 区、 细 胞 质 、 线 粒体 和 内质 网 ，具 有 结合 、 转运 、催
化 、 免 疫 、 抗 氧 化 和 细胞 骨 架 等分 子 功 能 ，参 与 物质 与 能 量 代 谢 、 细 胞膜 转 运 、 补体 活
４期
陶丽寒 ，等 ：草金 鱼感 染拟 态 弧菌后 脾脏 和肠 黏膜 组 织 的差异 蛋 白组学
５９７
但 其 致 病 分 子 机 制 尚不 清 楚 。在 前 期 研 究 中 以 绿 色 荧 光 蛋 白标 记 拟 态 弧 菌 示 踪 其 在 感 染 鱼 体 内 的 动态 分 布 ，明 确 表 明肠 道 和 脾 脏 是 拟 态 弧 菌 的 主要 作用 靶组 织 ”。在此 基础 上 ，本 研究 进 一 步 采 用 双 向 电 泳结 合 基 质 辅 助 激 光 解 析 电离 飞 行质 谱 技 术（ＭＡＬＤＩ．ＴＯＦ。ＭＳ）对拟 态 弧菌 感 染 前 后 实 验 鱼 脾 脏 与肠 黏 膜 组 织 中蛋 白表 达 变 化 进 行 检 测 与 鉴 定 ，并 对 鉴 定 出 的 显 著 差 异 表 达 蛋 白进行 ＧＯ（Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ）注释 分 析 ，旨在 蛋 白 层 面 上 为 揭 示 拟 态 弧 菌 致 病 机 制 及 其 与 宿 主 互 作机 制 奠定基 础 。
文 献标 志码 ：Ａ
拟 态弧 菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｍｉｍｉｃｕｓ）是 一种 严重 危 害水 产 养 殖 业 的病 原 菌 ，可 引 起 养 殖 鱼 类 腹 水 病 ， 导致 患 病 鱼 类 大批 死 亡 ¨ 】。病 原 菌 感 染是 细菌 与 宿 主相 互作 用 的过 程 ，当病 原 菌 侵 入 机 体 并 大 量 生 长 繁 殖后 ，会 引起 组 织 器 官 病 理 变 化 及 细 胞 内蛋 白表 达 发 生改 变 ，这 些 变 化 可 能 暗示 着 细 菌 与 宿 主 相 互作 用 的本 质 。 因此 ，分 析 拟 态 弧 菌 感 染 后 组 织 细 胞 中差 异 表 达 蛋 白 ，可 为 揭 示 该 菌 的分 子 致 病 机 制 及 其 与 鱼 体 相 互 作 用 机 制提 供有 价值 的信息 。
收 稿 日期 ：２０１６．０８．２１ 修 回 日期 ：２０１７．０３．３０ 资 助 项 目 ：国 家 自然 科 学 基 金 （３１２７２６９６， ３１６７２６９８ 通 信 作 者 ：李 槿 年 ， Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｊｉｎｎｉａｎ２０００＠１６３ ｃｏｍ
ｈｔｔｐ：ｌｌｗｗ ｗ ．ｓｃｘｕｅｂａｏ．ｃｎ
差 异 蛋 白质 组 学 着重 于研 究 特 定 因素 引 起 的不 同样 品 间蛋 白质 组 的差 异 ，揭 示 其 在 生 理 或 者 病理 过 程 中 的变 化 以及 调 控 机 制 ， 同时 获 得对 某些 标 志性 蛋 白的定性 和 功 能分 析 。近 年 来 ，基 于 双 向凝 胶 电泳 （ｔｗｏ．ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏ． ｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－ＤＥ）结 合 质谱 技 术 的 差异 蛋 白质 组学 分 析 已逐 步 应 用 到 水 生 动 物 的 应 激 反 应 研 究
陶丽寒 ， 胡丹 丹 ， 张嘉 俊 ， 陶会竹 ， 李槿 年
ｆ安徽农 业大 学动 物科 技学 院 ，人兽共 患病 重 点实验 室 ，安 徽 合肥 ２３００３６）
摘 要 ：为 探 讨 鱼 类 感 染 拟 态 弧 菌 后 脾 脏 和 肠 黏膜 组 织 蛋 白差 异 变 化 ，本研 究 以拟 态 弧 菌
