L615小鼠中期染色体的银染研究1)

ｊ
１ １
８
９ １ ０
２
分裂相中， ｇＮ Ｒ的染色体数在不同个体 有Ａ－ Ｏ ，
和同一个体内是有变化的，其范围为 ４ 条。 －８ 但以６条有 Ａ － Ｒ 的染色体的分裂相为最 ｇＮＯ ， 多， ０ 务。在 ２ 只正常 ６５ 占６． ８ ０ １ 小鼠中， １ 有 ８
小计
１ １ １ ２
１３
１ ５ １ ２
７３ １ ０
Ｋ ｓ ， 对白 ｕ ｋＪ６ 血病模型 Ｌ ０ ｙ ． ［ ｌ １１小鼠细胞株进 ２
行的银染研究中观察到，细胞中期分裂相中有
水） 冲洗去盖片及染液， 再以８ 倍稀释的姬姆萨
４ 条染色体有 Ａ－ Ｏ ， －６ ｇＮ Ｒ，除一个Ａ－ Ｏ ｇＮ 凡
位于臂内， 其余都靠近着丝点。至今， 有关白血 病的癌细胞的银染研究资料尚少，细胞癌变与
核糖体基因之间的关系还不 清楚。
染液染色 １ ．分钟， －１ ５ 以无离子水充 分冲洗， 干后镜检。 选择银染充分、 染色体数目完整的
细胞中期分裂相计数或照相。每个正常６ 巧小
鼠标本观察计数 １ 个以上细 胞 中期分裂相。 ０ 每个Ｌ １ 小鼠标本至少观察计数 ３ 个细胞中 ６５ ０
期分裂相。
可移植性小鼠白血病模型 Ｌ １ ６５是中国医 学科学院血液病研究所培养的一株网织细胞型
其它 Ａ－ Ｏ ， ｇ Ｒ 大得多。而正常细胞内的Ａ － Ｎ ｇ Ｎ Ｒ 的相对大小虽有差异， Ｏ， 但并不悬殊； ３ （）
表 ２ ６５小鼠的店细 Ｌ １ 胞与正常细胞中 Ａ － Ｏ 。 ＇ ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇
观 察分 裂 性别 相 总数
白血病试验模型． 在它的 白血病细胞里 ，已经
发现与细胞癌变有关的 Ｂ ｊ标记染色体［ 为 Ｗ 。 了进一步探索细胞的癌变机理，我们对正常的 ６５小鼠以及 Ｌ １ １ ６５小鼠的细胞中期分裂相染
色体进行了银染研究。
（） 带：参照白石行正［的 Ｂ 法， ３Ｃ 一 ［ ｚ ］ ， ‘ 对 处理时间作了适当变动。载片标本以 ０ Ｎ 盐 ． ２ 酸室温处理 １ 小时左右， 以无离子水充分冲洗；
１ ０ １１ １ ２ １ ３ １ 斗
１
弓
６ ５ １ ４ 斗 ５ ８ １ ７８ ６ ．
，２ ０
体）其位置相当于第 １ 染色体（ ， ２ 见图版Ｉ２ｏ Ｉ） ， 同一分裂相中其它Ａ－ Ｏ ： ｇＮ Ｒ的大小、 位置如正
黑斑。这样的染色体在正常 ６ ５小鼠的细胞和 １
（ 见表２， ） 其百分比 为，１ 分别 ２ １ ３－
在对Ｌ １ 小鼠的 Ａ － Ｏ ， ６５ ｇＮ Ｒ的观察中， 雌、
５ ２ ２ ４ ３ ９ １ ２ ５．
小计 合计
％
８ ２ １５ ５ ６ ８ ０．
２８ ５ ４
１
２１ ２ ．
１‘ ・ “
阵
（ 二）白 血病Ｌ １ 小鼠的 Ａ － Ｏ ， ６５ ｇＮ Ｒ
对１只 Ｌ １ ４ ６５小鼠的 Ａ － Ｏ ， ｇＮ Ｒ 的观察结果见
表 ２ 我们观察到两类银染特性不同的骨髓细 。
我们从第二类细胞中期分裂相中，发现一 条具有特大银染区的染色体（ 以下称为 Ｍ１ 染色
