利用斑马鱼胚胎快速鉴定真核质粒中目的基因表达的研究

利用斑马鱼胚胎快速鉴定真核质粒中目的基因表达的研究范建超;赵成建;王晓飞;任斌;杨寒朔
【期刊名称】《四川动物》
【年(卷),期】2011(30)6
【摘要】目的建立利用斑马鱼胚胎快速鉴定真核质粒中目的基因表达的实验体系.方法选20枚斑马鱼受精卵,在显微镜下每隔1h记录胚胎的发育情况.另选250枚单细胞期斑马鱼胚胎,平均分成5组,一组胚胎作为对照,剩余4组分别向胚胎的单细胞内注射pEGFP-N1(真核表达质粒)、pCMV-DsRed-Express2(真核表达质粒)、pET28-GFP(原核表达质粒)、pET28-RFP(原核表达质粒)质粒,在不同时间点连续观察绿色荧光及红色荧光的表达情况.另选600枚单细胞期斑马鱼胚胎,平均分成3组,一组胚胎作为对照,一组向胚胎单细胞内注射pEGFP-N1质粒,另外一组向胚胎单细胞内注射pEGFP-N1-MUC1外源基因融合重组质粒,注射4h后在荧光显微镜下观察绿色荧光的表达情况,并用RT-PCR的方法检测目的基因MUC1 mRNA的转录情况.结果注射pEGFP-N1、pCMV-DsRed-Express2真核表达质粒的胚胎,注射4 h后分别观察到很强的绿色荧光及红色荧光;注射pET28-GFP、pET28.RFP原核表达质粒的胚胎,10 h内都未观察到绿色荧光及红色荧光;注射pEGFP-N1-MUC1外源基因融合质粒,注射4h后同样观察到很强的绿色荧光,且用RT-PCR方法检测到目的基因MUC1很强的表达.结论利用斑马鱼胚胎鉴定真核重组质粒中目的基因的表达情况是一种快速、有效的实验体系.
【总页数】5页(P871-875)
【作者】范建超;赵成建;王晓飞;任斌;杨寒朔
【作者单位】四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所,成都,610041;四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室,成都,610041;四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室,成都,610041;四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所,成都,610041;四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室,成都,610041
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.4;Q343.1
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