ch05-01-StrainAnalysis

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高效液相色谱法同时测定工业氯乙酸中氯乙酸、二氯乙酸和乙酸

PTCA(PART B: CHEM. ANAL.)o s r a f篇工作筒报DOI： 10.11973 !lyy-hx202101014高效液相色谱法同时测定工业氯乙酸中氯乙酸、二氯乙酸和乙酸周长海、岳涛〜2,王艳1，徐婷、王瑞菲“2,冯维春>(1.山东省水相有机合成及高效清洁分离工程技术研究中心，济南250014;2.青岛科技大学山东化工研究院.济南250014)摘要：工业氣乙酸样品经体积比为95 : 5的0.05%(体积分数）磷酸溶液-甲醇（流动相）溶解后，用0.45 p m滤膜过滤，采用高效液相色谱法（HPLC)测定滤液中氣乙酸、二氯乙酸与乙酸的含量。

选用Inert Sustain AQ-C18色谱柱为固定相.用流动相进行等度洗脱，在检测波长215 n m处进行测定。

结果表明：3种目标化合物均达到了基线分离；氣乙酸、二氯乙酸、乙酸的质量浓度与其对应的峰面积在一定范围内呈线性关系，相关系数均大于0.999 5;氣乙酸、二氯乙酸和乙酸检出限(3S/N)分别为0.19,0.08,0.12 mg .L— 1。

方法用于实际样品分析，平行测定6次，测定值的相对标准偏差分别为 0.11 %,6.6 %,5.1 %，极差分别为 0.32 %，0.03%,0.03%,满足 H G/T 3271 —2000 对两次测定值差值的规定。

对实际样品进行加标回收试验，回收率分别为99.8%〜100%，97.5%〜101%,96.7%〜102%。

与标准方法（H G/T 3271 — 2000)相比，本方法测定值的极差更小。

关键词：高效液相色谱法；氯乙酸；二氯乙酸；乙酸；工业氣乙酸中图分类号：（)657.7 文献标志码：A 文章编号：1001-4020(2021)01-0072-05氯乙酸是一种非常重要的有机化工原料，其下游产品达百余种，在表面活性剂、染料、涂料、医药、农药等有机合成材料及中间体领域应用广泛[13]。

高分子的表征与分析

F
σ = F / A = F / (πr2) F 为样品断裂时压力， A 和 r 分别为圆柱形样品起始时的截面积和直径
Flexural strength
弯曲强度（Flexural strength OR Bending strength) 也称挠曲强度或抗弯强度。弯曲强度的测定是在规定的试验条件下，对标准试样施加一静止弯曲力矩，直至试样断裂。
Differential Scanning Calorimetry
差热扫描分析（DSC）在程控温度下，测定输入到物质和参比物之间的功率差与温度的关系。
DSC curves
Heating scan
Cooling scan
onset mid end
enthalpy
Tg
Tc
Tm
熔融焓（ΔHm），表示分子或分子链段排布由有序转换到无序所需要吸收的能量。将 ΔHm与100%结晶试样熔融焓（ΔHm0 ，通过已知结晶度聚合物熔融焓外推得到）比较既可得到聚合物的相对结晶度 Xc。
P
P
Hardness
硬度（hardness）是指材料抵抗弹性变形、塑性变形或破坏的能力，也可表述为材料抵抗残余变形和反破坏的能力。硬度不是一个简单的物理概念，而是材料弹性、塑性、强度和韧性等力学性能的综合指标。硬度试验根据其测试方法的不同可分为静压法、划痕法、回跳法及显微硬度、高温硬度等多种方法。常用于塑料和橡胶硬度测试的标准为邵氏（Shore）硬度。用邵氏硬度计插入被测材料，表盘上的指针通过弹簧与一个刺针相连，用针刺入被测物表面，表盘上所显示的数值即为硬度值。
粘度法只是一种测定聚合物相对分子量的方法，必须在确定的条件下，事先订定粘度与分子量的关系（即根据已知分子量的试样测定得到常数K和a）

3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-甲酸衍生物和它们作为上皮钠通道阻断剂用于

专利名称：3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-甲酸衍生物和它们作为上皮钠通道阻断剂用于治疗气道疾病的用途
专利类型：发明专利
发明人：S·P·科林伍德,C·豪沙姆,T·A·亨特
申请号：CN200980116113.5
申请日：20090511
公开号：CN102015662A
公开日：
20110413
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：游离形式或盐形式或溶剂合物形式的式(I)化合物用于治疗对阻断上皮钠通道有响应的疾病，其中R、R、R、R、R、R、R、R和R具有说明书中所示的含义。

本发明还描述了含有所述化合物的药物组合物和制备所述化合物的方法。

申请人：诺瓦提斯公司
地址：瑞士巴塞尔
国籍：CH
代理机构：北京市中咨律师事务所
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EHP、SHIV 双重TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法的构建及应用

·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘要：本研究根据GenBank 中已有的虾肝肠胞虫（EHP ）和虾血细胞虹彩病毒（SHIV ）基因的保守序列，设计特异的引物和探针。

建立了快速诊断EHP 和SHIV 的双重TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法，并对其特异性、敏感性和稳定性进行检测。

结果表明：该方法检测限可达10 copies/μL ，其敏感性是SYBR Green real-time PCR 的10倍，普通PCR 法的100倍；对白斑综合征病毒、传染性皮下及造血组织坏死病毒、高致病性副溶血弧菌，以及桃拉综合征病毒的检测结果均为阴性，表明无交叉反应，具有良好特异性；重复性试验结果表明，该方法Ct 值的变异系数小于4%，具有良好的稳定性。

对37份已知检测结果的样品进行检测，结果符合率为100%。

本研究建立的EHP 和SHIV 检测方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点，适用于对虾隐性感染的早期监测。

关键词：虾肝肠胞虫；虾血细胞虹彩病毒；TaqMan 荧光定量PCR 中图分类号： S852.723文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2022）01-0112-08Development of a Duplex TaqMan Real-time PCR Assay for Detection of EnterocyTozoon Hepatopenaei and Shrimp Hemocyte IridovirusHOUYuee 1, ZENG Junxia 1, LAN Jianyuan 1, XU Zaozhu 1, LIAO Xiuyun 2, LUO Baozheng 2(1. Zhuhai Kerric T esting T echnolongy Co. Ltd., Zhuhai 519000, China; 2. Gongbei Customs district technology center, Zhuhai 519015, China)收稿日期：2019-09-04基金项目：珠海市公共技术服务平台产学研协同创新计划项目（IETP201901011）作者简介：侯月娥，女，硕士,主要从事畜禽和水产疾病及免疫防治通信作者：罗宝正，E-mail：*************EHP 、SHIV 双重TaqMan 实时荧光定量PCR检测方法的构建及应用侯月娥1，曾俊霞1，蓝间媛1，许枣珠1，廖秀云2，罗宝正2（1.珠海科艺普检测科技有限公司，珠海51900；2.拱北海关技术中心，珠海519015）2022,30(1): 112-119Abstract: In this study, specific probes and primers were designed according to Enterocy Tozoon Hepatopenaei (EHP) and Shrimp Hemocyte Iridovirus (SHIV) gene sequences in GenBank. A d uplex TaqMan-based real-time quantitative PCR assay was then developed by optimizing the reaction conditions. The results demonstrated that this PCR assay was more sensitive for EHP and SHIV with the detection limit of 1×10 copies/μL, which was 10-fold higher than SYBR Green real-time PCR and 100-fold higher than conventional PCR. Speciﬁ city tests showed no cross reactions with White spot syndrome virus, Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, High pathogenicity ibrio parahaemolyticus and Taura syndrome virus. Repeatability tests demonstrated that the threshold cycle of the method gave a good stability with the coefﬁ cient of variations were less than 4%. Then 37 samples were tested by using a duplex TaqMan real-time PCR and conventional PCR and the results reached 100% agreement. In conclusion, the duplex TaqMan-based real-time quantitative PCR assay developed here were speciﬁ c and sensitive for rapid detection of EHP and SHIV . Therefore, it could be suitable for early duplex TaqMan-based real-time quantitative PCR assay of latent infection of shrimp.Key words: Enterocy tozoon hepatopenaei; shrimp hemocyte iridovirus; TaqMan real-time PCR; detection· 113 ·侯月娥等：EHP、SHIV 双重TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法的构建及应用第30卷第1期虾肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei, EHP）是2009年于泰国养殖池塘生长迟缓的斑节对虾（Penaeus monodon）中发现的专门寄生于细胞内的原生生物[1-2]。

比较细胞松弛素A与B在胞质分裂阻断法微核试验中的应用

DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2019.02.003·论著·比较细胞松弛素A与B在胞质分裂阻断法微核试验中的应用文海若，任璐，罗飞亚，汪祺【摘要】目的比较细胞松弛素A（Cyto A）及细胞松弛素 B （Cyto B）对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL）毒性及对体外微核试验结果的影响。

方法在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构，并使用CHL 开展胞质分裂阻断法微核试验，比较两者对多核细胞率及含微核双核细胞率的影响。

结果不同浓度的Cyto A 和Cyto B 与细胞作用24 h 后，与对照组（26% ± 7%）比较均可诱导多核细胞形成率的显著升高（Cyto A 及Cyto B 3.0 μg/ml 浓度组分别为58% ± 12% 和72% ± 9%，P < 0.001），且Cyto A 在3.0 μg/ml 浓度条件下诱导的平均多核细胞率与 1.5 μg/ml 浓度组比较有所降低。

Cyto A 处理组在MMC 浓度分别为0、0.1 和0.3 μg/ml 时的微核率分别为0.25% ± 0.16%、1.98% ± 0.59% 和3.80% ± 0.90%；而Cyto B 处理组在相同MMC 浓度时的微核率分别为0.32% ± 0.16%、2.50% ± 0.61% 和5.05% ± 1.09%。

结论虽然Cyto B 的多核细胞造模效果略优于Cyto A，两者均可有效用于胞质分裂阻断法微核研究。

研究结果将为相关领域研究者提供可借鉴的实际经验。

【关键词】细胞松弛素类；微核试验；肌动蛋白类；胞质分裂阻断法中国医药生物技术, 2019, 14(2):115-120体外哺乳动物细胞微核试验以细胞过程中形成的独立于主核的染色单体或染色体断片为生物标志物，来评估受试物的潜在致染色体损伤能力。

