六种不同剂型的噻虫嗪对斑马鱼急性毒性研究

DOI：10.16661/ki.1672-3791.2018.16.228
六种不同剂型的噻虫嗪对斑马鱼急性毒性研究
杨玲莉1,2
(1.湖南农业大学动物医学院 湖南长沙 410128;2.北京依科世福 北京 100000)
摘 要：噻虫嗪（Thiamethoxam）通常为白色结晶粉末，是一种全新结构的第二代烟碱类高效低毒杀虫剂，对害虫具有胃毒、触杀及内吸活性，用于叶面喷雾及土壤灌根处理。

因噻虫嗪的毒性一度受争议。

本文通过六种剂型噻虫嗪对斑马鱼急性毒性研究，探究不同噻虫嗪制成不同剂型是否对斑马鱼毒性有所差异，为噻虫嗪登记做参考。

研究发现，噻虫嗪原药配成水剂为低毒、噻虫嗪悬浮剂和噻虫嗪悬浮种衣剂均为微毒。

噻虫嗪原药配成水剂和悬浮剂可以有效减小噻虫嗪毒性。

从鱼类保护的眼光来看，较之于噻虫嗪颗粒剂，更建议使用噻虫嗪水剂和悬浮剂。

关键词：斑马鱼 剂型 噻虫嗪 杀虫剂 急性毒性实验
中图分类号：X.826 文献标识码：A 文章编号：1672-3791(2018)06(a)-0228-04
农药在现代社会被广泛使用，这不仅仅给陆地生态环境造成了一定破坏，许多农药通过地表渗流和地下径流从农田流入地下，更给生活在水下或者水面的水生动物造成了影响。

农药危害最大的就是水中的鱼类。

有一些农药鱼类对其富集能力很强，容易给鱼类带来污染与危害，比如使鱼类脊椎畸形、出现血斑、侧游甚至引起鱼类大量死亡。

更可怕的是，如今随着植物虫害病害的日益严重，作为方便快捷经济的除害方式农药正在被越来越广泛使用并且肆意追加。

因此农药对水生物毒性的研究及农药毒性科学控制刻不容缓。

现今，农药的投产过程主要是通过几种原药配制不同制剂制成成品，再测过毒性能够投入使用就登记投入使用推广。

因此同种原药制成不同制剂对同种生物的毒性是不相同的，因此，在不可避免使用某种原药的前提下，可以通过此原药制成不同剂型来减少毒性，达到间接减少环境污染的效果。

1 绪论
1.1 噻虫嗪在国内外研究现状
噻虫嗪作为第二代烟碱类杀虫剂是瑞士先正达公司的专利产品，但他饱受争议，尤其对蜜蜂健康影响很大。

在中国专利于2013年7月到期。

已然推广使用，但此药在欧盟OECD已经禁用了。

所以他在中国使用的毒性问题是非常严峻的。

1.2 研究的目的和意义
本选题通过用同种原药，噻虫嗪配制不同剂型制成农药进行对斑马鱼的急性毒性效应研究，来初步判定这种原药不同制剂对鱼类的毒性大小。

以此加强对这种原药的毒性管理和控制，更科学的使用农药。

2 预试验和正试验
2.1 预实验
2.1.1 参比试验
对每一批鱼用重铬酸钾（分析纯以上）进行一次参比物质试验，观察试验结果，如果试验结果落在200～400
a.i.mg/L内，则可以表明本实验室具备这项试验的条件。

2.1.2 体重体长称重
对试验用鱼进行一次体重体长称重，称量出他们的体重体长，并且算出每组鱼总体重。

以此评判供试生物是否符合标准。

根据OECD的Guaidline 动物福利规定，每1g斑马鱼需要有1L水的生活环境。

因此，我们根据3条鱼/组，体重不超过1g，选择1L的鱼缸/组。

体长根据OECD规定不超过（3±1）cm，符合标准即可。

2.1.3 试验供试品和试验仪器
本实验依据OECD法规严格按照GLP规定，固定使用通过验证的仪器，以及通过稳定性验证的供试品。

供试品状态和仪器来源见表1和表2。

2.1.4 供试生物
斑马鱼（Brachydanio reri）属鲤科。

体长为（2.0±1.0）cm，体重为（0.3±0.1）g。

统一生理指标。

供试用水标准：经过24h曝气的曝气自来水，水温21℃～25℃，水质硬度在（以CaCO3计）10～250mg/L之间，pH在6.0～8.5之间，溶解氧保持在5.8mg/L以上。

光照为12～16h。

保持每天投喂1～2次专用鱼食，投入的足够量。

保持每2～3d换一次水，换水的时候刷好鱼缸，清洗过滤棉。

为
了保证鱼能更好的适应, 每次换水只换2/3的水。

2.1.5 试验方法的选择
按农药的特性选择静态实验法、半静态实验法或流水式实验法。

如使用静态或半静态实验法。

应确保试验期间实验药液中供试物不低于初始浓度的80%。

如果在实验期间实验药液中供试物浓度超过20%的偏离，则应检测实验药液中供试物的实际浓度并以此计算实验结果，或使用流水式实验法进行实验，以稳定实验药液中供试物浓度。

2.1.6 预实验浓度设计依据在中国农药信息网上查询到，数据见表3。

根据以上可查到数据，和毒性等级参照表，噻虫嗪通常配方称悬浊液、水剂、颗粒剂使用。

因此设计预试验浓度梯度均为0.1、1.0、10.0、50.0、100.0五个浓度梯度和一
个空白对照。

根据OECD规定统一用3条鱼/组无平行卫星组。

并设计1%噻虫嗪·杀虫双颗粒剂、0.2%噻虫嗪·杀虫双颗粒剂、6.5%噻虫嗪·戊唑醇悬浮种衣剂、25%噻虫嗪水分散粒剂、30%噻虫嗪悬浮剂、35%噻虫嗪悬浮种衣剂几种剂型的噻虫嗪试验，以确定从减少对斑马鱼毒性的眼光看噻虫嗪复配成何种剂型最佳。