中 。 如 Ｓｍｉｔｈ等 报 道 将 虹 鳟 （ＯｎｃｏｒｈｙｎｃｈＵＳ ｍｙｋｉｓｓ）鳃 细胞 由等渗 变 为低渗 过 程 中 ，前 载脂 蛋 白 出现 显 著 差 异 表 达 ，推测 该 蛋 白在 鱼类 渗 透 调 节 过程 中起着 重 要 作 用 ；Ｌａｒｓｅｎ等 比较 了大 西 洋鳕 （Ｇａｄｕｓ ｍｏｒｈｕａ）和虹 鳟 在 苯酚 胁 迫下 血 清 蛋 白表 达 图谱 ，发 现 大 西 洋 鳕 差 异 蛋 白表 达更 敏 感 ，且 性 别 表 达 差 异 小 于 虹 鳟 ；Ｒａｔｔａｎａｒｏｊ． ｐｏｎｇ等 用 黄 头病 毒 （ｙｅｌｌｏｗ ｈｅａｄ ｖｉｒｕｓ，ＹＨＶ）感染 凡纳 滨对 虾 ｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ），发 现 ＳＣＰ 钙 结 合 蛋 白在 病 毒 感 染 凡 纳 滨 对 虾 的免 疫 应 答 中 起 着 重要 作 用 。然 而 ，基 于蛋 白组 层 面 上 的拟 态弧 菌感染 机制 的研 究还 未有报 道 。
自１９９１年 Ｔｈｕｎｅ等 首 次 报 道 拟态 弧 菌 引起 养 殖克 氏原 螯 虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）大量死 亡 以 来 ，诸 多 学 者 叫对 其 致 病 性 进 行 了 深 入研 究 ， 探 明该 菌 的致 病 性 是 由黏 附 素 、溶 血 素 、肠 毒 素 、铁 载 体 等 多 种 毒 力 因子 共 同 作 用 的 结 果 ，
水 产 学 报
ＪＯＵＲＮ ＡＬ ＯＦ ＦＩＳＨＥＲＩＥＳ ＯＦ ＣＨＩＮＡ
文章 编号 ：１０００．０６１５（２０１８）０４—０５９６－０９
Ｖ Ｏ１．４２．Ｎ Ｏ．４ Ａｐｒ．， ２０１８
ＤＯＩ：１０．１ １９６４￣ｆｃ．２０１６０８１０５１０
草金 鱼感染 拟态 弧菌 后脾脏 和肠 黏膜组 织 的 差 左 异升蛋虫 白口 厶￣．口１－ｔ学子
化、应激反 应、细胞 与膜 骨架组建 、蛋 白质 折叠、氧化还 原及 铁离子运 输等８个 生物学 过程。研究结果为进 一步研 究拟 态弧菌 的致病机制及其与宿主互作机制 奠定 了基础 。
关 键 词 ：草金 鱼 ；拟 态弧 菌 ；脾 脏 ；肠 黏 膜 组 织 ；差 异 蛋 白组
中 图分类号 ：Ｓ ９４１．４２
Ｏ４ １４分 离株 人工感染实验动物草金鱼 ，利用双 向电泳（２－ＤＥ）结合质 谱技术对感染前后脾 脏和肠黏膜组织 的差异蛋 白组 学进行研究 。结果显示 ，感染后脾脏和肠黏膜 组织 中分别
有 １１个和１２个 显著差异表达蛋 白点，经ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ—ＭＳ质谱鉴定 出１９种显著差异表达蛋 白，其 中上调表达蛋 白１０种 ，下调表达蛋 白９种 ， －淀粉酶 、载脂蛋 白Ａ－Ｉ、ｐ－肌 动蛋 白
和过氧化物还原酶２为两种 组织 中共同存在 的显著差异表达蛋 白。ＧＯ注释分析表 明，显
著 差 异 表 达 蛋 白分 别 定位 于 细 胞 外 区、 细 胞 质 、 线 粒体 和 内质 网 ，具 有 结合 、 转运 、催
化 、 免 疫 、 抗 氧 化 和 细胞 骨 架 等分 子 功 能 ，参 与 物质 与 能 量 代 谢 、 细 胞膜 转 运 、 补体 活
４期
陶丽寒 ，等 ：草金 鱼感 染拟 态 弧菌后 脾脏 和肠 黏膜 组 织 的差异 蛋 白组学
５９７
但 其 致 病 分 子 机 制 尚不 清 楚 。在 前 期 研 究 中 以 绿 色 荧 光 蛋 白标 记 拟 态 弧 菌 示 踪 其 在 感 染 鱼 体 内 的 动态 分 布 ，明 确 表 明肠 道 和 脾 脏 是 拟 态 弧 菌 的 主要 作用 靶组 织 ”。在此 基础 上 ，本 研究 进 一 步 采 用 双 向 电 泳结 合 基 质 辅 助 激 光 解 析 电离 飞 行质 谱 技 术（ＭＡＬＤＩ．ＴＯＦ。ＭＳ）对拟 态 弧菌 感 染 前 后 实 验 鱼 脾 脏 与肠 黏 膜 组 织 中蛋 白表 达 变 化 进 行 检 测 与 鉴 定 ，并 对 鉴 定 出 的 显 著 差 异 表 达 蛋 白进行 ＧＯ（Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ）注释 分 析 ，旨在 蛋 白 层 面 上 为 揭 示 拟 态 弧 菌 致 病 机 制 及 其 与 宿 主 互 作机 制 奠定基 础 。