自然电子轨道NBO分析方法

自然电子轨道NBO分析方法自然键轨道(NBO)分析方法分子轨道未经定域化处理，将导致计算结果与我们通常的成键概念有所不同。

例如在乙烯分子中，碳碳之间为双键，但在正则MO中，反映C与C之间成键作用的MO可能有多个，因此根据正则MO 的结果，我们无法断定C—C是单键还是双键。

此时，通过对正则MO的定域化处理，可以得到通常意义上的成键图像。

正则MO的定域化处理方法较多，其中较为常用的是NBO方法，其使用方法是在输入文件中添加关键词：POP=NBO以乙烯分子为例：%mem=32mb#p b3lyp/3-21g pop=nbo 进行NBO成键分析The NBO analysis of ethylene0,1CC,1,CCH,1,CH,2,HCCH,1,CH,2,HCC,3,180.,0H,2,CH,1,HCC,3,180.,0H,2,CH,1,HCC,4,180.,0CC=1.31477CH=1.07363HCC=121.8867Entering Link 1 = C:\G03W\l1.exe PID= 2100.Copyright (c) 1988,1990,1992,1993,1995,1998,2003, Gaussian, Inc.All Rights Reserved.This is the Gaussian(R) 03 program. It is based on the the Gaussian(R) 98 system (copyright 1998, Gaussian, Inc.),the Gaussian(R) 94 system (copyright 1995, Gaussian, Inc.),the Gaussian 92(TM) system (copyright 1992, Gaussian, Inc.),the Gaussian 90(TM) system (copyright 1990, Gaussian, Inc.),the Gaussian 88(TM) system (copyright 1988, Gaussian, Inc.),the Gaussian 86(TM) system (copyright 1986, Carnegie MellonUniversity), and the Gaussian 82(TM) system (copyright 1983,Carnegie Mellon University). Gaussian is a federally registeredtrademark of Gaussian, Inc.This software contains proprietary and confidentialinformation,including trade secrets, belonging to Gaussian, Inc.This software is provided under written license and may beused, copied, transmitted, or stored only in accord with thatwritten license.The following legend is applicable only to US Government contracts under DFARS:RESTRICTED RIGHTS LEGENDUse, duplication or disclosure by the US Government is subjectto restrictions as set forth in subparagraph (c)(1)(ii) of the Rights in Technical Data and Computer Software clause at DFARS252.227-7013.Gaussian, Inc.Carnegie Office Park, Building 6, Pittsburgh, PA 15106 USAThe following legend is applicable only to US Government contracts under FAR:RESTRICTED RIGHTS LEGENDUse, reproduction and disclosure by the US Government is subjectto restrictions as set forth in subparagraph (c) of theCommercial Computer Software - Restricted Rights clause at FAR52.227-19.Gaussian, Inc.Carnegie Office Park, Building 6, Pittsburgh, PA 15106 USA---------------------------------------------------------------Warning -- This program may not be used in any manner thatcompetes with the business of Gaussian, Inc. or will provideassistance to any competitor of Gaussian, Inc. 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Jaramillo, R. Gomperts, R. E. Stratmann, O. Yazyev,A. J. Austin, R. Cammi, C. Pomelli, J. W. Ochterski, P. Y. Ayala,K. Morokuma, G. A. Voth, P. Salvador, J. J. Dannenberg, V. G. Zakrzewski, S. Dapprich, A. D. Daniels, M. C. Strain, O. Farkas, D. K. Malick, A. D. Rabuck, K. Raghavachari, J. B. Foresman, J. V. Ortiz, Q. Cui, A. G. Baboul, S. Clifford,J. Cioslowski, B. B. Stefanov, G. Liu, A. Liashenko, P. Piskorz,I. Komaromi, R. L. Martin, D. J. Fox, T. Keith, M. A.Al-Laham,C. Y. Peng, A. Nanayakkara, M. Challacombe, P. M. W. Gill,B. Johnson, W. Chen, M. W. Wong,C. Gonzalez, and J. A. Pople,Gaussian, Inc., Pittsburgh PA, 2003.********************************************* Gaussian 03: x86-Win32-G03RevB.01 3-Mar-200322-Dec-2014********************************************* %mem=32mbDefault route: MaxDisk=2000MB----------------------#p b3lyp/3-21G pop=NBO----------------------1/38=1/1;2/17=6,18=5,40=1/2;3/5=5,11=2,16=1,25=1,30=1,74=-5/1,2,3;4//1;5/5=2,32=1,38=5/2;6/7=2,8=2,9=2,10=2,28=1/1,7;99/5=1,9=1/99;Leave Link 1 at Mon Dec 22 10:12:15 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l101.exe)----------------------------The NBO analysis of ethylene----------------------------Symbolic Z-matrix:Charge = 0 Multiplicity = 1CC 1 CCH 1 CH 2 HCCH 1 CH 2 HCC3 180. 0H 2 CH 1 HCC3 180. 0H 2 CH 1 HCC4 180. 0Variables:CC 1.31477CH 1.07363HCC 121.8867Isotopes and Nuclear Properties:Atom 1 2 34 5 6IAtWgt= 12 12 11 1 1AtmWgt= 12.0000000 12.0000000 1.00782501.0078250 1.0078250 1.0078250IAtSpn= 0 0 11 1 1AtZEff= 0.0000000 0.0000000 0.00000000.0000000 0.0000000 0.0000000AtQMom= 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000AtGFac= 0.0000000 0.0000000 2.7928460 2.7928460 2.7928460 2.7928460Leave Link 101 at Mon Dec 22 10:12:15 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l202.exe)Input orientation: --------------------------------------------------------------------- Center Atomic AtomicCoordinates (Angstroms)Number Number Type X Y Z---------------------------------------------------------------------1 6 0 0.000000 0.000000 0.0000002 6 0 0.000000 0.000000 1.3147703 1 0 0.911613 0.000000 -0.5671364 1 0 -0.911613 0.000000 -0.5671365 1 0 -0.911613 0.000000 1.8819066 1 0 0.911613 0.000000 1.881906---------------------------------------------------------------------Distance matrix (angstroms):1 2 34 51 C 0.0000002 C 1.314770 0.0000003 H 1.073630 2.091078 0.0000004 H 1.073630 2.091078 1.8232260.0000005 H 2.091078 1.073630 3.0531882.449041 0.0000006 H 2.091078 1.073630 2.4490413.053188 1.82322666 H 0.000000Stoichiometry C2H4Framework group D2H[C2"(C.C),SG(H4)]Deg. of freedom 3Full point group D2H NOp 8 Largest Abelian subgroup D2H NOp 8 Largest concise Abelian subgroup D2 NOp 4Standard orientation: ---------------------------------------------------------------------Center Atomic AtomicCoordinates (Angstroms)Number Number Type XY Z---------------------------------------------------------------------1 6 0 0.0000000.000000 0.6573852 6 0 0.0000000.000000 -0.6573853 1 0 0.0000000.911613 1.2245214 1 0 0.000000-0.911613 1.2245215 1 0 0.000000-0.911613 -1.2245216 1 0 0.0000000.911613 -1.224521---------------------------------------------------------------------Rotational constants (GHZ): 150.851941230.7849006 25.5672912Leave Link 202 at Mon Dec 22 10:12:15 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l301.exe)Standard basis: 3-21G (6D, 7F)There are 7 symmetry adapted basis functions of AG symmetry.There are 0 symmetry adapted basis functions ofB1G symmetry.There are 2 symmetry adapted basis functions ofB2G symmetry.There are 4 symmetry adapted basis functions ofB3G symmetry.There are 0 symmetry adapted basis functions of AU symmetry.There are 7 symmetry adapted basis functions ofB1U symmetry.There are 4 symmetry adapted basis functions ofB2U symmetry.There are 2 symmetry adapted basis functions ofB3U symmetry.Integral buffers will be 262144 words long.Raffenetti 2 integral format.Two-electron integral symmetry is turned on.26 basis functions, 42 primitive gaussians, 26 cartesian basis functions8 alpha electrons 8 beta electronsnuclear repulsion energy 33.7515964359 Hartrees.IExCor= 402 DFT=T Ex=B+HF Corr=LYP ExCW=0 ScaHFX= 0.200000ScaDFX= 0.800000 0.720000 1.000000 0.810000IRadAn= 0 IRanWt= -1 IRanGd=0 ICorTp=0NAtoms= 6 NActive= 6 NUniq= 2 SFac=5.66D+00 NAtFMM= 60 Big=FLeave Link 301 at Mon Dec 22 10:12:16 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l302.exe)NPDir=0 NMtPBC= 1 NCelOv= 1 NCel=1 NClECP= 1 NCelD= 1NCelK= 1 NCelE2= 1 NClLst= 1 CellRange= 0.0.One-electron integrals computed using PRISM.One-electron integral symmetry used in STVIntNBasis= 26 RedAO= T NBF= 7 0 24 0 7 4 2NBsUse= 26 1.00D-06 NBFU= 7 0 24 0 7 4 2Precomputing XC quadrature grid usingIXCGrd= 2 IRadAn= 0 IRanWt=-1 IRanGd= 0.NRdTot= 359 NPtTot= 45406 NUsed= 47035 NTot= 47051NSgBfM= 26 26 26 26.Leave Link 302 at Mon Dec 22 10:12:16 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l303.exe)DipDrv: MaxL=1.Leave Link 303 at Mon Dec 22 10:12:16 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l401.exe)Harris functional with IExCor= 402 diagonalized for initial guess.ExpMin= 1.83D-01 ExpMax= 1.72D+02 ExpMxC=1.72D+02 IAcc=1 IRadAn= 1 AccDes= 1.00D-06HarFok: IExCor= 402 AccDes= 1.00D-06 IRadAn= 1 IDoV=1ScaDFX= 1.000000 1.000000 1.000000 1.000000 Harris En= -78.2050951851189Initial guess orbital symmetries:Occupied (B1U) (AG) (AG) (B1U) (B2U) (AG)(B3G) (B3U)Virtual (B2G) (B2U) (AG) (B1U) (B3G) (B1U) (AG) (B3U)(B2U) (B2G) (B1U) (AG) (B3G) (B2U) (B1U) (AG)(B3G) (B1U)The electronic state of the initial guess is 1-AG.Leave Link 401 at Mon Dec 22 10:12:16 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l502.exe)Warning! Cutoffs for single-point calculations used.Closed shell SCF:Requested convergence on RMS density matrix=1.00D-04 within 128 cycles.Requested convergence on MAX density matrix=1.00D-02.Requested convergence onenergy=5.00D-05.No special actions if energy rises.Using DIIS extrapolation, IDIIS= 1040.Integral symmetry usage will be decided dynamically.47034 words used for storage of precomputed grid.Keep R1 integrals in memory in canonical form, NReq= 537976.IEnd= 66709 IEndB= 66709 NGot= 4194304 MDV= 4083148LenX= 4083148Symmetry not used in FoFDir.MinBra= 0 MaxBra= 1 Meth= 1.IRaf= 0 NMat= 1 IRICut= 1 DoRegI=T DoRafI=F ISym2E= 0 JSym2E=0.Cycle 1 Pass 1 IDiag 1:E= -78.0698393698835DIIS: error= 6.31D-02 at cycle 1 NSaved= 1.NSaved= 1 IEnMin= 1 EnMin= -78.0698393698835 IErMin= 1 ErrMin= 6.31D-02ErrMax= 6.31D-02 EMaxC= 1.00D-01 BMatC= 8.34D-02 BMatP= 8.34D-02IDIUse=3 WtCom= 3.69D-01 WtEn= 6.31D-01Coeff-Com: 0.100D+01Coeff-En: 0.100D+01Coeff: 0.100D+01Gap= 0.296 Goal= None Shift= 0.000GapD= 0.296 DampG=1.000 DampE=0.500 DampFc=0.5000 IDamp=-1.Damping current iteration by 5.00D-01RMSDP=2.19D-02 MaxDP=1.08D-01OVMax= 1.56D-01Cycle 2 Pass 1 IDiag 1:E= -78.1160719860205 Delta-E=-0.046232616137 Rises=F Damp=TDIIS: error= 6.35D-03 at cycle 2 NSaved= 2.NSaved= 2 IEnMin= 2 EnMin= -78.1160719860205 IErMin= 2 ErrMin= 6.35D-03ErrMax= 6.35D-03 EMaxC= 1.00D-01 BMatC= 1.02D-03 BMatP= 8.34D-02IDIUse=3 WtCom= 9.37D-01 WtEn= 6.35D-02Coeff-Com: -0.313D-01 0.103D+01Coeff-En: 0.000D+00 0.100D+01Coeff: -0.293D-01 0.103D+01Gap= 0.301 Goal= None Shift= 0.000RMSDP=1.90D-03 MaxDP=8.30D-03 DE=-4.62D-02 OVMax= 7.45D-02Cycle 3 Pass 1 IDiag 1:E= -78.1603678598281 Delta-E=-0.044295873808 Rises=F Damp=FDIIS: error= 6.21D-04 at cycle 3 NSaved= 3.NSaved= 3 IEnMin= 3 EnMin= -78.1603678598281 IErMin= 3 ErrMin= 6.21D-04ErrMax= 6.21D-04 EMaxC= 1.00D-01 BMatC= 6.84D-06 BMatP= 1.02D-03IDIUse=3 WtCom= 9.94D-01 WtEn= 6.21D-03Coeff-Com: -0.592D-02 0.384D-01 0.967D+00Coeff-En: 0.000D+00 0.000D+00 0.100D+01Coeff: -0.588D-02 0.382D-01 0.968D+00Gap= 0.299 Goal= None Shift= 0.000RMSDP=2.06D-04 MaxDP=2.07D-03 DE=-4.43D-02 OVMax= 1.38D-03Cycle 4 Pass 1 IDiag 1:E= -78.1603763313634 Delta-E=-0.000008471535 Rises=F Damp=FDIIS: error= 6.41D-05 at cycle 4 NSaved= 4.NSaved= 4 IEnMin= 4 EnMin= -78.1603763313634 IErMin= 4 ErrMin= 6.41D-05ErrMax= 6.41D-05 EMaxC= 1.00D-01 BMatC= 7.72D-08 BMatP= 6.84D-06IDIUse=1 WtCom= 1.00D+00 WtEn= 0.00D+00Coeff-Com: 0.287D-03-0.320D-02 0.637D-01 0.939D+00 Coeff: 0.287D-03-0.320D-02 0.637D-01 0.939D+00 Gap= 0.299 Goal= None Shift= 0.000RMSDP=2.36D-05 MaxDP=2.31D-04 DE=-8.47D-06 OVMax= 1.12D-04SCF Done: E(RB+HF-LYP) = -78.1603763314A.U. after 4 cyclesConvg = 0.2365D-04-V/T = 2.0085S**2 = 0.0000KE= 7.750227529344D+01 PE=-2.479757014870D+02 EE= 5.856145342636D+01Leave Link 502 at Mon Dec 22 10:12:16 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l601.exe)Copying SCF densities to generalized density rwf, ISCF=0 IROHF=0.***************************************************** *****************Population analysis using the SCF density.