十全大补酒中川芎的鉴别方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610752313.1
(22)申请日 2016.08.29
(71)申请人 贵州信邦制药股份有限公司
地址 550100 贵州省黔南布依族苗族自治
州罗甸县龙坪镇解放路96号
(72)发明人 包雪爱　
(74)专利代理机构 北京联创佳为专利事务所
(普通合伙) 11362
代理人 郭防
(51)Int.Cl.
G01N 30/90(2006.01)
(54)发明名称
十全大补酒中川芎的鉴别方法
(57)摘要
本发明公开了一种十全大补酒中川芎的鉴
别方法，是以川芎对照药材和欧当归内酯A对照
品为对照，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展
开剂的薄层色谱法。

本发明提供的一种十全大补
酒中川芎的鉴别方法，操作简单，可控性强，能够
实现高效鉴别十全大补酒中川芎成分。

本发明的
方法，分离度高，重现性好，专属性强，灵敏度高，
稳定性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家薄层
板和温度、湿度条件均不影响。

本发明鉴别方法
能够对骨痛药酒中川芎成分进行准确、全面、科
学有效的鉴别，提升了质量检测标准，进一步确
保了产品质量的稳定、安全、
有效。

权利要求书2页 说明书5页 附图2页CN 106290697 A 2017.01.04
C N 106290697
A
1.十全大补酒中川芎的鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法是以川芎对照药材和欧当归内酯A对照品为对照，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂的薄层色谱法。

2.根据权利要求1所述的十全大补酒中川芎的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品加乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加乙醚加热回流提取，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求2所述的十全大补酒中川芎的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品20mL～30mL，加30mL～50mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇1～3mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加20mL～30mL乙醚，加热回流提1～2h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液9～11μL、对照品溶液9～11μL、供试品溶液8～12μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

4.根据权利要求2或3所述的十全大补酒中川芎的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品20mL，加30mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加20mL乙醚，加热回流提1h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液10μL、对照品溶液10μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑
点。

十全大补酒中川芎的鉴别方法
技术领域
[0001]本发明涉及十全大补酒中川芎的鉴别方法，具体属于中药检测技术领域。

背景技术
[0002]十全大补酒是由党参、白术(炒)、茯苓、甘草(蜜炙)、当归、川芎、白芍(炒)、熟地黄、黄芪(蜜炙)和肉桂制成。

辅料为白酒、蔗糖。

本品的功能是温补气血。

方中熟地黄补血滋阴，填精生髓；党参补脾健中，益气生血，阳生阴长，共为君药。

白术健脾益气；茯苓健脾利湿；黄芪健脾益气升阳，合以助君药开气血生化之源，黄芪补气健中；当归、白芍补养阴血，以阴配阳；肉桂补火助阳，鼓舞气血生长，共为臣药。

川芎行气活血，使补而不滞，为佐药。

甘草益气，调和诸药，为使药。

十药相合，共奏温补气血之功。

现有的十全大补酒质量标准中，未涉及到川芎的鉴别，因此，研究一种操作方便，能够准确鉴别十全大补酒中川芎的方法，有利于提升十全大补酒的质量检测标准，显得尤为必要。

发明内容
[0003]为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种十全大补酒中川芎的鉴别方法，可以有效鉴别十全大补酒中川芎成分，高效、准确、重复性好。

[0004]本发明的十全大补酒，是由党参80g、茯苓80g、麸炒白术80g、炙甘草40g、熟地黄120g、白芍(炒)80g、当归120g、川芎40g、炙黄芪80g和肉桂20g制成的。

以上十味，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的的渗漉法(《中国药典》2015年版通则0189)，用白酒17200mL 作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3mL的速度缓缓渗漉，收集漉液，加入蔗糖1720g，搅匀，静置，滤过，即得。

[0005]为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0006]十全大补酒中川芎的鉴别方法，是以川芎对照药材和欧当归内酯A对照品为对照，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂的薄层色谱法。