在2天片龄的载片标银染技术的出现为细胞学研究提供了新的手本上0直接加5务的硝酸银水溶液加盖片再段其应用范围已经扩及到人和动物的体细胞将载片放入潮湿密闭的容器内如培养皿等生殖细胞以及培养细胞等各个方面
二 ％ ＥＥＩＡ （ｅｉ 成６；－ 二２ １８ ｒ Ｈ ＲＤＩ Ｓ ｉ 卯 Ｂｉ ｎ ）＿１ ２ １ ９ ９
１ ２ １１ １ １
１１
位 除 较小 置， 一条 的染色 （ １ 的Ａ－ Ｏ 体第 ８ ） ｇ Ｒ Ｎ
的位置离着丝点较远外， 其它染色体上的 Ａ－ ｇ
Ｎ Ｒ 均位于长臂靠近着丝点的地方。 Ｏ， 正常 ６５ １ 小鼠细胞中期分裂相的Ａ － Ｏ ， ｇＮ Ｒ常见于第 １， ２
１
斗 ２
２
４ ８ ６ ６
１３
癌
２
斗
细
胞
斗
３ １ ７ １ ２ ２１ １ ２ １ ５ １ ７ １ ９ １ ７ １０ ３ １ ６ １ ２ １ ７ １ ８ １ ７ １ ３ ９ ３ ２３ ２ ６ ６ ８．
５ １ １
观察分 裂相数
６ １ ０ ６ ７ ６ ７
正
５ １ １ ６ ５ ９ ６ ２ ５ １ ５ １ ６ １ １ １ １ １ ３ ３ ６ ６ ９ ２
的 Ａ－ Ｏ ： ｇＮ Ｒ 的相对大小有明显的差异。癌细 胞的 Ｍ， 染色体上的Ａ － Ｒ 比同一分裂相中 ｇＮＯ ：
Ｍ，染色体的第一类细胞，其银染特性与正常
６５小鼠的细胞一致，为正常细胞。Ｌ １ 小鼠 １ ６５
体内正常细胞与癌细胞的比例，在随机观察的 ４９ ２ 个中期。分裂相中分别为 １４个和 ３５ ０ ２个
雄小鼠之间未见差异。
Ｌ１ ６５小鼠的第一类细胞中从未见到。Ｍ， 染色 体的次猛痕部位，在以姬姆萨染液常规染色时 着色很浅， 在荧光带标本中呈暗带， Ｃ 带处 经 一 理后不出现异染色质区，只有银染时呈现大的 银染区。在有 Ｍ， 染色体的分裂相中， 也可以看 到 Ｂ标记染色体（ ｊ 见图版 １ ） 在随机观察的 ，。 ３ ２０ Ｃ 带标本分裂相中， ０个 一 都是 Ｍ， Ｂ二者 和 ｊ 并存的。可见这第二类细胞为癌细胞， 染色 Ｍ， 体是 Ｌ １ ６５小鼠癌细胞中具有明显银染特性的
ｂ Ａ －ｔ ｎｎ Ｔ ｃ ｎｑ ｅ ｙ Ｓａ ｉｇ ｈ ｉ ｇ ｉ ｅ ｕ １ ）此项工作 得到杜若 甫、 汪安琦等 同志热 情指导、 并得到 李 宏广 、 宋加林 、 廖建 中、 白春英等 同志大 力帮助， 谨此
致 谢。
１ ９
染液染色 １－１ 分钟。 ０ ５
（）荧光带 （ 一 ： 新 制 载片标 本在 ４ Ｑ 带） ３℃ 恒温处理 １一１ 小时左右，以 ５ 微克／ ７ ２ ８ ０ 毫升的氮芥哇叮因 （ Ｍ）水溶液于 ２０ Ｑ ０Ｃ蔽光 染 １－２ 分钟， ８ ０ 立即以 ｐ ７ Ｈ ． ０的磷酸缓冲液 冲洗 ２ 次，随即将载片浸人同样缓冲液中， －３ 蔽光处理 ７ 分钟；以 １ 滴新鲜的上述缓 －８ －２ 冲液封片，立即在荧光显微 镜下 （ 激发 滤片 Ｂ２９ 屏蔽滤片 Ｇ ４ ） ２４， ２９ 观察、 照相。