***************************************************** *****************Orbital symmetries:Occupied (B1U) (AG) (AG) (B1U) (B2U) (AG) (B3G) (B3U)Virtual (B2G) (AG) (B2U) (B1U) (B3G) (B1U) (AG) (B2U)(B3U) (B2G) (B1U) (AG) (B3G) (B2U) (B1U) (B3G)(AG) (B1U)The electronic state is 1-AG.Alpha occ. eigenvalues -- -10.11473 -10.11384-0.76450 -0.57896 -0.47393Alpha occ. eigenvalues -- -0.42587 -0.35294-0.27287Alpha virt. eigenvalues -- 0.02574 0.148390.15900 0.18609 0.27999Alpha virt. eigenvalues -- 0.37431 0.658080.70943 0.72999 0.80352Alpha virt. eigenvalues -- 0.84423 0.876271.02327 1.06600 1.10465Alpha virt. eigenvalues -- 1.38482 1.404891.71336Condensed to atoms (all electrons):1 2 3 41 C 5.133974 0.569404 0.3839660.383966 -0.048019 -0.0480192 C 0.569404 5.133974 -0.048019-0.048019 0.383966 0.3839663 H 0.383966 -0.048019 0.510104-0.031643 0.003521 -0.0055644 H 0.383966 -0.048019 -0.0316430.510104 -0.005564 0.0035215 H -0.048019 0.383966 0.003521-0.005564 0.510104 -0.0316436 H -0.048019 0.383966 -0.0055640.003521 -0.031643 0.510104Mulliken atomic charges:11 C -0.3752722 C -0.3752723 H 0.1876364 H 0.1876365 H 0.1876366 H 0.187636Sum of Mulliken charges= 0.00000Atomic charges with hydrogens summed into heavy atoms:12 C 0.0000003 H 0.0000004 H 0.0000005 H 0.0000006 H 0.000000Sum of Mulliken charges= 0.00000Electronic spatial extent (au): <R**2>= 81.0319Charge= 0.0000 electronsDipole moment (field-independent basis, Debye):X= 0.0000 Y= 0.0000 Z= 0.0000 Tot= 0.0000Quadrupole moment (field-independent basis,Debye-Ang):XX= -15.1825 YY= -12.1400 ZZ=-11.9841XY= 0.0000 XZ= 0.0000 YZ=0.0000Traceless Quadrupole moment (field-independent basis, Debye-Ang):XX= -2.0803 YY= 0.9622 ZZ=1.1181XY= 0.0000 XZ= 0.0000 YZ=0.0000Debye-Ang**2):XXX= 0.0000 YYY= 0.0000 ZZZ=0.0000 XYY= 0.0000XXY= 0.0000 XXZ= 0.0000 XZZ=0.0000 YZZ= 0.0000YYZ= 0.0000 XYZ= 0.0000Hexadecapole moment (field-independent basis, Debye-Ang**3):XXXX= -15.4496 YYYY= -24.7454 ZZZZ=-63.7369 XXXY= 0.0000XXXZ= 0.0000 YYYX= 0.0000 YYYZ=0.0000 ZZZX= 0.0000ZZZY= 0.0000 XXYY= -7.2693 XXZZ=-14.2187 YYZZ= -12.4223XXYZ= 0.0000 YYXZ= 0.0000 ZZXY=0.0000N-N= 3.375159643587D+01 E-N=-2.479768211140D+02 KE= 7.750227529344D+01Symmetry AG KE= 3.728364031898D+01Symmetry B1G KE= 0.000000000000D+00Symmetry B2G KE= 4.245017828591D-33Symmetry B3G KE= 2.103943491718D+00Symmetry AU KE= 0.000000000000D+00Symmetry B2U KE= 1.892312781415D+00Symmetry B3U KE= 2.092878738177D+00No NMR shielding tensors so no spin-rotation constants.Leave Link 601 at Mon Dec 22 10:12:16 2014, MaxMem= 4194304 cpu: 0.0(Enter C:\G03W\l607.exe)******************************Gaussian NBO Version 3.1******************************N A T U R A L A T O M I C O R B I T A L A N DN A T U R A L B O N D O R B I T A LA N A L Y S I S******************************Gaussian NBO Version 3.1******************************/RESON / : Allow strongly delocalized NBO set Analyzing the SCF densityJob title: The NBO analysis of ethyleneStorage needed: 2186 in NPA, 2827 in NBO ( 4194170 available)NATURAL POPULATIONS: Natural atomic orbital occupanciesNAO Atom No lang Type(AO) Occupancy Energy----------------------------------------------------------1 C 1 S Cor( 1S) 1.99851-9.960322 C 1 S Val( 2S) 1.04384-0.205393 C 1 S Ryd( 3S) 0.001181.460314 C 1 px Val( 2p) 0.99869-0.109835 C 1 px Ryd( 3p) 0.001310.753026 C 1 py Val( 2p) 1.21847-0.038097 C 1 py Ryd( 3p) 0.003021.046458 C 1 pz Val( 2p) 1.15764-0.049389 C 1 pz Ryd( 3p) 0.0040510 C 2 S Cor( 1S) 1.99851 -9.9603211 C 2 S Val( 2S) 1.04384 -0.2053912 C 2 S Ryd( 3S) 0.00118 1.4603113 C 2 px Val( 2p) 0.99869 -0.1098314 C 2 px Ryd( 3p) 0.00131 0.7530215 C 2 py Val( 2p) 1.21847 -0.0380916 C 2 py Ryd( 3p) 0.00302 1.0464517 C 2 pz Val( 2p) 1.15764 -0.0493818 C 2 pz Ryd( 3p) 0.00405 0.6783819 H 3 S Val( 1S) 0.78566 0.0887020 H 3 S Ryd( 2S) 0.0009921 H 4 S Val( 1S) 0.78566 0.0887022 H 4 S Ryd( 2S) 0.00099 0.7223323 H 5 S Val( 1S) 0.78566 0.0887024 H 5 S Ryd( 2S) 0.00099 0.7223325 H 6 S Val( 1S) 0.78566 0.0887026 H 6 S Ryd( 2S) 0.00099 0.72233WARNING: 1 low occupancy (<1.9990e) core orbital found on C 11 low occupancy (<1.9990e) core orbital found on C 2NBO计算结果的主要内容Summary of Natural Population Analysis:自然电荷Natural PopulationNatural-----------------------------------------------Atom No Charge Core Valence Rydberg Total核心原子价里德伯常数（光谱学单位）-----------------------------------------------------------------------C 1 -0.42670 1.99851 4.418630.00956 6.42670C 2 -0.42670 1.99851 4.418630.00956 6.42670H 3 0.21335 0.00000 0.785660.00099 0.78665H 4 0.21335 0.00000 0.785660.00099 0.78665H 5 0.21335 0.00000 0.785660.00099 0.78665H 6 0.21335 0.00000 0.785660.00099 0.78665===============================================* Total * 0.00000 3.99703 11.979910.02307 16.00000Natural Population --------------------------------------------------------Core 3.99703 ( 99.9257% of 4)Valence 11.97991 ( 99.8325% of 12)Natural Minimal Basis 15.97693 ( 99.8558% of 16)Natural Rydberg Basis 0.02307 ( 0.1442% of 16)--------------------------------------------------------Atom No Natural Electron Configuration自然电子组态----------------------------------------------------------------------------C 1 [core]2S( 1.04)2p( 3.37)3p( 0.01)C的电子组态为：2s1.042p3.38C 2 [core]2S( 1.04)2p( 3.37)3p( 0.01)H 3 1S( 0.79)H 5 1S( 0.79)H 6 1S( 0.79)NATURAL BOND ORBITAL ANALYSIS:Occupancies Lewis Structure Low HighOcc. ------------------- ----------------- occ occCycle Thresh. Lewis Non-Lewis CR BD 3C LP (L) (NL) Dev=============================================== ==============================1(1) 1.90 15.94006 0.05994 2 6 0 0 0 0 0.03-----------------------------------------------------------------------------Structure accepted: No low occupancy Lewis orbitalsWARNING: 1 low occupancy (<1.9990e) core orbital1 low occupancy (<1.9990e) core orbitalfound on C 2--------------------------------------------------------Core 3.99704 ( 99.926% of4)Valence Lewis 11.94302 ( 99.525% of 12)==============================================Total Lewis 15.94006 ( 99.625% of 16)-----------------------------------------------------Valence non-Lewis 0.04717 ( 0.295% of 16)Rydberg non-Lewis 0.01278 ( 0.080% of 16)==============================================Total non-Lewis 0.05994 ( 0.375% of 16) --------------------------------------------------------自然键轨道的组成轨道类型：BD:成键轨道; CR:内层轨道; LP:孤对电子; RY: Rydberg弥散轨道；BD*:反键轨道---------------------------------------------------------------------------------1. (2.00000)BD ( 1) C 1 - C 2 键轨道系数轨道组成( 50.00%) 0.7071* C 1 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)0.0000 0.0000 0.0000 0.9993 -0.0362该键轨道的电子填充数0.0000 0.0000 0.0000 0.0000( 50.00%) 0.7071* C 2 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)0.0000 0.0000 0.0000 0.9993 -0.03620.0000 0.0000 0.0000 0.0000对于C原子，其轨道分别是(与所用基组有关，这里为3-21G)：1s2s3s 1px2px 1py2py 1pz2pz故由上述轨道组成可知，该轨道为C 2px之间形成的π键2. (1.99375) BD ( 2) C 1 - C 2( 50.00%) 0.7071* C 1 s( 39.08%)p 1.56( 60.92%)0.6246 0.0255 0.0000 0.00000.0000 0.0000 -0.7790 -0.0493( 50.00%) 0.7071* C 2 s( 39.08%)p 1.56( 60.92%)0.0002 0.6246 0.0255 0.0000 0.00000.0000 0.0000 0.7790 0.0493对于2号轨道，为C-C σ键，并可见这里C原子采用的sp2杂化方式.3. (1.98732) BD ( 1) C 1 - H 3( 60.77%) 0.7795* C 1 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)-0.0002 0.5521 -0.0111 0.0000 0.00000.7070 -0.0120 0.4415 0.0124( 39.23%) 0.6263* H 3 s(100.00%)1.0000 0.00104. (1.98732) BD ( 1) C 1 - H 4( 60.77%) 0.7795* C 1 s( 30.49%)p0.0002 -0.5521 0.0111 0.0000 0.00000.7070 -0.0120 -0.4415 -0.0124( 39.23%) 0.6263* H 4 s(100.00%)-1.0000 -0.00105. (1.98732) BD ( 1) C 2 - H 5( 60.77%) 0.7795* C 2 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)0.0002 -0.5521 0.0111 0.0000 0.00000.7070 -0.0120 0.4415 0.0124( 39.23%) 0.6263* H 5 s(100.00%)-1.0000 -0.00106. (1.98732) BD ( 1) C 2 - H 6( 60.77%) 0.7795* C 2 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)-0.0002 0.5521 -0.0111 0.0000 0.00000.7070( 39.23%) 0.6263* H 6 s(100.00%) 对3~6号轨道为C-H σ键1.0000 0.00107. (1.99852) CR ( 1) C 1 s(100.00%)p0.00( 0.00%)1.0000 0.0001 0.0000 0.0000 0.00000.0000 0.0000 0.0003 0.00008. (1.99852) CR ( 1) C 2 s(100.00%)p0.00( 0.00%)1.0000 0.0001 0.0000 0.0000 0.00000.0000 0.0000 -0.0003 0.00009. (0.00281) RY*( 1) C 1 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.00000.0169 0.9999 0.0000 0.000010. (0.00158) RY*( 2) C 1 s( 11.86%)p0.0000 -0.0173 0.3440 0.0000 0.00000.0000 0.0000 0.0567 -0.937111. (0.00002) RY*( 3) C 1 s( 88.08%)p 0.14( 11.92%)12. (0.00000) RY*( 4) C 1 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)13. (0.00281) RY*( 1) C 2 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.00000.0169 0.9999 0.0000 0.000014. (0.00158) RY*( 2) C 2 s( 11.86%)p 7.43( 88.14%)0.0000 -0.0173 0.3440 0.0000 0.00000.0000 0.0000 -0.0567 0.937115. (0.00002) RY*( 3) C 2 s( 88.08%)p 0.14( 11.92%)16. (0.00000) RY*( 4) C 2 s( 0.00%)p17. (0.00099) RY*( 1) H 3 s(100.00%)-0.0010 1.000018. (0.00099) RY*( 1) H 4 s(100.00%)-0.0010 1.000019. (0.00099) RY*( 1) H 5 s(100.00%)-0.0010 1.000020. (0.00099) RY*( 1) H 6 s(100.00%)-0.0010 1.00007,8为C的内层轨道，9~20均为弥散轨道，电子填充数较少21. (0.00000) BD*( 1) C 1 - C 2( 50.00%) 0.7071* C 1 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)( 50.00%) -0.7071* C 2 s( 0.00%)p 1.00(100.00%)22. (0.00754) BD*( 2) C 1 - C 2( 50.00%) 0.7071* C 1 s( 39.08%)p 1.56( 60.92%)0.0002 0.6246 0.0255 0.0000 0.00000.0000 -0.7790 -0.0493( 50.00%) -0.7071* C 2 s( 39.08%)p 1.56( 60.92%)0.0002 0.6246 0.0255 0.0000 0.00000.0000 0.0000 0.7790 0.049323. (0.00991) BD*( 1) C 1 - H 3( 39.23%) 0.6263* C 1 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)0.0002 -0.5521 0.0111 0.0000 0.0000-0.7070 0.0120 -0.4415 -0.0124( 60.77%) -0.7795* H 3 s(100.00%)-1.0000 -0.001024. (0.00991) BD*( 1) C 1 - H 4( 39.23%) 0.6263* C 1 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)-0.0002 0.5521 -0.0111 0.0000 0.0000-0.7070( 60.77%) -0.7795* H 4 s(100.00%)1.0000 0.001025. (0.00991) BD*( 1) C 2 - H 5( 39.23%) 0.6263* C 2 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)-0.0002 0.5521 -0.0111 0.0000 0.0000-0.7070 0.0120 -0.4415 -0.0124( 60.77%) -0.7795* H 5 s(100.00%)1.0000 0.001026. (0.00991) BD*( 1) C 2 - H 6( 39.23%) 0.6263* C 2 s( 30.49%)p 2.28( 69.51%)0.0002 -0.5521 0.0111 0.0000 0.0000-0.7070 0.0120 0.4415 0.0124( 60.77%) -0.7795* H 6 s(100.00%)-1.0000 -0.0010轨道NHO Directionality and "Bond Bending" (deviations from line of nuclear centers)[Thresholds for printing: angular deviation > 1.0 degree]hybridp-character > 25.0%orbital occupancy > 0.10eLine of CentersHybrid 1 Hybrid 2---------------------------------- ------------------NBO Theta PhiTheta Phi Dev Theta Phi Dev=============================================== =======================================1. BD ( 1) C 1 - C 2 180.0 0.0 90.0 0.0 90.0 90.0 0.0 90.090.0 1.3 -- -- --4. BD ( 1) C 1 - H 4 58.1 270.0 56.9 270.0 1.3 -- -- --5. BD ( 1) C 2 - H 5 121.9 270.0 123.1 270.0 1.3 -- -- --6. BD ( 1) C 2 - H 6 121.9 90.0 123.1 90.0 1.3 -- -- --Second Order Perturbation Theory Analysis of Fock Matrix in NBO BasisThreshold for printing: 0.50 kcal/molE(2) E(j)-E(i) F(i,j)Donor NBO (i) Acceptor NBO (j) kcal/mol a.u. a.u.=============================================== =============================================== =====within unit 12. BD ( 2) C 1 - C 2 / 24. BD*( 1) C1 - H 4 1.45 1.25 0.0382. BD ( 2) C 1 - C 2 / 25. BD*( 1) C 2 - H 5 1.45 1.25 0.0382. BD ( 2) C 1 - C 2 / 26. BD*( 1) C2 - H 6 1.45 1.25 0.0383. BD ( 1) C 1 - H 3 / 13. RY*( 1) C2 1.46 1.57 0.0433. BD ( 1) C 1 - H 3 / 14. RY*( 2) C2 0.55 1.25 0.0243. BD ( 1) C 1 - H 3 / 22. BD*( 2) C 1 - C 2 1.84 1.23 0.0423. BD ( 1) C 1 - H 3 / 25. BD*( 1) C 2 - H 54.17 1.01 0.0584. BD ( 1) C 1 - H 4 / 13. RY*( 1) C 2 1.46 1.57 0.0434. BD ( 1) C 1 - H 4 / 14. RY*( 2) C 2 0.55 1.25 0.0244. BD ( 1) C 1 - H 4 / 22. BD*( 2) C 1 - C 2 1.84 1.23 0.0424. BD ( 1) C 1 - H 4 / 26. BD*( 1) C 2 - H 6 4.17 1.01 0.0585. BD ( 1) C 2 - H 5 / 10. RY*( 2) C 1 0.55 1.25 0.0245. BD ( 1) C 2 - H 5 / 22. BD*( 2) C 1 - C 2 1.84 1.23 0.0425. BD ( 1) C 2 - H 5 / 23. BD*( 1) C 1 - H 3 4.17 1.01 0.0586. BD ( 1) C 2 - H 6 / 9. RY*( 1) C 1 1.46 1.57 0.0436. BD ( 1) C 2 - H 6 / 10. RY*( 2) C 1 0.55 1.25 0.0246. BD ( 1) C 2 - H 6 / 22. BD*( 2) C 1 - C 2 1.84 1.23 0.0426. BD ( 1) C 2 - H 6 / 24. BD*( 1) C 1 - H 4 4.17 1.01 0.0587. CR ( 1) C 1 / 14. RY*( 2) C 2 5.38 10.69 0.2147. CR ( 1) C 1 / 17. RY*( 1) H 3 1.72 10.68 0.1217. CR ( 1) C 1 / 18. RY*( 1) H 4 1.72 10.68 0.1217. CR ( 1) C 1 / 22. BD*( 2) C 1 - C 2 1.16 10.67 0.0998. CR ( 1) C 2 / 19. RY*( 1) H 5 1.72 10.68 0.1218. CR ( 1) C 2 / 20. RY*( 1) H 6 1.72 10.68 0.1218. CR ( 1) C 2 / 22. BD*( 2) C 1 - C 2 1.16 10.67 0.099Natural Bond Orbitals (Summary):Principal DelocalizationsNBO Occupancy Energy (geminal,vicinal,remote)=============================================== =====================================Molecular unit 1 (C2H4)1. BD ( 1) C 1 - C 22.00000-0.272872. BD ( 2) C 1 - C 2 1.99375-0.76213 23(g),24(g),25(g),26(g)-0.52360 25(v),22(g),13(v),14(v)4. BD ( 1) C 1 - H 4 1.98732 -0.52360 26(v),22(g),13(v),14(v)5. BD ( 1) C 2 - H 5 1.98732 -0.52360 23(v),22(g),9(v),10(v)6. BD ( 1) C 2 - H 6 1.98732 -0.52360 24(v),22(g),9(v),10(v)7. CR ( 1) C 1 1.99852 -9.96047 14(v),17(v),18(v),22(g)8. CR ( 1) C 2 1.99852 -9.96047 10(v),19(v),20(v),22(g)9. RY*( 1) C 1 0.00281 1.0477610. RY*( 2) C 1 0.00158 0.7286011. RY*( 3) C 1 0.00002 1.3913812. RY*( 4) C 1 0.00000 0.7582813. RY*( 1) C 2 0.00281 1.0477614. RY*( 2) C 2 0.00158 0.728601.3913816. RY*( 4) C 2 0.00000 0.7582817. RY*( 1) H 3 0.00099 0.7217518. RY*( 1) H 4 0.00099 0.7217519. RY*( 1) H 5 0.00099 0.7217520. RY*( 1) H 6 0.00099 0.7217521. BD*( 1) C 1 - C 2 0.00000 0.0426922. BD*( 2) C 1 - C 2 0.00754 0.7066223. BD*( 1) C 1 - H 3 0.00991 0.4890924. BD*( 1) C 1 - H 4 0.00991 0.4890925. BD*( 1) C 2 - H 5 0.00991 0.4890926. BD*( 1) C 2 - H 6 0.00991 0.48909。