[0007]前述十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0008](1)供试品溶液的制备：取本品加乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇使其溶解，作为供试品溶液；
[0009](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加乙醚加热回流提取，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0010](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0011](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

[0012]具体地，前述十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0013](1)供试品溶液的制备：取本品20mL～30mL，加30mL～50mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇1～3mL使其溶解，作为供试品溶液；
[0014](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加20mL～30mL乙醚，加热回流提1～2h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0015](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0016](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液9～11μL、对照品溶液9～11μL、供试品溶液8～12μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

[0017]优选地，前述十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0018](1)供试品溶液的制备：取本品20mL，加30mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
[0019](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加20mL乙醚，加热回流提1h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0020](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0021](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液10μL、对照品溶液10μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

[0022]为了确保本发明鉴别方法科学、合理、可行，对本发明的鉴别方法进行了研究和考察。

[0023]川芎，常用于活血行气，祛风止痛，川芎辛温香燥，走而不守，既能行散，上行可达巅顶；又入血分，下行可达血海。

活血祛瘀作用广泛，适宜瘀血阻滞各种病症；祛风止痛，效用甚佳，可治头风头痛、风湿痹痛等症。

昔人谓川芎为血中之气药，殆言其寓辛散、解郁、通达、止痛等功能。

川芎行气活血，使补而不滞，为本方中佐药。

本实验将选取川芎对照药材和欧当归内酯A对照品作为对照，通过乙醚提取本品中川芎成分，对川芎药材进行薄层鉴别，并考察不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对本品中川芎药材薄层色谱的影响。

试验结果表明：以川芎对照药材和欧当归内酯A对照品为对照，以正己烷-乙酸乙酯＝3～6︰1～2为展开剂的薄层色谱法特征明显，专属性强，可作为本品中川芎的鉴别方法。

1、仪器与试剂
[0024]MS304s/01电子天平(METTLER TOLEDO(梅特勒-托利多))、P-1型薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂有限公司)、硅胶GF254薄层板(青岛海洋化工)、5ul薄层点样毛细管(天津市思利达科技有限公司)。

[0025]十全大补酒(130901、130902、140201，江苏信邦制药有限公司)、川芎对照药材(中
国药品生物制品检定所)、欧当归内酯A(中国药品生物制品检定所)、正己烷(西陇化工股份有限公司，分析纯)、乙酸乙酯(西陇化工股份有限公司，分析纯)、乙醚(天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯)、甲醇(西陇化工股份有限公司，分析纯)。

[0026]2、鉴别方法的考察
[0027] 2.1、供试品溶液的制备方法
[0028]现有技术中，川芎鉴别时供试品溶液是通过加热回流的方式进行提取后加乙酸乙酯进行溶解制备得到的。

本发明供试品溶液是采用乙醚振摇提取后用甲醇溶解得到的。

与现有技术相比，提取时间短，提取效果好。

使用两种方法分别制备供试品溶液，在同等条件下进行鉴别，采用现有技术的一组分离度较差，而采用本发明方法的一组分离度高，重现性好。

[0029] 2.2、最佳点样量的考察
[0030]分别吸取步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液7、8、9、10、11、12、14μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。

其中，供试品10μL点样量效果最佳，当点样量大于12μL时，供试品溶液位置斑点出现拖尾现象，点样量低于8μL时，供试品溶液位置斑点不明显；对照药材溶液点样量9～11μL时效果好，尤其是在10μL时效果最佳；对照品溶液点样量9～11μL时效果好，尤其是在10μL时效果最佳，故选择供试品溶液点样量为8～12μL，最佳点样量10μL；对照药材溶液点样量9～11μL，最佳点样量10μL；对照品溶液点样量9～11μL，最佳点样量10μL。

