微生物的含量检测

微生物检测方案

一、检测洁净室微生物的含量：

GB/T16292-1996 《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》

GB/T16293-1996 《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》

GB/T16294-1996 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》

二、厂房空气微生物检验

1 采样

一般厂房应设五个采样点，即室内墙对角线交叉处的中点和与中点等距的四角各点。采样高度为1.5 m。

2 检测方法

自然沉降法(平板暴露法)

将营养琼脂平板(平皿直径为9 cm)置于采样点,暴露5 min(洁净厂房暴露时间可延长)后,置37℃培养24 h,记录每个平板上的菌落数,并求出全部采样点的平均菌落数.按下列公式计算1 m3的菌数:

菌数/1 m3=50000N/AT

式中:N为平板计数的平均菌落数,根据采样的原理可分为滤过式、撞击式、静电式、离心式和液体冲击式等。这些采产器各有优缺点，目前国际上公认的定量采产方法是裂隙撞击式采样器，如Calssela采样器、Andersen、NBS采样器，我国研制的JWL-Ⅰ型和Ⅱ型采样器，THK-201型采样器，仿安德森2级和仿安德森6级空气微生物采样器等均属于此类。

采样时，将采样器置于采样点，按仪器使用说明进行采样，并记录当时温度、相对湿度及人员活动情况，经培养后，计数所生长之菌落数，再换算成每立方米空气中细菌数。

三、生产环境物体表面微生物检测

1．光滑物体表面（如操作台面，较大机器表面）的采样

可用5×5 cm的标准灭菌规格板，放在被橙物体表面，根据物体表面大小，采样1～4个，用浸有无菌稀释液的棉拭子在规定板内来回均匀涂抹整个方可格各部位，并随之转动拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子放入5 mL稀释液的试管内振打80次，作适当稀释后，取1mL注入平皿，倾注普通营养琼脂，进行活菌计数，每个稀释度至少作2个平行样，计算被检物体表面污染微生物的数量，如检验机器的沟缝等处时，将机器拆卸，直接用棉试子涂抹。

物体表面污染微生物数（cfu/cm2）=平板上菌落的平均数×稀释度×5/采样面积（cm2）

2．手的采样

被检人五指并拢，将浸有无菌稀释放液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端来回涂抹两次，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入5 mL稀释液的试管中振打80次，采样液作适当稀释后取1 mL接种平板，作活菌计数。手污染总数（cfu/只）=平板上菌落数×稀释倍数×5/2

3 包括容器

根据容器大小将适量的无菌稀释液加到容器内，盖紧盖子，振打80次，采样液作适当稀释后接种平板。广口的上瓶或盒也可用无菌棉拭子涂抹方法采样。

容器污染总菌数（cfu/个）=平板上菌落数×稀释倍数×所加稀释液量