2017-2020年我国部分地区PRRSV流行毒株变异情况分析

Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2021,29(5):64-74·研究论文·2017-2020年我国部分地区PRRSV 流行毒株变异情况分析吴瑕，劳梦琴，谭祥梅，陈鹏飞，于家荣，朱钧锐，张玉娇，虞凌雪，高飞，姜一峰，童光志，周艳君（中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）摘要：为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）流行毒株的遗传变异情况，本研究对采集自上海市、浙江省、江苏省等地区的566份临床样品进行RT-PCR 检测，结果显示，其中246份样品呈现PRRSV 阳性。

对31株Nsp2基因、21株ORF5基因和12株Nsp9基因进行序列测定和比对分析，发现不同地区流行的PRRSV 其Nsp2基因片段大小存在明显差异，大部分毒株保持了HP-PRRSV 类毒株Nsp2基因“1+29 aa ”缺失模式，同时，检测到“111+5+1+19 aa ”和“1+29+14 aa ”两种新的氨基酸缺失模式。

ORF5基因主要分布在谱系L8、L3和L1中，氨基酸突变主要位于GP5的信号肽区域和高变区，部分毒株在中和性抗原表位区域存在L39/I39的氨基酸突变，有1株存在H38L39/Y38S39的氨基酸突，另外，部分毒株在毒力相关位点出现了R13/Q13和R151/K151的氨基酸突变，而Nsp9与毒力相关的氨基酸位点则相对保守。

本研究表明上述发病猪场中流行的PRRS 毒株复杂多样，其中HP-PRRSV 类毒株和NADC30类毒株仍然是主要流行毒株，养猪场有必要持续监测PRRSV 流行毒株的变异动态，为PRRS 的科学防控提供参考依据。

关键词：PRRSV ；Nsp2；ORF5；遗传变异中图分类号：S852.659.6文献标志码： A文章编号：1674-6422（2021）05-0064-11Analysis on Variation of PRRSV Epidemic Strains in Some Areas of ChinaWU Xia, LAO Mengqin, TAN Xiangmei, CHEN Pengfei, YU Jiarong, ZHU Junrui, ZHANG Yujiao,YU Lingxue, GAO Fei, JIANG Yifeng, TONG Guangzhi, ZHOU Yanjun(Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China)收稿日期：2021-01-13基金项目：上海市科技兴农项目（2020-02-08-00-08-F01465）；国家自然科学基金（32072861）；上海市自然科学基金项目（20ZR1469600）；国家生猪现代产业技术体系（CARS-35）作者简介：吴瑕，女，硕士研究生，预防兽医学专业通信作者：Abstract: In order to understand the genetic variation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) epidemic strains, 566 clinical samples were collected from Shanghai, Zhejiang, Jiangsu and other regions of China and detected by RT-PCR in this study. The results showed that 246 samples were PRRSV positive. Sequence analysis of NSP2 genes of 31 strains, ORF5 genes of 21 strains and NSP9 genes of 12 strains showed that there were signiﬁ cant differences in the size of NSP2 gene among PRRSV strains prevalent in different regions. Most of the NSP2 genes maintained the “1+29 aa” deletion pattern of HP-PRRSV strains, and two new amino acid deletion patterns of “111+5+1+19 aa” and “1+29+14 aa” were detected. ORF5 genes were mainly distributed in the lineages L8, L3 and L1, and amino acid mutations were mainly located in the signal peptide region and hypervariable region of GP5, among which some strains had the L39/I39 mutations in the neutralizing epitope, and one strain displayed the H38L39/Y38S39 mutation in the neutralizing epitope of GP5. Some strains showed R13/Q13 and R151/K151 mutations at virulence-related amino acid sites in GP5, while the· 65 ·第29卷第5期吴瑕等：2017-2020年我国部分地区PRRSV流行毒株变异情况分析virulence-related amino acid sites in NSP9 were relatively conserved. The results of this study showed the complex diversity of PRRSV prevalence in the above PRRSV-positive pig farms, among which HP-PRRSV strains and NADC30 strains were the main PRRSV strains. This study reminds us the necessity of continuously monitoring the variation dynamics of PRRSV epidemic strains, so as to provide reference for scientiﬁ c prevention and control of PRRS.Key words:PRRSV; Nsp2; ORF5; genetic variation猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状及死亡的高度接触性传染病，其病原猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）是一种易于发生变异和重组的单股正链RNA病毒，该疾病可造成持续性感染和免疫抑制，对养猪业危害极为严重[1]。

猪丁型冠状病毒的分离鉴定

2021第3期 125融合，同时也是诱导机体产生中和抗体的主要抗原蛋白[3-4]。

最早于2012年由Woo等从中国香港收集的猪粪便拭子中检测到，随后国内研究学者贺东生等从严重腹泻的新生仔猪小肠病料中检测到PDCoV，且有证据显示2004年前国内不同地区的猪群中已存在PDCoV [2，5-6]。

