热变性法提纯猪血SOD的工艺优化

白对 照组 的提 高了 ７ ． ％ ， ８ ４ 杂蛋 白沉淀 量也 提 高 了 ２ ． ％ ； １ ２ 而在 这 个 Ｃ “和 ｚ “ 浓度 下 ， ｕ ｎ 热 变性 温度 ６ ℃ 时 ，Ｏ ５ Ｓ Ｄ的 比活力最 高 ， 杂蛋 白的 沉淀 效果也较 好 。
关键词 ：猪血 ；Ｏ 热 变性 法 Ｓ Ｄ； 中图分 类号 ： Ｓ２ ９ Ｔ ０
效 果要 远远优 于氯 盐 ； 对锌 离子 来说 ， 两种 盐 的效果 相 差无几 ， 是 总体 来 说 还 是 硫 酸 盐效 果 稍 好 。故 但 以下 实验 以铜 和锌 的硫 酸盐来 做 。
２ ２ 铜 离 子 、 离子 的浓 度梯 度对 Ｓ Ｄ酶活 的 ． 锌 Ｏ
影 响
离心 １ ｍｉ， 测上 清液 酶活力 。 ５ ｎ检
１ ４ 实验方 法 ．
１４ １ Ｓ ． ． ＯＤ 活 力 的 测 定 方 法
尤 尼科 （ 上海 ） 仪器有 限公 司；
Ｎ ｋｎ显微镜 （ Ｓ０ ）离心机 ； ｉｏ Ｙ １０ ； 电子天平。
金属 酶 。它能够 清 除超氧 阴离 子 自由基 （ ）， Ｏ ． 从 而有 效地 防御 活性 氧 对 生物 体 的毒害 作 用 ， 强 机 增 体抗 辐射 损伤 能力 ， 并可 以预 防衰老 ， 在某些 疾病 的
铜 、 离子 共 同 作用 时 其 浓 度梯 度 的影 响 ： 、 锌 铜 锌离 子浓 度分 别取 ０ １ ２ ３ ｍｏ Ｌ 两 者 交 叉 复 配 、 、 、 ｌ ， ｍ ／ 后， ６ 经 ０℃ 保 温 处 理 １ ｎ后 ， ０ ｒｉ ０ｍｉ ３ ０ｒａ ｎ离 心 ０ ／ １ ｉ ， 集沉 淀测 干重并 检测 上清 液酶 活力 。 ５ ｎ收 ｍ
文章编 号 ：０ ９— ８ １ ２ ０ ） １ ０ ０ ０ １ ０ ４ ８ （ ０ ８ ０ — ０ ８— ３
热 变性 法 提纯 猪 血 Ｓ Ｄ的工 艺 优 化 Ｏ
刘 晓红 ， 向东 ， 李 刘婷 ， 帼萍 周
（ 武汉工业学院 生物与制药工程 系， 湖北 武汉 ４ ０ ２ ） ３０ ３
摘
要 ： 热 变性 法提 取猪 血 中 Ｓ Ｄ工 艺 中， 在 Ｏ 比较 了 Ｃ “ 和 ｚ “对 Ｓ Ｄ 的保 护 作 用和 沉 淀 ｕ ｎ Ｏ
杂蛋 白的 作 用 ， 验 表 明 ： 两种 离子 的硫 酸 盐 对 Ｓ Ｄ 的保 护 效 应 要 优 于氯 盐 ； Ｃ “ 和 试 这 Ｏ 当 ｕ
Ｚ 一 浓度 分别 为 ２ ｏ Ｌ和 ３ ｏ Ｌ共 同作 用 时对 Ｓ Ｄ 的保 护 效果 最好 ， Ｏ 比 活力 比 空 ｎ ｍｍ ｌ ／ ｍｍ ｌ ／ Ｏ ＳＤ
１ １ 材 料 来 源 新 鲜 猪 血 经 抗 凝 （ 檬 酸 钠 ） ． 柠 处
酶 活力单 位 定 义 ： ２ ℃ 恒 温 条 件下 ， 毫 升 在 ５ 每 反应 液 中 ， 每分 钟抑制 邻 苯 三 酚 自氧化 速 率达 ５ ％ ０ 的酶量 定义 为一个 酶活 力单位 。
１ ４ ２ 对铜锌 盐 类的选择 ，．