胞。第一类其 Ａ － Ｒ 的大小、 ｇＮＯ 。 位置及数目与 并常见于第 １， 等染色体上 （ ５ １ ８ 见图 正常 ６５ １ 小鼠细胞相一致， ６ 以 条有 Ａ － Ｏ ， 常细胞， ｇＮ Ｒ Ｉ） ３ 的染色体的分裂相占多数（８ 多） ７． 。第二类细 版 Ｉ， ｏ ６ Ｍ 染色体的长臂近着丝点处， １ 有一明显的 胞以 ３ 条有 Ａ － Ｏ ：的染色体的分裂相居多 ｇＮ Ｒ （ ８ 外） 有 Ａ － Ｏ ， 占６． 。 ６ ｇＮ Ｒ的染色体在分裂相 次溢痕。 依银染程度不同，这个位置可出现 ２ 个或 ３ 个大的黑色银粒，乃至形成一个较大的 中的数目分布范围为 ２ －５条。
以５ ％氢氧化钡水溶液于 ５℃ 处理 １－２ 分 ０ ５ ０
钟， 立即用无离子水充分冲洗； Ｘ Ｃ缓冲 以２ Ｓ Ｓ 液 ６℃恒温处理 １ ０ 小时， ８ 以 倍稀释的姬姆萨
Ｌ Ｓｉｈ ｅ ａ． ｔｄｅ ｏ ｔｅ ｕｌ ｌ ｒａｉｅ ｉ ｚ ｅ ｌ Ｓｕ ｉ ｎ Ｎ ｃ ｏ ＇ Ｏ ｇ ｎｚｒ ｈ ｔ ： ｓ ｈ ｅｕ ｓ
又一条标记染色体。而 Ｌ １ ６ ５小鼠体内不具有
从上述结果可以看出， ６５ Ｌ １ 小鼠的癌细胞
与正常细胞（ 包括正常６５ １ 小鼠细胞和Ｌ １小 ６５
鼠的正常细胞） 相比， 银染特性发生了明显的变 化：（）癌细胞内具有 Ａ － Ｏ ， １ ｇＮ Ｒ 的染色体数
目 减少了。正常细胞内，６ 条有 Ａ－ Ｏ ， ｇＮ Ｒ 的 染色体的分裂相占多数（ 范围４ 条）而癌细 －８ ， 胞内， 条有Ａ － Ｏ ， ３ ｇＮ Ｒ 的染色体的分裂相占多 数（ 范围２ 条） （） －５ ；２ 癌细胞内不同染色体上
８
罕
１ ６ １ ３
２４ １
罕 罕 罕 早 罕 罕 罕 罕 罕
只以６ 条有 Ａ － Ｏ ， ｇＮ Ｒ 的染色体的分裂相占多
数，只有 １ 只小鼠以 ７ 条有 Ａ － Ｏ ， ｇＮ Ｒ 的染色 体的分裂相占多数。 Ａ － Ｏ ： ｇＮ Ｒ 在染色体上的
２ ２ ２
１ ４ ７
６
６ ３
３
１
１ ４ １ ５ １ ６ １ ７ １ ８ １ ９ ２ ０
２ １ ４ Ｉ
１ ２ １ ２ １ ５ １７ ３ ２５ ５ １ ０． ０ ０ ２ ４ １６ ．
１， ５ １等染色体上（ ８ 见图版 ＩＩ． ， ）
同一分裂相中 Ａ － Ｏ ，的相对大小有一 ｇＮ Ｒ 定差异， １ 染色体上的 Ａ － Ｏ ， 第 ２ ｇＮ Ｒ 略大一些， 其它的 Ａ － Ｏ ，之间大小差异甚小。 ｇＮ Ｒ 正常 ６５ １ 小鼠的 Ａ － Ｏ ： ｇＮ Ｒ 的数目、 分布、 位置、 大小等在雌雄小鼠之间未见差异。
７
８
Ｊ． ． 曰
３ ４ ５ ６
～
ｄ＇
ｄ＇
１ ０ ７ ４ ２ １
２
１
５ ２ ３ ５ １ ２ １ １ ２ ６ ５
３ ２
ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇ ｄ＇
了 ｄ＇
５ ６ ４ ８ ７ ２
结 果 与 讨 论
（ 一）正常 ６５小鼠的 ＡｇＮ ． １ － ＯＲ 共 观察 ２ 只正常６５ ０ １ 小鼠的２５ ５ 个细胞中期分裂 相， ｇＮ Ｒ的染色体数目分布见表 ｔ每一 有Ａ － Ｏ ， ｏ
Ｌ１小鼠中 色 银染 究‘ ６ ５ 期染 体的 研 ’
李 摊 李 容 王 仁 实 立 宗
（ 中国科 学院 遗传研究所 ， 北京）
