RP-HPLC法检测CN10蛋白的PEG化修饰率及含量

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Ｌａｎｚｈｏｕ７３００４６ＩＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＪｉａｎｇＬｉｎ，Ｅ — ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｌｉｎ６２０＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｉｍｐｌｅａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｍｏｄｉｉｆｃａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＰＥＧｙｌａｔｅｄＣＮｌｎ
的蛋白含量，根据ＰＥＧ化修饰前后ｃＮ．。蛋白量效关系的变化推断ｃＮ。蛋白的ＰＥＧ化修饰率。结果
ＰＥＧ化修
建立
饰前后的ＣＮ。蛋白经ＴＳＫｇｅｌＯｃｔａｄｅｃｙｌ一４ＰＷ色谱柱层析均能达基线分离，当用２１４ｎｍ波长检测时，ＣＮ。蛋白浓度以及ＰＥＧ修饰后的ｃＮ。蛋白均与其对应峰面积呈现良好的线性关系（ｒ２＝０．９９９５８；ｒ０．９９９６７）。结论
ＤｏＩ：１０．１３３０９／ｊ．ｃｎｋｉ．ｐｍｉ．２０１５．０１．００２
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｏｄｉｉｃｆａｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆＰＥＧｙｌａｔｅｄＣＮ１０ｂｙＲＰ．ＨＰＬＣ
ｐｒｏｔｅｉｎ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＥＧｙｌａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｒｅｖｅｒｓｅｄ — ｐｈａｓｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｍａｒｎｃｅ
・
８・
微生物学免疫学进展
２０１５年２月第４３卷第１期
ＰｒｏｇｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，Ｆｅｂ．２０１５，Ｖ０１．４３Ｎｏ．１
・
论
著・
Hale Waihona Puke ＲＰ — ＨＰＬＣ法检测ＣＮ１ｏ蛋白的ＰＥＧ化修饰率及含量
ＬＩＡＮＧＬｉｎｇ — ｙｕ，ＷＡＮＧＷａｎ — ｍ，ＧＵＯＹｕ — ｉｒｎｇ，ＬＵＪｉａｎ，ＹＡＮＧＪｕｎ，ＪＩＡＮＧＬｉｎ
ＬａｎｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＣｏ．－Ｌｔｄ．，ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＶａｃｃｉｎｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ。
（ＴＦＡ）、５％乙腈的水溶液作为Ａ相溶液，以含０．１％ＴＦＡ的乙腈作为Ｂ相溶液，在５０℃柱温条件采用分段线性洗脱的方式分离蛋白，并考察ｃＮ。蛋白以及ＰＥＧ化修饰后ｃＮ蛋白的量效关系，根据外标法检测ｃＮ。和ｃＮＰＥＧ
梁凌宇，王婉茹，郭玉婷，陆俭，杨军，蒋琳
兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心，甘肃兰州７３００４６
摘要：目的建立一种简单有效的测定ＣＮ。蛋白ＰＥＧ化修饰率的方法，用于ＰＥＧ化修饰工艺中的质量控制。方法采用反相高效液相色谱（ＲＰ — ＨＰＬＣ）法，以ＴＳＫｇｅｌＯｃｔａｄｅｃｙｌ一４ＰＷ作为色谱分离柱，以含０．１２％三氟乙酸
ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ — ＨＰＬＣ）ｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎｉｓＴＳＫｇｅｌＯｃｔａｄｅｃｙｌ一４ＰＷｃｈｒｏ —
化修饰工艺的监测。
了一种简单快速的检测ｃＮ．。蛋白ＰＥＧ化修饰率的方法，此方法具有较高的准确性及专属性，可用于ＣＮ．。的ＰＥＧ
关键词：睫状神经营养因子；反相高效液相色谱；ＰＥＧ化修饰；含量检测中图分类号：Ｒ４４６．６９文献标志码：Ａ文章编号：１００５ — ５６７３（２０１５）０１ — ０００８．０５