[0031]3、专属性考察
[0032]吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照药材溶液10μL、步骤(3)中对照品溶液10μL、川芎和当归阴性对照溶液10μL(溶液中同时缺少川芎和当归成分)，按供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱中相应位置上无斑点，表明该方法的专属性良好。

如图1所示。

[0033]4、耐用性考察
[0034] 4.1不同厂家薄层板
[0035]吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照药材溶液10μL、步骤(3)中对照品溶液10μL、川芎和当归阴性对照溶液10μL(溶液中同时缺少川芎和当归成分)，按供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点样，更换不同厂家的薄层板，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱中相应位置上无斑点，且更换不同厂家薄层板后，各薄层板之间无显著差异，表明更换不同厂家薄层板对川芎的薄层鉴别无影响。

如图2所示。

[0036] 4.2温湿度
[0037]吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照药材溶液10μL、步骤(3)中对照品溶液10μL、川芎和当归阴性对照溶液10μL(溶液中同时缺少川芎和当归成分)，按供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点样，变换不同温湿度条件，以正己烷-
乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱中相应位置上无斑点，且变换不同温湿度条件后，各薄层板之间无显著差异，表明变换不同温湿度的薄层板对川芎的薄层鉴别无影响。

如图3所示。

[0038]本发明的有益之处在于：本发明提供的一种十全大补酒中川芎的鉴别方法，操作简单，可控性强，能够实现高效鉴别十全大补酒中川芎成分。

本发明的方法，分离度高，重现性好，专属性强，灵敏度高，稳定性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家薄层板和温度、湿度条件均不影响。

本发明鉴别方法能够对骨痛药酒中川芎成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定、安全、有效。

附图说明
[0039]图1是本发明的十全大补酒中川芎的专属性鉴别色谱图；
[0040]图2是十全大补酒中川芎鉴别时采用不同薄层板的色谱图；
[0041]图3是十全大补酒中川芎鉴别时不同温湿度条件下的色谱图；
[0042]图中附图标记的含义：图1～图3:1-供试品批号130901，2-供试品批号130902,3-供试品批号140201,4-川芎对照药材，5-欧当归内酯A对照品，6-川芎和当归阴性对照；图2：A-青岛海洋硅胶GF254薄层板(规格：100×100mm),B-烟台市化学工业研究所硅胶GF254薄层板(规格：100×100mm)；图3：A-温度28.5℃、湿度32％，B-温度3.5℃、湿度72％。

具体实施方式
[0043]以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。

[0044]实施例1
[0045]十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0046](1)供试品溶液的制备：取本品25mL，加40mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为供试品溶液；
[0047](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加25mL乙醚，加热回流提1.5h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0048](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0049](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液9μL、对照品溶液9μL、供试品溶液8μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝3︰2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

[0050]实施例2
[0051]十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0052](1)供试品溶液的制备：取本品30mL，加50mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇3mL使其溶解，作为供试品溶液；
[0053](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加30mL乙醚，加热回流提2h，滤过，
滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0054](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0055](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液11μL、对照品溶液11μL、供试品溶液12μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝6︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

[0056]实施例3
[0057]十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0058](1)供试品溶液的制备：取本品20mL，加30mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
[0059](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加20mL乙醚，加热回流提1h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0060](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0061](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液10μL、对照品溶液10μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

[0062]实施例4
[0063]十全大补酒中川芎的鉴别方法，包括以下步骤：
[0064](1)供试品溶液的制备：取本品22mL，加35mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为供试品溶液；
[0065](2)对照药材溶液的制备：取川芎对照药材1g，加28mL乙醚，加热回流提1.8h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为对照药材溶液；
[0066](3)对照品溶液的制备：取欧当归内酯A对照品置于棕色瓶中，加甲醇制成每1mL中含有0.1mg欧当归内酯A对照品的溶液，作为对照品溶液；
[0067](4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液10μL、对照品溶液9μL、供试品溶液11μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝5︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

图1
图2
图3。