2.1.7 第一次预实验96h结果为了正试验的范围确定，进行了三次重复预实验得到最大非致死量和最绝对致死剂量，其中第二次和第三次预实验与第一次预实验结果一致，得到LC50范围见表4。

2.2 正试验
2.2.1 正试验浓度设计依据
根据OECD规定和预实验结果确定的浓度范围内按一定比例间距（级差控制在2.2倍以内）设置6个浓度组，并
1%噻虫嗪·杀虫双颗粒剂 固态颗粒0.2%噻虫嗪·杀虫双颗粒剂 固态颗粒6.5%噻虫嗪•戊唑醇悬浮种衣剂
液态悬浮剂25%噻虫嗪水分散粒剂 液态水剂30%噻虫嗪悬浮剂 液态悬浮剂35%噻虫嗪悬浮种衣剂
液态悬浮剂
万分之一天平
源自METTLER TOLEDO 移液枪 源自EPPENDORF 溶解氧测定仪
源自METTLER TOLEDO pH剂
源自METTLER TOLEDO
表1 不同制剂供试品
表2 试验器材
表3 不同制剂供试品毒性参考
设一个空白对照组，根据OECD规定统一用7条鱼/组 无平行卫星组。

实验开始后6h内随时观察并记录实验用鱼的中毒症状及死亡率，其后于24h、48h、72h和96h观察并记录鱼的中毒症状及死亡率，当用玻璃棒轻触鱼尾部，无可见运动即为死亡，并及时清除死鱼。

每天测定并记录实验药液温度、pH及溶解氧。

2.2.2 正式试验结果
用SPASS软件进行数据处理，算出LC50见表5～表6。

根据试验结果，噻虫嗪原药制成不同制剂对于斑马鱼
的毒性差异非常大：其中水剂比固态颗粒剂的毒性小，基本为低毒或者微毒，并且在颗粒剂中，噻虫嗪浓度越大，对斑马鱼毒性越大。

因此，噻虫嗪制成悬浊液或者水剂可以有效减少原药对斑马鱼毒性。

从保护环境的眼光来看，为了减少对水生物，特别是鱼类种群的毒害，在药效相同条件下，
建议使用噻虫嗪悬浊液或水剂类杀虫剂代替噻
表4 预实验得出LC50范围表5 正式试验结果
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表6 正式试验95%置信限
学中，根据大学生的年龄特征、学校体育教学和运动环境，采用多种教学手法来教学，重点培养学生的自信心、力量素质和锻炼习惯，为学生终身体育打下坚实的基础。

3.2 将理论和训练结合起来，重视基础动作示范
乒乓球教学要坚持理论和实践相结合的原则，这是使学生的知识和技能同步发展的关键。

在乒乓球基本技法教学中，将理论和实践结合起来，具有积极的意义。

乒乓球技术动作瞬息万变，将理论和训练结合起来，运用直观的教学法来教学，可以强化教学效果，加深学生的学习体验；理论和技法训练相结合，让学生边学边练，可以及时发现和纠正学生存在的问题，提高学生的乒乓球技术水平。

因此，在乒乓球基本技法教学中，高校体育教师要将乒乓球基本技法理论和训练结合起来，借助多媒体、慢动作等多种教学方法做好基本技法示范，让学生全面了解乒乓球基本技术的动作要领。

然后，让学生开展技法训练，仔细观察学生动作的准确性，对那些动作不标准的学生要及时给予指点和帮助，使学生全面掌握乒乓球基本技法。

3.3 创新乒乓球技法教学模式和方法
教学内容、模式和方法创新，是高校体育教学改革的重要内容。

在高校体育教学改革浪潮中，乒乓球教学也要与时俱进，将更多行之有效、新颖有趣的教学手法应用到乒乓球教学中来，以培养学生的学习兴趣，增强教学的实效性。

具体到高校乒乓球基本技法教学中，教师要变灌输式教学模式为多样教学模式，创新乒乓球基本技法教学路径，让学生切实感受到乒乓球基本技术的作用和乒乓球的乐趣，使学生主动参与到教学中来。

如在乒乓球发球基本技法教学中，教师可以借助多媒体影像资料讲述正手发奔球、反手发急球与发急下旋球、正手发转与不转球、正手发左侧上(下)旋球等发球技巧，展示发球技术动作，增强乒乓球基本技法的直观性和教学效果。

还可以借助分层教学、合作教学等，将教学的主动权交给学生，以发掘学生的学习潜能，培养学生的身心素质。

3.4 点面结合，提高训练效果
乒乓球运动的技术性较强，乒乓球运动技法复杂多样，许多乒乓球技法都存在着密切关联。

乒乓球基本技术，在专门的技法训练中，融入相应的技法，点面结合，能取得良好的训练效果。

所以，在乒乓球基本技法教学训练中，教师既要重视专项技法训练，借助专项技法训练、技法侧重训练使学生形成独特的特点、鲜明的技法风格，还要重视乒乓球全面技法训练，将特长技法、专项技法与全面技法训练结合起来，以强化训练效果。

如在乒乓球直拍正手攻球训练中，教师要将其置于正手攻球训练的大背景下强化它与其他技法的联系，将其与横板中台正手位攻球、直板正手侧身攻球等正手攻球技法训练结合起来，以强化学生的整体感知，提高学生的技术水平。

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虫嗪颗粒剂。

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