车前子不同炮制品多糖含量测定

作者简介 ：邵深深（１９８３ － ） ，女 ，大学本科 ，学士学位 ，初级职称 。 研究方向 ：中药鉴定 。
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第２６卷第３期 ２０１０ 年 ６ 月
长春中医药大学学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
参考文献 ：
［１］中华人民共和国卫生部药典委员会 ．中华人民共和国药典 （一部）［Ｍ］ ．北京 ：化学工业出社 ，２００５ ：４６ ．
［２］蒋琴芳 ．车前子临床应用偶拾 ［Ｊ ］ ．吉林中医药 ，２００５ ，２５
（１０） ：５１－５２ ． ［３］谢小梅 ，付志红 ．车前子多糖对小鼠阴道菌群失调的调整
第２６卷第３期 ２０１０ 年 ６ 月
·方药研究·
长春中医药大学学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
车前子不同炮制品多糖含量测定
Ｖｏ１畅２６ ６ ，２０１０
邵深深１ ，李翠翠２ ，俞路宁１ ，林 希１ （１畅 温州市第三人民医院 ，浙江 温州 ３２５０００ ；２畅 温州医学院 仁济学院 ，浙江 温州 ３２５０３５）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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品溶液 ２ ｍＬ ，按照 １畅２畅３ 确定的最佳显色条件 ，平行 测定 ５ 份 。 相对标准偏差 ＲＳＤ ＝ ０畅９８％ 。 ２畅５ 稳定性试验 准确移取 ０畅０３ ｍｇ ／ｍＬ 粗多糖样 品溶液 ２ ｍＬ ，按照 １畅２畅３ 确定的最佳显色条件 ，间隔 １５ ｍｉｎ 读取显色后的样品溶液吸光度 ，连续 １ ｈ 考察 其稳定性 。 相对标准偏差 ＲＳＤ ＝ ０畅４４％ 。 ２畅６ 加标回收率 准确移取 ０畅０３ ｍｇ ／ｍＬ 粗多糖样 品溶液 ２ ｍＬ ，加入不同浓度的木糖标准溶液各 １ ｍＬ ， 按照 １畅２畅３ 确定的最佳显色条件 ，计算回收率 （平行 测定 ２ 次） 。 结果见表 ２ 。
表 ２ 加标回收率测定结果
加入量 ／μｇ １０ ２０ ３０
测得量 ／μｇ ９畅７１ １８畅９５ ２８畅６２
回收率 ／％ ９７畅１０ ９４畅７５ ９５畅４０
平均回收率 ／％ ９５畅７５
３ 讨论 本次实 验 测 定 车 前 子 多 糖 含 量 采 用 苯 酚－硫 酸
法 ，检测波长为 ４８０ ｎｍ ，由于车前子多糖的主要组成 单糖是木糖和阿拉伯糖等戊糖［１２］ ，所以本实验以 Ｄ－ 木糖作为标准对照品 ，这与以往文献报道中车前子多
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醇 、丙酮 、乙醚洗涤 ２ 次 ，干燥得生品车前子精多糖 ，
称量 。
１畅２畅３ 标准曲线的绘制 准确称取干燥至恒量的 Ｄ－ 木糖标准品 ２５畅１０ ｍｇ ，置于 １００ ｍＬ 容量瓶中 ，加蒸馏 水配 成 ０畅２５１ ０ ｍｇ ／ｍＬ 的 溶 液 。 准 确 移 取 此 溶 液
多糖的量 ：Ｗ／％ ＝ Ｃ·Ｄ·ｆ ／ｍ × １００ 。 式中 ：Ｃ－供试液中
木糖的浓度 （ｍｇ ／ｍＬ ） ，Ｄ－多糖的稀释因素 ，ｆ－换算因 子 ，ｍ－供试车前子多糖的质量 （ｍｇ ） 。 清炒和盐炙的 车前子粗多糖都作同等条件的处理 ，分别得出相应的
多糖含量 。 ２ 结果
２畅１ 标准曲线 在确定的最佳显色条件下测定吸光