文 献标 志码 ：Ａ
拟 态弧 菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｍｉｍｉｃｕｓ）是 一种 严重 危 害水 产 养 殖 业 的病 原 菌 ，可 引 起 养 殖 鱼 类 腹 水 病 ， 导致 患 病 鱼 类 大批 死 亡 ¨ 】。病 原 菌 感 染是 细菌 与 宿 主相 互作 用 的过 程 ，当病 原 菌 侵 入 机 体 并 大 量 生 长 繁 殖后 ，会 引起 组 织 器 官 病 理 变 化 及 细 胞 内蛋 白表 达 发 生改 变 ，这 些 变 化 可 能 暗示 着 细 菌 与 宿 主 相 互作 用 的本 质 。 因此 ，分 析 拟 态 弧 菌 感 染 后 组 织 细 胞 中差 异 表 达 蛋 白 ，可 为 揭 示 该 菌 的分 子 致 病 机 制 及 其 与 鱼 体 相 互 作 用 机 制提 供有 价值 的信息 。
收 稿 日期 ：２０１６．０８．２１ 修 回 日期 ：２０１７．０３．３０ 资 助 项 目 ：国 家 自然 科 学 基 金 （３１２７２６９６， ３１６７２６９８ 通 信 作 者 ：李 槿 年 ， Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｊｉｎｎｉａｎ２０００＠１６３ ｃｏｍ
ｈｔｔｐ：ｌｌｗｗ ｗ ．ｓｃｘｕｅｂａｏ．ｃｎ
差 异 蛋 白质 组 学 着重 于研 究 特 定 因素 引 起 的不 同样 品 间蛋 白质 组 的差 异 ，揭 示 其 在 生 理 或 者 病理 过 程 中 的变 化 以及 调 控 机 制 ， 同时 获 得对 某些 标 志性 蛋 白的定性 和 功 能分 析 。近 年 来 ，基 于 双 向凝 胶 电泳 （ｔｗｏ．ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏ． ｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－ＤＥ）结 合 质谱 技 术 的 差异 蛋 白质 组学 分 析 已逐 步 应 用 到 水 生 动 物 的 应 激 反 应 研 究
陶丽寒 ， 胡丹 丹 ， 张嘉 俊 ， 陶会竹 ， 李槿 年
ｆ安徽农 业大 学动 物科 技学 院 ，人兽共 患病 重 点实验 室 ，安 徽 合肥 ２３００３６）
摘 要 ：为 探 讨 鱼 类 感 染 拟 态 弧 菌 后 脾 脏 和 肠 黏膜 组 织 蛋 白差 异 变 化 ，本研 究 以拟 态 弧 菌
中 。 如 Ｓｍｉｔｈ等 报 道 将 虹 鳟 （ＯｎｃｏｒｈｙｎｃｈＵＳ ｍｙｋｉｓｓ）鳃 细胞 由等渗 变 为低渗 过 程 中 ，前 载脂 蛋 白 出现 显 著 差 异 表 达 ，推测 该 蛋 白在 鱼类 渗 透 调 节 过程 中起着 重 要 作 用 ；Ｌａｒｓｅｎ等 比较 了大 西 洋鳕 （Ｇａｄｕｓ ｍｏｒｈｕａ）和虹 鳟 在 苯酚 胁 迫下 血 清 蛋 白表 达 图谱 ，发 现 大 西 洋 鳕 差 异 蛋 白表 达更 敏 感 ，且 性 别 表 达 差 异 小 于 虹 鳟 ；Ｒａｔｔａｎａｒｏｊ． ｐｏｎｇ等 用 黄 头病 毒 （ｙｅｌｌｏｗ ｈｅａｄ ｖｉｒｕｓ，ＹＨＶ）感染 凡纳 滨对 虾 ｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ），发 现 ＳＣＰ 钙 结 合 蛋 白在 病 毒 感 染 凡 纳 滨 对 虾 的免 疫 应 答 中 起 着 重要 作 用 。然 而 ，基 于蛋 白组 层 面 上 的拟 态弧 菌感染 机制 的研 究还 未有报 道 。
自１９９１年 Ｔｈｕｎｅ等 首 次 报 道 拟态 弧 菌 引起 养 殖克 氏原 螯 虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）大量死 亡 以 来 ，诸 多 学 者 叫对 其 致 病 性 进 行 了 深 入研 究 ， 探 明该 菌 的致 病 性 是 由黏 附 素 、溶 血 素 、肠 毒 素 、铁 载 体 等 多 种 毒 力 因子 共 同 作 用 的 结 果 ，