PDCoV可感染各种年龄段的猪群，但对新生仔猪的危害最大，感染率最高，引起的死亡率约为30%~40%[7]。

感染仔猪临床表现为水样腹泻、呕吐、脱水，剖检病理结果显示肠壁变薄，变透明，肠内充斥着大量黄色液体，组织病理学变化主要见于空肠中、远端和回肠，十二指肠和空肠近端的病变不明显，病变主要表现为肠绒毛上皮细胞萎缩、坏死，同时退化猪丁型冠状病毒的分离鉴定陈奕帆1，邱文英1，张丽燕1，孙继海1，郝伟伟1，严应海2（1.华派生物工程集团有限公司，四川成都 641402；2.简阳市十里坝街道办事处社区事务服务中心，四川简阳 641400）中图分类号：S858.285.3 文献标志码：Ａ文章编号：1002-1957(2021)03-0125-04摘要 2016年从某商品化猪场采集到6份疑为病毒性腹泻的腹泻仔猪小肠样本，利用 RT-PCR 对样品进行检测，检出1份猪丁型冠状病毒（Porcine Deltaconoravirus, PDCoV）阳性样品，使用ST细胞进行病毒分离和传代。

通过细胞病变（CPE）、RT-PCR及S基因序列测定分析对分离的病毒进行鉴定，试验结果表明，已成功分离到一株能在ST细胞上稳定增殖并能产生典型CPE的猪丁型冠状病毒，命名为SCMS株。

该毒株S基因长度为3 480个核苷酸，与GenBank中登录23个参考毒株之间的同源性为95.9%~98.5%，其中与2018年山东分离株SD-11-2018同源性最高，为98.5%。

该毒株的成功分离为进一步开展PDCoV的生物学特性研究和疫苗研制奠定了基础。

内切_1_3_葡聚糖酶产生菌的分离筛选与鉴定.

菌落。

在自然条件下进行分离培养 , 都能出现这三种类型菌落 , 并且它们之间可以相互转化。

经多次传代培养观察灰色粉末型菌落是它的主要形态 , 该类型的菌落形态相对稳定一些。

菌落特征与产抗关系见表 1。

在实验中以灰色粉末型菌落为主进行发酵 , 考察产抗情况 , 并在平板培养基上反复传代 , 挑取那些特征相对稳定的菌落作为出发菌株进行下一步的诱变处理。

212诱变筛选高产菌株 21211紫外线诱变选取灰色粉末型菌落进行紫外线诱变处理。

实验中发现 , 该菌株对紫外线十分敏感 , 作用时间超过 1m in 后 , 致死率几乎达到 100%, 这与一般链霉菌的差异较大。

诱变结果见表 2。

随机挑取 238个经 U V 诱变的灰色粉末型菌落 , 发酵测定阿维菌素的产量 , 发现这些菌株的产抗能力普遍提高。

从中选挑 75个产抗能力强的菌株进一步发酵筛选 , 获得一菌落特性及阿维菌素产量均较稳定的变异株 H 136, 其发酵单位达77μg/m L 。

与出发菌株 Y 20相比 , 产量提高了 10倍。

21212亚硝酸诱变出发菌株经亚硝酸酸作用后 , 统计其致死率及正变率 , 结果见图 1。

U V 诱变后获得的变异株 H 136经亚硝酸 10m in 诱变处理后 , 挑取灰色粉末型菌落发酵检测阿维菌素产量。

从 78个变异株中 , 反复筛选得到一稳定的高产突变株 H 236, 阿维菌素总发酵单位达到412μg/m L , 其中 B1主份产量较高 , 达107μg/m L 。

21213亚硝基胍 (NTG诱变将 H 236突变株用 NTG 处理 , -(L -I le 落中最终筛选到 H 336, 阿维菌素发酵单位达到852μg/m , 216μg/m L ,占总效价的 25%。

, 100倍以上。

3讨论311阿维菌素产生菌的菌落特性不稳定 , 无论是在自然条件下还是在诱变处理后都会出现菌落形态的分化。

从统计结果看 , 诱变处理后分化得更明显 , 并且其类型也更为复杂 , 有些菌落的表面出现裂痕 , 但仍以灰色粉末型为主 , 该类型菌落的产抗能力最强。

猪偶发分枝杆菌核酸修复蛋白基因的克隆与序列分析

序列分析。
引物对ｒｃ基因进行ＰＲ增，扩增产物经１的琼脂糖凝胶电ｅＡＣ扩％Ｂｆｅ、ＴＰ０受态细胞、核酸分子量标准Ｄ００Ｄ２９ｕｆｒＯｌ感２０及Ｐ０离心泳分析，可见约１０ｂ长度的条带，与目的片段长度相近。约Ｏ０ｐ柱型普通ＤＡ胶回收试剂盒等为天津天根生化科技（京）有１０ｂ和约６０ｐ出现的为杂带，此为引物设计特异性不高所Ｎ凝北５０ｐ０ｂ处
和感染后治疗提供基础分子生物学资料。
１材料与方法
１１材料．
ＰＲ测和双酶切鉴定插入片段是否正确。Ｃ检１２７重组质粒的序列分析取鉴定为阳性的菌液送北京华大六．．合基因科技股份有限公司进行测序，并对测序结果用ＢＡＴＬＳ进行
组质粒ｐＭＴｒｃ，通过蓝白班筛选、ＰＲ检以及序列分析等Ｇ－－ｅＡＣ菌方法鉴定重组质粒。其中通过ＰＲＣ鉴定，可见到约ｌ０ｂ的单一Ｏ０ｐ条带图２。）２３基因的序列分析．
由非致病菌变成了致病菌。研究表明，Ｍｆｒｕｔｍ具有极强．ｏｔｉｕ就的变异性。近年来就不断有Ｍｆｒｕｔｍ．ｏｔｉｕ的病例出现。福建省南平市杨建等报道了３例患者因该市某基层诊所消毒不严格引起９Ｍｆｒｕｔｍ染，北京协和医院王澎等从ｌ．ｏｔｉｕ感例外科手术导致

基于DEFORM3D的离合块冷挤压工艺优化

第34卷第5期饭层技#2009年10月Vo l‘34N o．5F Q RG l N G＆S可A M P I N G TECHNO l OGⅣOct．2009基于DEFORM一3D的离合块冷挤压工艺优化孙健。

张水忠(I-海工程技术大学材料工程学院，上海201620)摘要：对离合块零件进行了工艺分析，提出了两种不同的方案，通过建立有限元模型，并借助D E F DR M-3D对该零件两方案进行了数值模拟，把模拟得到的应力、应变、速度、载荷等数据与实际冷挤压生产工艺相结合，通过多次计算机模拟确定了：方案一不合理，并分析了导致模具损坏的原因；方案二的结果较优，与实际挤压情况相符合，最终挤压出符合图纸要求的合格产品。

关键词：离合块；工艺分析；数值模拟；冷挤压DOI：10．3969／j．issn．1000-3940．2009．05．004中图分类号：T G376．3；TP391．9文献标识码：A文章编号：1000-394012009)05-0012-04Process optimization of c lu t c h bl ock cold extrusion bas ed o n DEFoRM一3DS U N Jian。

刃阻螂Shubzhong(Co ll eg e of Materials E n gi n e er i n g，S h an g h a i U ni ve rs it y of Engineering S ci e nc e，S ha n gh a i 201620，C h i n a) Abstra ct：T he pr oc es s analysis a n d optimi za tio n for t he clutc h b lo ck w e r e descr ib e d．T he fimt e e l e me n t model W S Sted based o n tw o different schemes，and nu me ri ca l si mul at ion w a s pmposed using so ft wa re pa c k ag e of D．EFoRM一3 D．T h e stress，strain，ve locity di strib ution，lo ad a n d o the r d at a w e r e compared with the actual c ol d e xt ru si o n process．Fi—mUy，the scheme o n e w a s irrationality a n d the r e a s o n about th e die fa i lu r e w a s analyzed，and the result of th e schemet w o w a s better than the scheme o n e．T h e simula ti on result w a s incorporated into t he actual pro du ct i on proce ss and th e pr o du ct s were got which me t the draft requi rement s．Ke y w or d s：c lu t c h block；pmcess analysis；numerical si mu lat ion；col d ext ru si o n运用数值模拟技术来进行冷挤压工艺优化是一种常用的研究方法。

超声心动图诊断成人永存动脉干1例

患者女，39岁，因进展期直肠癌来我院就诊。

自诉既往外院诊断法洛四联症，未治疗。

现我院心电图检查：窦性心律，电轴右偏，肢体导联低电压，不完全性右束支阻滞。

超声心动图检查：心房正位，心室右袢，右房血液进入右室，左房血液进入左室；见单一动脉干连接于心室，骑跨于室间隔上方，收缩期可见左、右心室血流经半月瓣（三瓣）共同流入骑跨其上的动脉干；肺动脉主干及左、右分支均显示不清，主动脉弓及降主动脉向右后下方走行，显示段未见明显异常分支（图1）；②动脉干瓣下的室间隔连续中断，可探及双向分流血流信号，左向右分流峰值流速4.7m/s，压差55mm Hg （1mm Hg=0.133kPa），右向左分流峰值流速2.3m/s，压差21mm Hg；③舒张期半月瓣见反流血流信号达二尖瓣腱索水平，反流缩流颈宽约4mm；三尖瓣上可探及反流血流信号到达右房中部，反流速度4.7m/s，跨瓣压差88mm Hg。

胸部CT示：室间隔基底段局部缺损，主动脉增粗并骑跨于左右心室，右室壁增厚，右位主动脉弓（图2）。

胸部CTA示：升主动脉、主动脉弓及降主动脉上段均增粗，右侧颈总动脉及锁骨下动脉单独发出，左侧颈总动脉、锁骨下动脉共干并增粗，左下肺动脉源于增粗的共干动脉，右肺动脉及左上肺动脉源于降主动脉（图3）。