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第２ ７卷第 １ 期 ２０ ０ ８年 ３月
武
汉
工
业
学
院
学
报
Ｖｏ ７Ｎｏ Ｌ２ ．１ Ｍ ａ－２ ｏ８ ｌ ０ ．
Ｊｕ ａ ｏ Ｗ ｕ ａ Ｐ ｌｔｃ ｎｃ Ｕｎｖ ｒｉ ｏｒ ｌ ｆ ｎ ｈｎ ｏｙｅ ｈ ｉ ｉｅｓｔ ｙ
收稿 １期 ： ０ ７ ）－ ３ ２ ０ ４９２ ８ 作者简介 ：刘晓红 （９ ０一） 女 ， １７ ， 湖北省武汉市人 ， 实验师。
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１ 期
刘晓红 ， 向东 ， 李 刘婷 ， ： 等 热变性法提纯猪血 Ｓ Ｄ的工艺优化 Ｏ
９
铜／ 酸锌 ， ６ 硫 经 ０℃保 温 处 理 １ ｍｉ ， ０ ｍｉ ０ ｎ后 ３０ ０ ／ ｎ ｒ
文 献标识 码 ： Ａ
０ 引言
超 氧化 物歧 化 酶 （Ｓｐｒｘ ｅｄｓ ｕａｅ ， 称 ｕ ｅ ｉ ｉ ｔ ） 简 ｏｄ ｍ ｓ
Ｓ Ｄ， Ｏ 是一 种广 泛 存 在 于 好 氧微 生 物 和 动 植 物 中 的
１ ３ 主要 实验仪器 与设 备 ．
ｐ Ｓ３ Ｈ 一Ｃ数字 酸 度 计 ； 力 加 热 搅拌 器 ； Ｊ２０ 磁 ＷＦ７０ 型可见分光光度计 一
治疗 中有 良好 的疗 效 。现 在 Ｓ Ｄ 已用 于 化妆 品、 Ｏ 食 品和 医药领 域 。 目前 已开 发 和 正在 开 发 的 Ｓ Ｄ资 Ｏ 源有 动物 血 液 、 刺梨 、 叶 、 蔬及 微 生物 等 。动 物 麦 果 血液是 国 内外 正在 生产 Ｓ Ｄ 的主要 资源 ， Ｏ 国外最 常
理、 冻融搅 拌后 的溶血 液 ， 显微镜镜 检显示 其 红细胞
的溶血率 ＞ ０ 。 ９％
１ ２ 试剂 ．
分别 向溶血液 中加入硫酸铜 、 氯化铜 、 酸锌和氯 硫 化锌 ４种盐 ， 浓度 均为 ３ ｍ ｌＬ 经 ６ ℃保 温处 理 其 ｍ ｏ ， ０ ／
１ ｍｎ ， ０ ｒｍ ｎ ０ ｉ后 １ ００／ ｉ 离心 ５ ｉ ， ２ ｍｎ 检测上清液测 定 酶 活 力 ， 活 酶 力按 以下公 式进行 计算 ：
ｘｌ ０ Ｏ％
删
：
用的是 牛 、 的血 液 ， 羊 国内则 因为猪 血资源 丰 富所 以
更常用 猪血 ” 。
× 反应 液 总体 积
、 ，
样 液稀 释倍 数 样液 体积
１ 材料 与方 法
１４ ３ 铜 离子 、 离子 浓度梯 度 的优化 ： ．． 锌
邻 苯 三 酚 （ 析纯 ） 分 ；硫 酸 铜 、 酸 锌 、 硫 氯化 铜 、 氯化 锌 、０ ｏ ＬＴｉ盐 酸缓 冲液 （ Ｈ ８ ２ 和盐 酸 ５ ｍｍ ｌ ｒ ／ ｓ ｐ ． ）
等均 为普通 化学 纯试 剂 。
铜、 锌离子单独作用 时其浓 度梯度 的影 响： 向 ５ｍ ０ Ｌ溶 血液 中分 别 加 入 ３ ６ ９ １ ｏ Ｌ的 硫 酸 、 、 ２ ｍｍ ｌ ／