ARK5在肝细胞肝癌对多柔比星耐药性中的作用机制的研究

ARK5在肝细胞肝癌对多柔比星耐药性中的作用机制的研究
实验目的腺苷酸活化蛋白激酶相关激酶5(ARK5)在包括肝细胞肝癌(HCC)在内的多种肿瘤内均高表达。

肿瘤细胞内ARK5高表达的病人的预后较差。

ARK5可以促进肿瘤的增殖,侵袭,迁移,复发,但是其与肿瘤耐药性的关系尚不清楚。

本研究的目的就是观察ARK5在肝癌对多柔比星耐药性中的作用及其内在机制。

材料与方法本研究通过多柔比星处理Huh7, Hep3B, SNU449和SNU387四种肝癌细胞系,利用细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测肝癌细胞系的细胞活力,蛋白免疫印迹技术(Western-blot)、免疫荧光技术检测细胞内ARK5、上皮间质细胞转化相关蛋白的表达情况,细胞增殖检测试剂盒(EdU试验)检测肝癌细胞系的增殖情况。

ARK5 siRNA干扰肝癌细胞系内ARK5的表达,观察Huh7, Hep3B, SNU387, SNU449四种细胞系的细胞活力、增殖情况以及细胞内上皮间质化相关蛋白的表达情况。

为探讨ARKS影响肝癌耐药的机制,我们首先利用多柔比星处理肝癌细胞系,再用ARK5 siRNA干扰肝癌细胞系内ARK5的表达,Wetern-blot检测EMT相关蛋白的表达；利用TWIST SiRNA干扰肝癌细胞系内TWIST的表达,再分别给予多柔比星和多柔比星KARK5 siRNA处理肝癌细胞系,并检测Huh7, Hep3B, SNU387, SNU449四种细胞系对多柔比星的敏感性。

为了明确ARK5在低氧诱导的MT的作用,ARK5 siRNA处理的低氧条件培养的肝癌细胞系Huh7、Hep3B,并检测其细胞活力、上皮间质转化相关蛋白。

结果实验结果发现：(1)ARK5的表达与肝癌细胞系对多柔比星的敏感性呈负相关；(2)ARK5敲除后可显著增加肝癌细胞系对多柔比星的敏感性；(3)ARK5可
调控EMT相关蛋白的表达；(4)干扰多柔比星处理后的肝癌细胞系中ARK5的表达,可以逆转肝癌细胞系的EMT；(5)ARK5通过TWSIT通路调控肝癌细胞系对多柔比星的耐药性；(6)干扰低氧状态下培养的肝癌细胞系内ARK5的表达,可以逆转低氧诱导的EMT。

结论：ARK5的高表达可明显降低肝癌细胞系对多柔比星的敏感性,抑制肝癌细胞系内ARK5的表达不仅可以显著增加肝癌细胞对多柔比星的敏感性,还能逆转多柔比星和低氧诱导的肝癌细胞对多柔比星的耐药性。

ARK5影响肝癌对多柔比星耐药性机制为ARK5的低表达抑制TWIST通路,引起E-cadherin的表达上调和Vimentin的表达下调,从而抑制肝癌细胞系的上皮间质转化。