综合上述检查提示：①永存动脉干Ⅲ型；②右位主动脉弓。

临床会诊建议：复杂性先天性心脏病：永存动脉干（失去手术根治机会），心功能Ⅱ级。

患者后行直肠癌根治手术，术后恢复可。

讨论：永存动脉干是一种少见的先天性心脏病，由带有一组半月瓣的单一大动脉起源于心底部，供应冠状动脉、肺动脉和周围动脉。

该畸形是胎儿发育过程中原始动脉干分离失败的结果，与染色体22q11缺失有关［1］。

永存动脉干通常分为4型［2］：Ⅰ型最常见，肺动脉主干自共同动脉干发出，分出左、右肺动脉；spectroscopic detection of DNA-damage effects at high and lowfrequencies［J］.Methods Mol Biol，2011，682（4）：165-187.［12］王志刚.多功能超声分子探针显像与增效高强度聚焦超声治疗［J］.临床超声医学杂志，2017，19（9）：577-579.［13］孙阳.超声分子探针围绕精准医学的发展及展望［J］.临床超声医学杂志，2020，22（1）：49-51.［14］Rybczynska AA，Boersma HH，de Jong S，et al.Avenues to molecular imaging of dying cells：focus on cancer［J］.Med Res Rev，2018，38（6）：1713-1768.［15］Min PK，Lim S，Kang SJ，et al.Targeted ultrasound imaging of apoptosis with Annexin A5microbubbles in acute Doxorubicin-inducedcardiotoxicity［J］.J Cardiovasc Ultrasound，2010，18（3）：91-97.［16］Wei X，Li Y，Zhang S，et al.Ultrasound targeted apoptosis imaging in monitoring early tumor response of trastuzumab in a murine tumorxenograft model of her-2-positive breast cancer（1.）［J］.TranslOncol，2014，7（2）：284-291.［17］Zhou T，Cai WB，Yang HL，et al.Annexin V conjugated nanobubbles：a novel ultrasound contrast agent for in vivo assessment of theapoptotic response in cancer therapy［J］.J Control Release，2018，276（8）：113-124.［18］Zhang DJ，Jin QM，Jiang CH，et al.Imaging cell death：focus on earlyevaluation of tumor response to therapy［J］.Bioconjug Chem，2020，31（4）：1025-1051.［19］Tawakol A，Abohashem S，Zureigat H.Imaging apoptosis in atherosclerosis：from cell death，aray of light［J］.J Am Coll Cardiol，2020，76（16）：1875-1877.［20］Chaudhry F，Kawai H，Johnson KW，et al.Molecular imaging of apoptosis in atherosclerosis by targeting cell membrane phospholipidasymmetry［J］.J Am Coll Cardiol，2020，76（16）：1862-1874.［21］Lee Y，Kim S，Kim D，et al.A histone H1-binding-aptide-based apoptosis imaging probe for monitoring tumor responses to cancertherapy［J］.Medchemcomm，2017，8（2）：390-393.［22］Jung HK，Wang K，Jung MK，et al.In vivo near-infrared fluorescence imaging of apoptosis using histone H1-targeting peptide probe afteranti-cancer treatment with cisplatin and cetuximab for early decisionon tumor response［J］.PLoS One，2014，9（6）：e100341.［23］赵萍，马晓菊，杨恒丽，等.携ApoPep-1纳米微泡靶向成像评价活体内肿瘤凋亡的实验研究［J］.中国医学影像学杂志，2020，28（12）：901-906.［24］Li J，Yuan J.Caspases in apoptosis and beyond［J］.Oncogene，2008，27（48）：6194-6206.（收稿日期：2021-01-03）·病例报道·Echocardiographic diagnosis of persistent truncus arteriosus in adult：a case report超声心动图诊断成人永存动脉干1例唐茂玲唐晶李玲顾鹏［中图法分类号］R540.45［文献标识码］B作者单位：637000四川省南充市，川北医学院（唐茂玲、唐晶）；川北医学院附属医院超声科（李玲、顾鹏）通讯作者：顾鹏，Email：******************（下转第460页）［19］Upshaw JN ，Finkelman B ，Hubbard RA ，et prehensiveassessment of changes in left ventricular diastolic function with contemporary breast cancer therapy ［J ］.JACC ：Cardiovascular Imaging ，2020，13（1Pt 2）：198-210.［20］Nagueh SF ，Smiseth OA ，Appleton CP ，et al.Recommendations for theevaluation of left ventricular diastolic function by echocardiography ：an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging ［J ］.Eur Heart JCardiovasc Imaging ，2016，17（12）：1321-1360.［21］Timóteo AT ，Moura Branco L ，Filipe F ，et al.Cardiotoxicity in breastcancer treatment ：what about left ventricular diastolic function andleft atrial function?［J ］.Echocardiography ，2019，36（10）：1806-1813.［22］Abdel-Qadir H ，Thavendiranathan P ，Fung K ，et al.Association ofearly-stage breast cancer and subsequent chemotherapy with risk ofatrial fibrillation ［J ］.JAMA Netw Open ，2019，2（9）：2739-2746.［23］Calleja A ，Poulin F ，Khorolsky C ，et al.Right ventricular dysfunctionin patients experiencing cardiotoxicity during breast cancer therapy［J ］.J Oncol ，2015，8（3）：609194.［24］Keramida K ，Farmakis D ，Bingcang J ，et al.Longitudinal changes ofright ventricular deformation mechanics during trastuzumab therapy in breast cancer patients ［J ］.Eur J Heart Fail ，2019，21（4）：529-535.［25］Arciniegas Calle MC ，Sandhu NP ，Xia H ，et al.Two-dimensional speckletracking echocardiography predicts early subclinical cardiotoxicity associated with anthracycline-trastuzumab chemotherapy in patientswith breast cancer ［J ］.Bmc Cancer ，2018，18（1）：1037.［26］Cheng KH ，Handschumacher MD ，Assuncao BMBL ，et al.Contraction timing patterns in patients treated for breast cancer before and after anthracyclines therapy ［J ］.J Am Soc Echocardiogr ，2017，30（5）：454-460.［27］Li H ，Liu C ，Zhang G ，et al.The early alteration of left ventricularstrain and dys-synchrony index in breast cancer patients undergoing anthracycline therapy using layer-specific strain analysis ［J ］.Echocardiography ，2019，36（9）：1675-1681.（收稿日期：2020-05-08）Ⅱ型，无肺动脉主干，左、右肺动脉分别从共同动脉干的后壁发出；Ⅲ型，无肺动脉主干，左、右肺动脉分别从共同动脉干的侧壁发出；Ⅳ型，无肺动脉主干及左、右肺动脉，肺循环的血供来源于支气管动脉或其他动脉。

2017-2018年河南省猪流行性腹泻病毒S基因序列分析

2017—2018年河南省猪流行性腹泻病毒S基因序列分析赵攀登】，陈益1,朱文龙1,冀梦瑶1,卢建洲1,王岩1,刘静静1,朱芳1,田欣1,赵圣杰2(1.河南牧业经济学院动物医药学院，河南450046； 2.河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州450000)摘要:为分析河南省猪流行性腹泻病毒S基因的遗传变异情况,本试验于2017年10月一2018年2月从河南省8个规模化猪场采集80腹症状的仔猪肠道样品，利用RT-XCR方法进行猪流行性腹泻病毒检测,并对部性样品进行S 基因全长序、测序遗传进％8个规模猪场80样品中共检6个场60样品为猪流行性腹泻病毒阳性，阳性率为75%；选取的6株猪行性腹泻代S基因酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别是98.4%-99.9%和98.2%-100%,与经典毒株CV777之间的同源性分别是93.7%-94.9%和92.4%-94.6%；遗传进化分析显示,6株猪行性腹泻代同一群，与CV777在不同的,河南省猪流行性腹泻病毒流行毒疫苗毒株亲缘关远。

本试验明确了河南省猪流行性腹泻病毒遗传变异情况,为猪流行性腹泻的诊断和防了％关键词:猪流行性腹泻病毒；S基因；遗传变异中图分类号：S852.65g1文献标志码：A文章编号：0529—6005(2020)12—0005—03Sequence Analysis of S Gene of Porcine EpiCemic DiarrUeaVirus in Henan Province from2017to2018ZHAO Pan-deng1,CHEN Yi1,ZHU Wen-long1,JI Meng-yao1,LU Jian-zhou1,WANG Yan1,LIU Jing-jing1,ZHU Fang1,TIAN Xin1,ZHAO Sheng-jie2(1.Colleae of Veterinary Medicine,Henan University of Animat Husbandry and Economy,Zhengzhou450046,China；2.Henan Animal Disease Prevention and Controt Centee,Zhengzhou450000,China)Abstract:In order te investigate the genetic variations of S gene of porcine epidemic diarrhec virus(PEDV)in Henan province, a total of80clinicct samples were ccllected from8larye-sccle pi farms in Henan province from2017Oct te2018Feb.Alt samples were detected by RT-PCR and full-length S genes of some positive samples were amplified and sequenced.The phylogenic relationships of S genes were analyzed with other PEDV referencc strains.The results indicated that60samples from6larye-sccle pia farms were PEDV positive,and the positive rate was75%.Sequencc analysis showed that the sequence homologies of nucleotides and amino acids in full-length S gene were98.4%〜99.9%and98.2%〜100%among6PEDV strains,pared with classical strain CV777,the sequencc homologies were93.7%〜94.9%and92.4%〜94.6%.Phylogenic analysis showed that6PEDV strains were in the same branch but not the branch with the classical strain CV777,which indicated that the epidemic isolates of PEDV in Henan province were not closely related te the vaccine strain.These results have determined the genetic variations of PEDV in Henan province and laiV the foundation for the diagnosis and prevention of PEDV in this area.K)y words:poeccneepcdemccdca e heaeceu&；S gene；geneecceaecaeconCorr)spondnng aurhor:ZHAOSheng-ice,E-mace:441920803@收稿日期：2019—05—29基金项目：河南牧业经济学院科研创新项目(53000086, 53000202)；河南牧业经济学院博士启动基金(53000213, 53000137)；河南牧业经济学院教研项目(25000234,84000135)；河南牧业经济学院预防兽医学重点学科(MXK2016102):赵攀登(1986-),男，，博士，主要从事动物分子病毒学和分子免疫学研究,E-mait：zhaopdl986@ 通讯作者:赵圣杰,E-maii：441920803@猪流行性腹泻(Porcina epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcina epidemic diarrhea virus,PEDV)的一性髙度性肠道传染病，症为、水样腹泻、脱水:[1]%该病于1971年在英国首次，随至多个国家和地区，地行性[2]%2010年10，中国南PED,疫情迅速全国，随后多个国家和地区均暴发PED,对全球的养猪业造成了巨大的经济损失PEDV属于I型冠状病毒,是有囊膜的单股正链RNA病毒。