对人和动物细胞的中期染色体的核仁形成 区 （Ｏ ， Ｎ Ｒ）用硝酸银试剂进行特异性染色（ 下
种雄性Ｌ １ ６５小鼠脾脏细胞悬液 ０１ ．毫升（０ １５ － １６ ０细胞／ 毫升）接种后第５ ， 天取骨髓制片。 （ 二）方法 称 技术 ， 银染 ）已由Ｄｎｎ］ ｏ ｐｔｅ等 ｅｏ４ ｔ１和Ｇｏ ａ ｒｊ ｄｓ ［ ｕ５ （）骨髓制片法：按每克体重 ３ １ 微克的剂 人证明， 被银染的物质是一种酸性蛋白质成分。 量给试验小鼠腹腔注射秋水仙碱，３ －４ ． 小时 ５ 银染能够显示核糖体基因 １Ｓ ２Ｓ ８ 和 ８ 在染色体 后取骨髓按常规方法制片。 上的位置以及在细胞周期中的活动〔 染色体 ７ ） 。 （）银染方法：在 ２ 天片龄的载片标 ２ －５ 银染技术的出现，为细胞学研究提供了新的手 本上， 直接加 ５ 务的硝酸银水溶液， ０ 加盖片， 再 段， 其应用范围已经扩及到人和动物的体细胞、 将载片放入潮湿密闭的容器内 （ 如培养皿等） ， 生殖 细胞以及培养细胞等各个方面。 置于 ３℃ 恒温中处理 ７ 小时 左右。取 出载 ７ ２ 在肿瘤细胞学研究中，银染技术也开始应 片， 在普通光学显微镜下检查。 如果细胞内和 用于白血病的研究上，Ｖｒｅ， ［ 曾提到， ａ ｙ Ｍ． Ｌ Ｉ ＇ 分裂相中出现明显的银染物 （ 否则可以继续染 一例慢性淋巴细胞白血病患者的银染核仁形成 或按以上步骤重染） 即可用无离子水 （ ， 或蒸馏 区 （ ｇＮ Ｒ） Ａ － Ｏ ，的模式与正常人的有显著差异。
Ｒ ｇｏ ｓ Ｍｅａ ｈ ｓ Ｃｈ ｏ ｓｍｅ ｉ Ｌ １ Ｍｏ ｓ ｅ ｉｎ ｏ ｆ ｔｐ ａｅ ｒｍｏｏ ｓ ６ ５ ｕｅ ｎ
材 料 与 方 法 （ 一）材料 取两个月龄左右的正常６５ １
小鼠（ 雄） 雌、 以骨髓制片法制取中期染色体载 片标本。另取 ６５ １ 小鼠（ 雄）于腋部皮下接 雌、 ，
常
细
胞
７
８
１ ２ ３
４
２ １ １ ４ １
６ ２ ７ １ ０ ６ ５ ４ ４ ４ ３ ６ ６ ６ ６ ２ ２ ９ ７ ３
２２． ４
５ ６ ７ ８
１ 斗 １ ４ ４ ８ １ ２
５ ５ ５ ２ ７ １ ０ ７ ６ ７ １ ５ ２ １ ６ １ ７ １ ５ ５．
２
１ ３
２
小
９
计 罕 罕 罕 罕 罕 罕
计 计
２
３ ０ ３ ０ ３ ０ ３ ０ ３ ２ ３ ０ ３ ０ ３ ０ ２２ ４ ３ ０ ３ ７ ３ ０ ３ ０ ３０ ３ ０ １７ ８ ４９ ２
包含不同数 目 Ａ － Ｒ ｇＮＯ ，染色体的分 裂相数 观 察分 裂相数
２４ ２ ０ ２ ４ ２ ３ ２６ ２３ ２ ５ ２ ５ １０ ９ ２ ３ ２ ７ ２ ３ ２ 斗 ２ ３ １ ５ １５ ３ ３２ ５ １ ０． ０ ０
裹 １ 正常 ６５小眼中期分裂相 中 ＡｇＮＯ １ － Ｒ，染色休 的分布
动物 性别
观 察分 裂相数
有不 同数 目的 Ａ － Ｏ 、 ｇ Ｎ Ｒ 染色 体的分 裂相数
４ ５ １ １ ２
６
序号
１
２
７ ４ ３
一
８
ｄ＇
ｄ＇
１ ２ １ ２ １ ３ １ ２ １１ １ １ １ １ １ ２ １ １ １ ３ １８ １ ２