基于改进G-四链体DNA_酶的电化学适配体传感器构建及卡那霉素高灵敏检测

㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀2023年12月第38卷第6期JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY㊀Vol.38No.6Dec.2023㊀收稿日期:2023-03-16;修回日期:2023-05-01;出版日期:2023-12-15基金项目:河南省重点研发与推广专项项目(222102310140);河南省高等学校重点科研项目(21A550015);郑州轻工业大学博士启动科研基金项目(0123-135****0070)作者简介:伍永梅(1987 ),女,河南省新乡市人,郑州轻工业大学讲师,博士,主要研究方向为食品安全和疾病标志物检测㊂E-mail :wuyongmei@通信作者:白艳红(1975 ),女,辽宁省彰武县人,郑州轻工业大学教授,博士,主要研究方向为肉制品加工与安全控制㊂E-mail :baiyanhong212@163.com伍永梅,朱肖倩,方娇,等.基于改进G -四链体DNA 酶的电化学适配体传感器构建及卡那霉素高灵敏检测[J].轻工学报,2023,38(6):62-69.WU Y M,ZHU X Q,FANG J,et al.Construction of electrochemical aptasensor for highly sensitive detection of kanamycin based on the improved G-quadruplex DNAzyme[J].Journal of Light Industry,2023,38(6):62-69.DOI:10.12187/2023.06.008基于改进G -四链体DNA 酶的电化学适配体传感器构建及卡那霉素高灵敏检测伍永梅1,2,3,朱肖倩1,方娇1,白艳红1,2,31.郑州轻工业大学食品与生物工程学院,河南郑州450001;2.河南省冷链食品质量安全控制重点实验室,河南郑州450001;3.食品生产与安全河南省协同创新中心,河南郑州450001摘要:将阳离子多肽(peptide )与G -四链体DNA 酶(G4DNAzyme )共价组装得到高活性的G4DNAzyme-peptide 复合物,进一步构建新型电化学适配体传感器,研究该复合物对电化学适配体传感器响应性能的影响,并将该传感器用于牛奶中卡那霉素(KANA )的检测分析㊂结果表明:G4DNAzyme-peptide 可以显著放大电化学信号,明显提高传感器检测灵敏度;在捕获探针序列最优浓度(2.0μmol /L )下,电流信号强度变化与目标物浓度(0.06pmol /L ~20nmol /L )对数值呈良好的线性关系,检测限为0.02pmol /L ,优于其他KANA 检测方法;该传感器对KANA 具有良好的选择性,在实际牛奶样品检测中,KANA 的加标回收率为97.1%~105.5%,相对标准差为3.60%~5.74%,且检测结果与ELISA 法一致,说明该传感器能够实现牛奶中KANA 的高灵敏检测㊂关键词:G -四链体DNA 酶;电化学适配体传感器;卡那霉素;高灵敏度中图分类号:TS207.3㊀㊀文献标识码:A㊀㊀文章编号:2096-1553(2023)06-0062-080㊀引言卡那霉素(Kanamycin,KANA)是一种氨基糖苷类抗生素,可以抑制革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌蛋白质的合成,常作为兽药广泛用于畜牧业中奶牛的饲养[1]㊂但过量使用会导致牛奶中的抗生素残留,残留的KANA 通过食物链进入人体,经过长时间的体内积累对人体造成损伤㊂传统的抗生素检测技术主要包括高效液相色谱(HPLC)法[2]㊁液相色谱-质谱(LC-MS)法[3]㊁毛细管电泳(CE)法[4]㊁酶联免疫分析(ELISA)法[5]㊁气相色谱-质谱(GC-MS)法[6]㊂但这些技术均存在预处理步骤繁琐㊁操作成本高昂等问题[7]㊂因此,开发一种快速㊁可靠㊁便捷的抗生素检测方法具有重要意义㊂㊃26㊃㊀伍永梅,等:基于改进G-四链体DNA酶构建电化学适配体传感器高灵敏检测卡那霉素电化学检测技术因灵敏度高㊁设备简单㊁便携性强等优点,在生物传感器领域得到广泛应用[8-9]㊂适配体是通过指数富集的配体系统进化技术筛选的短单链DNA(ssDNA)或RNA片段,可以特异性识别DNA㊁RNA㊁抗生素㊁蛋白质等目标物㊂与抗体㊁酶等其他识别分子相比,适配体具有结合能力强㊁特异性高等优点[10]㊂因此,电化学适配体传感器可广泛应用于疾病标志物㊁金属离子和食品危害物的检测㊂M.X.Li等[11]通过目标物microRNA与适配体特异性识别,利用杂交链式反应(Hybrid Chain Reaction, HCR)和Mg2+DNA酶构建电化学适配体传感器,实现了癌症细胞中microRNA的灵敏检测㊂ C.Lei 等[12]基于金纳米粒子(AuNPs)和铀酰离子(UO2+2) DNA酶辅助的电化学适配体传感器,对水中UO2+2进行电化学检测,检测限可达6.2pmol/L㊂G-四链体(G4)是由一段富含鸟嘌呤(G)碱基的寡核苷酸序列组成[13],可以在单价阳离子(如Na+㊁K+)的作用下与卟啉铁(Hemin)结合,形成具有辣根过氧化物酶(HRP)活性的模拟酶,即Hemin/ G4DNAzyme[14]㊂Hemin/G4DNAzyme具有成本低㊁稳定性好㊁催化活能高等优点,可催化底物H2O2加速电子转移,显著增强电化学信号[15],但比天然HRP活性低㊂鉴于此,本文拟以KANA为目标物,将多肽(Peptide)与G4DNAzyme共价组装得到高活性的G4DNAzyme-peptide复合物,以Hemin为电子媒介体构建电化学适配体传感器,考查该复合物对电化学适配体传感器响应性能的影响,并将该传感器应用于牛奶中KANA的检测,以期为食品中抗生素的高灵敏检测提供新思路㊂1㊀材料与方法1.1㊀主要材料与试剂牛奶,郑州市高新区大张超市;卟啉铁(Hemin)㊁6-巯基己醇(6-Mercaptohexyl Alcohol, MCH)㊁三(2-羧乙基)膦酸盐(Tris-(2-carboxyethyl)-phosphine Hydrochloride,TCEP)㊁氯金酸(HAuCl4),均为分析纯,Sigma-Aldrich公司;组氨酸多肽(Pep-tide),上海科肽生物技术有限公司(中国);卡那霉素(KANA)㊁妥布霉素(Tobramycin,TOB)㊁链霉素(Streptomycin,STR)㊁四环素(Tetracycline,TET),均为标准品,上海阿拉丁生化科技股份有限公司;5ˑTBE缓冲液,海生工生物工程有限公司;抗生素适配体序列[16](Aptamer,Apt:5ᶄ-TGGGGGTTGAGGCTA-AGCCGA-3ᶄ,解离常数为78.8nmol/L)㊁模板DNA 序列(Template,TP:5ᶄ-CCCGCCCTACCCACAGTGAT-CGGCTTAGAGGACTACCCCCA-3ᶄ)㊁辅助探针序列(Assistant Probe,AP:5ᶄ-GTCCTCTAAGCCGATCACT-GTGGGTAGGGCGGG-3ᶄ)㊁捕获探针序列(Capture Probe,CP:5ᶄ-SH-AGTGATCGGAAAAAA-SH-3ᶄ)㊁叠氮(N3)标记的含G碱基的DNA序列(N3-G4DNA:5ᶄ-N3-CCGATCACTGTGGGTAGGGCGGGTTGG-3ᶄ)㊁二苯并环辛炔(Dibenzocyclooctyne,DBCO)标记的多肽序列(DBCO-peptide:5ᶄ-HHHHHHAAA-DBCO-3ᶄ),上海生工生物工程有限公司㊂其他实验常用试剂均为分析纯㊂1ˑTE缓冲液(pH=8.0):由10mmol/L Tris-HCl与1.0mmol/L EDTA混合配制,用于溶解和保存寡核苷酸;PBS缓冲液(pH=7.4):由0.1mol/L KCl㊁0.1mol/L Na2HPO4与0.1mol/L NaH2PO4混合配制㊂1.2㊀主要仪器与设备CHI660e型电化学工作站,上海辰华仪器有限公司;三电极体系(由玻碳电极㊁铂丝电极和Ag/ AgCl电极组成),上海辰华仪器有限公司;ME204/ 02型电子分析天平,上海梅特勒-托利多仪器有限公司;KQ5200DE型超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;PHS-3C型酸度计,上海仪电科学仪器股份有限公司;Sub Cell GT型核酸电泳仪,伯乐生命医学产品有限公司;Image Lab4.0型凝胶成像系统,美国Bio Rad公司㊂1.3㊀实验方法1.3.1㊀Apt+TP+N3-G4复合探针的制备㊀分别取5μL浓度均为200μmol/L的Apt㊁TP和N3-G4混合于485μL的1ˑTE缓冲液中进行退火杂交,即得Apt+TP+N3-G4复合探针㊂1.3.2㊀电化学适配体传感器的构建与工作原理㊀图1为基于改进G4DNAzyme的电化学适配体传感器的构建及其工作原理㊂由图1可知,首先设㊃36㊃㊀2023年12月第38卷第6期㊀㊀㊀㊀图1㊀基于改进G4DNAzyme电化学适配体传感器的构建及其工作原理示意图Fig.1㊀Schematic diagram of the fabrication of the electrochemical aptasensorbased on the improved G4DNAzyme and its working principle计1条包含立足点(toehold)区域的单链DNA模板(TP),使其能够部分杂交抗生素Apt和N3-G4,以形成稳定的Apt+TP+N3-G4复合探针;然后进行玻碳电极(GCE)预处理,用氧化铝抛光粉(0.5μm)对GCE进行打磨,用水和乙醇超声清洗以除去残留铝粉,于室温下晾干,备用;再将GCE置于HAuCl4中进行电化学沉积实验(沉积电位为-0.2V,时间为30s)得到AuNPs/GCE电极;于4ħ条件下用CP(2μmol/L,10μL)孵育该电极表面16h,得到CP/AuNPs/GCE电极;最后用MCH(1mmol/L,10μL)封闭电极表面剩余的活性位点,即得MCH/CP/AuNPs/GCE电极㊂传感器的工作原理如下:当目标物KANA存在时,KANA与Apt+TP+N3-G4复合探针中的Apt进行特异性结合,导致toehold区域的暴露;引入AP后,AP与toehold序列开始进行杂交,通过链置换反应置换出N3-G4;释放出的N3-G4与电极表面的CP杂交而被固定至MCH/CP/AuNPs/GCE电极上;将DBCO-peptide孵育至电极后,peptide末端修饰的DBCO与G4末端的N3发生点击化学反应,使pep-tide与G4共价组装,从而在K+和Hemin存在下形成G4DNAzyme-peptide复合物㊂Hemin具有较强的氧化还原活性,可以提供电化学信号,DNAzyme-peptide催化底物H2O2则可进一步放大电化学信号,从而实现对KANA的高灵敏检测㊂1.3.3㊀凝胶电泳实验㊀凝胶样品的制备:分别将5μL浓度为5μmol/L的Apt㊁TP㊁N3-G4㊁Apt+TP+N3-G4㊁Apt+TP㊁TP+N3-G4于95ħ水浴锅中加热5min;于25ħ金属振荡器中振荡2h;采用1ˑTBE配制12%非变性聚丙烯酰胺凝胶㊂每份样品取10μL,将其与2μL6ˑ上样缓冲液混合,之后转移到凝胶电泳系统中,在120V恒定电压下电泳70min,并用1%的Gel Red染色液染色30min;使用凝胶成像系统成像㊂1.3.4㊀电化学测量方法㊀利用循环伏安(CV)法,在含有5mmol/L K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6]的PBS缓冲液中对电化学适配体传感器的制备过程进行表征㊂其中,扫描速率为50mV/s,电位范围为-0.2~0.7V㊂采用差分脉冲(DPV)法测量电化学适配体传感器对卡那霉素检测的响应性能,扫描电位范围为0.1~-0.6V,振幅为0.05V,脉冲宽度为0.05s,采㊃46㊃㊀伍永梅,等:基于改进G-四链体DNA酶构建电化学适配体传感器高灵敏检测卡那霉素样宽度为0.0167s㊂采用CV法在含有5mmol/L K3[Fe(CN)6]/K4 [Fe(CN)6]的PBS(pH=7.4,0.1mol/L)缓冲液中,考查不同浓度CP(0.2μmol/L㊁0.5μmol/L㊁1.0μmol/L㊁1.5μmol/L㊁2.0μmol/L㊁2.5μmol/L)对电流信号的影响㊂为了考查电化学适配体传感器的选择性,在相同条件下,将该传感器应用于同类抗生素妥布霉素(TOB,50nmol/L)和链霉素(STR,50nmol/L),非同类抗生素四环素(TET,50nmol/L)及KANK与上述抗生素的混合物(KANA+Mixture)的检测,采用差分脉冲(DPV)法考查传感器对不同抗生素的响应性能㊂1.3.5㊀KANA的检测㊀将10μL不同浓度的KA-NA目标物(0pmol/L㊁0.06pmol/L㊁0.10pmol/L㊁2.00pmol/L㊁2.00ˑ102pmol/L㊁2.00ˑ103pmol/L㊁2.00ˑ104pmol/L)与10μL Apt+TP+N3-G4(2μmol/L)复合探针进行混合,于37ħ恒温摇床中孵育90min㊂加入10μL AP(1μmol/L),继续孵育30min,得到含有N3-G4的混合溶液㊂将混合溶液孵育至MCH/CP/AuNPs/GCE电极上,接着滴涂5μL的DBCO-peptide(1μmol/L)㊂将所得电化学适配体传感器置于含有H2O2(2mmol/L)的PBS缓冲液中进行检测㊂检测限LOD的计算公式为3δ/k,其中,δ为3个空白样品的标准差,k为标准曲线的斜率㊂1.3.6㊀加标回收实验㊀为了验证电化学适配体传感器在食品中抗生素的检测能力,在牛奶样品中加入不同浓度梯度(1.0ˑ10-4nmol/L㊁2.0ˑ10-3nmol/L㊁0.2nmol/L㊁2.0nmol/L㊁5.0nmol/L)的KANA进行加标回收实验㊂1.4㊀数据处理所有实验均重复3次,通过Origin2019软件绘制图表,使用Adobe Photoshop CS6绘制传感器的工作原理图㊂2㊀结果与讨论2.1㊀凝胶电泳实验结果分析为验证Apt+TP+N3-G4复合探针的成功制备与目标物诱发的链置换反应,进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)实验,结果见图2㊂其中,M为DNA标准参照物的电泳条带,泳道1㊁泳道2和泳道3分别为TP㊁Apt和N3-G4的电泳条带,泳道4是Apt+TP+ N3-G4复合探针的电泳条带,泳道5是将KANA与Apt+TP+N3-G4复合探针孵育后的电泳条带㊂由图2可知,泳道4上方有一条明亮清晰的条带,滞后于泳道1㊁泳道2和泳道3的条带,说明Apt+TP+N3-G4复合探针成功制备;泳道5上方出现一条亮带,下方出现一条暗带,证明KANA可以特异性结合Apt+TP+N3-G4复合探针中的Apt,使Apt从复合探针中释放,导致toehold区域暴露,进一步引发后续的链置换反应㊂图2㊀12%非变性PAGE图Fig.2㊀12%non-denatured polyacrylamidegel electrophoresis(PAGE)2.2㊀适配体传感器的电化学表征图3为适配体传感器的CV曲线,其中a为裸玻碳电极(GCE),b为AuNPs/GCE,c为CP/ AuNPs/GCE,d为MCH/CP/AuNPs/GCE,e为N3-G4/MCH/CP/AuNPs/GCE,f为DBCO-peptide/N3-G4/MCH/CP/AuNPs/GCE㊂由图3可知,在裸玻碳电极上可以观察到[Fe(CN)6]3-/4-电子对的特征氧化还原峰(a曲线);将AuNPs沉积于裸玻碳电极,由于AuNPs能够促进电子传输,CV响应电流值有所增加(b曲线);当CP被固定在AuNPs/GCE电极表面时,由于磷酸骨架带负电荷,对[Fe(CN)6]3-/4-起排斥作用,峰电流显著降低(c曲线);用MCH封㊃56㊃㊀2023年12月第38卷第6期㊀闭CP/AuNPs/GCE电极后,又因MCH是电惰性小分子,峰电流再次降低(d曲线);当卡那霉素目标物与Apt+TP+N3-G4复合探针中的适配体发生特异性识别后,释放的N3-G4通过碱基互补配对原则与CP进行杂交,从而被组装至MCH/CP/AuNPs/GCE电极表面,导致电极表面负电荷磷酸骨架数量的增多,使峰电流再次降低(e曲线);在N3-G4/MCH/CP/AuNPs/GCE电极上孵育DBCO-peptide后,由于探针上的磷酸骨架和多肽都会阻止电极表面的电子传递,导致峰电流进一步降低(f曲线)㊂图3㊀适配体传感器的CV曲线Fig.3㊀Cyclic voltammetry curves of thestepwise modified electrodes2.3㊀适配体传感器的电化学性能分析采用DPV法考查不同适配体传感器在含有H2O2(2mmol/L)的PBS(pH=7.4)中的电化学响应性能,以验证实验方案的可行性,结果如图4所示㊂由图4a)可知,适配体传感器在未孵育抗生素时,由于传感器界面缺乏电活性物质,因此没有观察到明显的电流信号㊂当将抗生素(5nmol/L,10μL)孵育至传感器后,产生了显著的电流信号,这是由于抗生素可以和Apt+TP+N3-G4复合探针中的适配体(Apt)进行特异性识别,导致N3-G4的释放,而释放的N3-G4通过与传感器表面的CP进行杂交,并与Hemin进一步结合,从而将电化学活性物质Hemin捕获至传感器的界面上,这也证明了传感器对抗生素具有良好的响应性能㊂由图4b)可知,传感器在无Peptide时产生的电流信号较小,与之相比,将Peptide引入传感器系统后,电流信号显著增强,证明多肽能显著增强传感器对抗生素的响应电流,大大提高抗生素检测的灵敏度㊂2.4㊀电极表面CP浓度的优化电极表面CP浓度的优化结果如图5所示㊂由图5可知,随着CP浓度的增加,AuNPs/GCE电极的电流信号先降低后逐渐趋于平稳,这是因为CP的负电荷磷酸骨架会对[Fe(CN)6]3-/4-产生电子排斥现象,从而使响应电流下降㊂当CP浓度超过2.0μmol/L时,电流信号基本保持不变,所以CP的适宜浓度为2.0μmol/L㊂2.5㊀适配体传感器对KANA的响应性能图6为适配体传感器对不同浓度KANA的电化学响应图,其中a g分别对应KANA浓度㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀图4㊀不同适配体传感器在含有H2O2的PBS中的电流响应Fig.4㊀Current responses of different aptasensorsin PBS containing H2O2图5㊀CP浓度对电流信号强度的影响Fig.5㊀Effect of capture probe concentrationon current intensity ㊃66㊃㊀伍永梅,等:基于改进G -四链体DNA 酶构建电化学适配体传感器高灵敏检测卡那霉素0pmol /L㊁0.06pmol /L㊁0.10pmol /L㊁2.00pmol /L㊁2.00ˑ102pmol /L㊁2.00ˑ103pmol /L㊁2.00ˑ104pmol /L㊂由图6可知,随着KANA 浓度的提高,峰电流强度越来越大,表明释放的N 3-G4不断增加,使电极表面Hemin 的固载量增加,电流信号不断增强㊂图7为KANA 浓度对数值与电流信号强度间的线性关系图㊂由图7可知,KANA 浓度对数值与电流信号强度具有良好的线性关系,线性回归方程㊀㊀图6㊀电化学适配体传感器对不同浓度KANA 的DPV 响应曲线Fig.6㊀DPV response curves of the aptasensorto different concentrations of KANA图7㊀KANA 浓度对数值与电流信号强度间的线性关系图Fig.7㊀The linear relationship between the logarithm of KANA concentration and the current signal strength为Ι=-1.5910lg c -13.5742,线性相关系数R 2=0.9956,检测限(LOD )为0.02pmol /L㊂表1为本文方法与其他KANA 检测方法的分析对比结果㊂由表1可知,与其他KANA 检测方法相比,本文方法的LOD 更低,这说明所构建的电化学适配体传感器有望成为一种高灵敏检测食品中抗生素残留的新方法㊂2.6㊀电化学适配体传感器的选择性图8为电化学适配体传感器对不同抗生素电化学响应结果㊂由图8可知,KANA 存在时电化学适配体传感器产生了明显的电化学信号,而在干扰物TOB㊁STR 和TET 中,电化学信号微乎其微㊂然而,当这些干扰物与KANA 共存时,与单独存在的KANA 相比,电化学信号没有明显的变化㊂以上结果表明,该适配体传感器对检测KANA 具有良好的选择性,这归因于适配体对KANA 的特异性识别作用㊂2.7㊀电化学适配体传感器在实际样品中的验证试验㊀㊀牛奶样品中KANA 的加标回收实验结果见表2㊂由表2可知,该方法在牛奶中的加标回收率为97.1%~105.5%,相对标准差(RSD )为3.60%~5.74%,表明该电化学适配体传感器适用于牛奶中KANA 的检测㊂表3为该电化学适配体传感器与ELISA 法测定牛奶样品中KANA 的对比实验结果㊂由表3可知,两种方法的相对偏差为-3.90%~2.83%,表明本方法与ELISA 法结果相一致,说明该电化学适配体传感器能够实现牛奶中KANA 的快速准确检测㊂表1㊀本文方法与其他KANA 检测方法的分析对比结果Table 1㊀The analysis performance of this method is compared with other KANA detection methods检测方法检测范围/(nmol ㊃L -1)检测限/(nmol ㊃L -1)LOD 计算方法表面等离子体共振法[17]103~1052.85ˑ105LOD =Ī0+3δ比色法[18]0.85ˑ10-3~0.0340.34ˑ10-3LOD =3δ/k 荧光法[19] 1.0~80.00.29LOD =3δ/k 光电化学法[20]0.2~250.00.2LOD =3δ/k 电化学法[8]10-3~1030.5ˑ10-3LOD =3δ/k 电化学法[21]0.01~1038.4ˑ10-3LOD =3δ/k 本文所用电化学法0.06ˑ10-3~200.02ˑ10-3LOD =3δ/k㊀注:Ī0表示空白产生的信号平均值㊂㊃76㊃㊀2023年12月第38卷第6期㊀图8㊀适配体传感器的选择性Fig.8㊀The selectivity of aptasensor表2㊀牛奶样品中KANA的加标回收实验结果Table2㊀Sample labeling recovery experiment样品号KANA的加入浓度/(nmol㊃L-1)KANA的检测浓度/(nmol㊃L-1)RSD/%加标回收率/%1 1.0ˑ10-4 1.011ˑ10-4 3.60101.12 2.0ˑ10-3 1.980ˑ10-3 4.4899.030.20.197 3.7698.54 2.0 1.942 5.7497.15 5.0 5.275 5.19105.5表3㊀电化学适配体传感器与ELISA法测定牛奶样品中KANA的对比实验结果Table3㊀Comparison experimental results of theaptasensor and ELISA method for determiningKANA in milk nmol/L样品号电化学适配体传感器ELISA法相对偏差/%1 1.011ˑ10-49.87ˑ10-5 2.432 1.980ˑ10-3 2.01ˑ10-3-1.4930.1970.205-3.904 1.942 1.992-2.515 5.275 5.130 2.833㊀结论本文将Peptide与G4DNAzyme共价组装得到高活性的DNAzyme-peptide复合物,以Hemin为电子媒介体成功构建了一种新型电化学适配体传感器,采用DPV法考查该传感器的电化学响应性能,并将其用于牛奶中KANA的检测分析㊂结果表明:与传统的G4DNAzyme相比,G4DNAzyme-peptide的催化性能明显增强,可以显著提高传感器的灵敏度;在CP最优浓度(2.0μmol/L)下,该传感器用于KANA检测时呈现较宽的检测范围(0.06pmol/L~20nmol/L)和较低的检测限(0.02pmol/L),优于其他KANA检测方法;该传感器对KANA具有良好的选择性,用于牛奶实际样品分析时,加标回收率为97.1%~105.5%,RSD为3.60%~5.74%,且检测结果与ELISA法相一致㊂因此,所构建的电化学适配体传感器在实际食品安全检测中具有良好的实用性,为抗生素残留检测提供了一种新方法㊂参考文献:[1]㊀ZHAO T T,CHEN Q,WEN Y L,et al.A competitive col-orimetric aptasensor for simple and sensitive detection ofkanamycin based on terminal deoxynucleotidyl transfer-ase-mediated signal amplification strategy[J].FoodChemistry,2022,377:132072.[2]㊀程岁寒,潘存锋,张彦.高效液相色谱法在兽用抗生素残留分析中的应用[J].国外医药(抗生素分册),2019,40(1):27-41.[3]㊀陈燕,李康柏,许均图,等.液相色谱串联质谱法检测水产品中17种抗生素残留量[J].现代食品,2021(9):201-204.[4]㊀李兴华,苗俊杰,康凯,等.固相萃取-高效毛细管电泳法同时分离测定水体和土壤中13种抗生素[J].理化检验(化学分册),2019,55(7):769-777.[5]㊀LI R,WEN Y,YANG L,et al.Development of an enzyme-linked immunosorbent assay based on viral antigen 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㊃86㊃㊀伍永梅,等:基于改进G-四链体DNA酶构建电化学适配体传感器高灵敏检测卡那霉素kanamycin antibiotic[J].Analytica Chimica Acta,2021,1154:338317.[11]LI M X,CHENG J,YUAN Z Y,et al.Sensitive electro-chemical detection of microRNA based on DNA walkersand hyperbranched HCR-DNAzyme cascade signal ampli-fication strategy[J].Sensors and Actuators B:Chemical,2021,345:130348.[12]LEI C,JLABC F,CHEN C D,et al.Dual-signal amplifica-tion electrochemical sensing for the sensitive detection ofuranyl ion based on gold nanoparticles and hybridizationchain reaction-assisted synthesis of silver nanoclusters[J].Analytica Chimica Acta,2021,1184:338986. 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hipA_对禽致病性大肠杆菌生物学特性和致病性的影响

弱(
81Δh
ipA 各指标基本恢复到野生株水平。实时荧光定量 PCR 结果显示,与野生株 AE81
相比,
AE81Δh
ipA 菌株的hdeA 、
hdeB 、
ompR 、
ompC 基因转录水平显著降低(
P <0.
05),
hcp 基因转录水平差
fimF 、
hcp、
ompR 、
ompC )的转录水平,探究毒素蛋白 h
ipA 对 APEC 的生物学功能及致病性的影
fimH )、毒力相关基因(
响。【结果】成功构建 h
ipA 基因的缺失株和回复株。野生株 AE81、缺失株 AE81Δh
ipA 和回复株 C-AE81Δh
性大肠杆菌野生株 AE81 的 h
ipA 基因缺失株 AE81Δh
ipA 及回复株 C-AE81Δh
ipA ,测定其生长曲线、运动性、环境
耐受能力、细胞黏附能力,并采用实时荧光定量 PCR 检测环境耐受相关基因 (
hdeA 、
hdeB )、黏附相关基因 (
f
y
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NO和GSH-PX在脑出血和蛛网膜下腔出血患者脑脊液中的含量变化及意义

NO和GSH-PX在脑出血和蛛网膜下腔出血患者脑脊液中的含量变化及意义徐辉;李介华;徐国祥;朱奕;余炳坚;关永东;刘琴湘【期刊名称】《中国误诊学杂志》【年(卷),期】2002(2)5【摘要】目的研究脑出血 (CH)和蛛网膜下腔出血 (SAH)患者的脑脊液中一氧化氮 (NO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- PX)的变化与脑血管损伤的关系。

方法测定并比较 NO和 GSH- PX在 8例对照组的 CSF与 15例 ACH和 15例SAH患者的 CSF的含量变化。

结果 ACH组和 SAH组的 CSF中的 NO浓度水平均高于对照组 ,而 GSH- PX浓度均低于对照组 ;脑出血组的 NO高于 SAH组 ,NO与GSH- PX呈负相关。

结论 NO、GSH-【总页数】2页(P667-668)【关键词】CH;SAH;NO;脑出血;蛛网膜下腔出血;脑血管损伤;一氧化氮;脑脊髓液;谷胱甘肽过氧化酶【作者】徐辉;李介华;徐国祥;朱奕;余炳坚;关永东;刘琴湘【作者单位】广东省暨南大学医学院第五附属医院清远市人民医院【正文语种】中文【中图分类】R743.35;R743.34【相关文献】1.急性脑出血患者血肿液和脑脊液中白介素-6含量变化的意义 [J], 杜立峰;孙师元;王鹏2.急性脑出血患者血浆和脑脊液中白介素-6含量变化的意义 [J], 吴志强3.生长抑素在脑出血、急性脑外伤患者血浆和脑脊液中的含量变化和临床意义研究[J], 王奕;王维人;乔香兰4.高血压脑出血患者脑脊液中细胞因子含量动态变化的临床意义 [J], 李社会;王建祯;金晓烨;杨瑞霞;牛福来5.老年蛛网膜下腔出血患者脑脊液铁蛋白含量变化及临床意义 [J], 相立菊;刘振华;曹云凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。