５ ｍＬ ） ，离心管 ，烧杯 ，玻璃棒 ；Ｄ－木糖 ，８０％ ，９５％ 乙 醇 ，无水乙醇 ，丙酮 ，乙醚 ，氯仿－正丁醇 （４∶１ ） ，３％ 苯 酚 ，浓硫酸 ，蒸馏水 ，自来水 ；车前子 ，自然晒干 。 １畅２ 实验方法 １畅２畅１ 车前子的炮制 历史沿革 ：宋代有酒浸 （枟总 录枠） 、微炒（枟局方枠） 、焙（枟宝产枠） 、酒蒸（枟济生方枠）等 炮制方法 。 明代还有米泔水浸蒸 （枟醒斋枠）的方法 。 清代又增加了青盐水 （枟幼幼集成枠） 。 并有“酒蒸捣 碎 ，入滋补药 ；炒研 ，入利水泄泻药”（枟备要枠）的记载 。 现在主要的炮制方法有炒黄 、盐炙等 。 生品车前子 ： 取车前子 ，除杂质 ，筛去灰屑 。 清炒车前子 ：取净车前 子 ，置炒制容器内 ，用文火加热 ，炒至略有爆声 ，并有 香气逸出时 ，取出晾凉 。 盐炙车前子 ：取净车前子 ，置 炒制容器内 ，用文火加热 ，炒至略有爆鸣声时 ，喷淋盐 水 ，炒干 ，取出晾凉 。 １畅２畅２ 车前子多糖的提取与精制 称取干燥的生品 车前子 ５０ ｇ ，加 ８ 倍量体积分数 ８０％ 乙醇浸泡 ２４ ｈ ， 过滤 ，挥干乙醇 ，加水于沸水浴中回流提取 ３ ｈ ，纱布 两层过滤 ，滤渣再回流提取 ２ ｈ ，合并滤液 ，浓缩 ，加 ９５％ 乙醇至醇浓度达到 ８０％ ，冰箱中冷藏过夜 。 次 日离心分离（４ ０００ ｒ／ｍｉｎ ，１０ ｍｉｎ） ，沉淀依次用无水乙 醇 、丙酮 、乙醚洗涤两次 ，干燥得生品车前子粗多糖 ， 称量 。 做 ２ 分 ，其中 １ 分精制 ，备用 。 生品车前子粗 多糖用蒸馏水溶解 ，Ｓｅｖａ ｇｅ 法除蛋白［１５］ ，然后用流动 自来水透析 ４８ ｈ ，蒸馏水透析 ２４ ｈ ，透析液浓缩 ，加 ９５％ 乙醇至醇浓度达到 ８０％ ，冰箱中冷藏过夜 。 次 日离心分离（４ ０００ ｒ／ｍｉｎ ，１０ ｍｉｎ） ，沉淀依次用无水乙
摘 要 ：目的 采用苯酚－硫酸法测定车前子不同炮制品中多糖含量 。 方法 用苯酚－硫酸法进行测定 ，以 Ｄ－ 木糖作为标准对照品 ，检测波长 ４８０ ｎｍ 。 结果 车前子炮制后多糖含量降低 ，精密度试验的相对标准偏差为 ０畅９８％ ，样品在 １ ｈ 内显色稳定 ，无明显的变化 ，相对标准偏差为 ０畅４４％ ，加标平均回收率为 ９５畅７５％ 。 结论 本 实验得出的结果准确 ，精密度高 ，样品回收率好 ，采用 Ｄ－木糖作为标准对照品 ，更准确地测定了不同炮制中车 前子多糖的含量 。 关键词 ：车前子 ；车前子多糖 ；炮制 ；含量测定 中图分类号 ：Ｒ２８３畅４ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ：１００７ － ４８１３（２０１０）０３ － ０４３３ － ０３
作用［Ｊ］ ．辽宁中医药 ，２００６ ，３３（２） ：２４１－２４２ ． ［４］吴光杰 ，田颖刚 ，谢明勇 ，等 ．车前子多糖对便秘模型小鼠
通便作用的研究［Ｊ］ ．食品科学 ，２００７ ，２８（１０） ：５１４－５１６ ． ［５］王东 ，袁昌鲁 ，林力 ，等 ．车前子多糖对小肠运动障碍小鼠
的影响［Ｊ］ ．中华中医药学刊 ，２００８ ，２６（６） ：１１８８－１１８９ ． ［６］李红 ，张美玲 ，张兆芳 ，等 ．车前子粗多糖胶囊治疗功能性
０畅５ ，１畅０ ，１畅５ ，２畅０ ，２畅５ ，３畅０ ，３畅５ ｍＬ ，分别置于 ２５ ｍＬ 容量瓶中 ，稀释至刻度 ，配成系列标准溶液 ，浓度为
０畅００５ ，０畅０１０ ，０畅０１５ ，０畅０２０ ，０畅０２５ ，０畅０３０ ，０畅０３５ ｍｇ ／
ｍＬ 。 最佳显色条件 ：在上述配制的系列溶液中分别 取 ２畅０ ｍＬ ，加 ３％ 苯酚 ０畅５ ｍＬ ，摇匀后加浓硫酸 ４畅０ ｍＬ ，充分混合均匀 ，２５ ℃ 室温放置 ３５ ｍｉｎ ，在 ４８０ ｎｍ
便秘 ４５ 例疗效观察 ［Ｊ ］ ．中国 中 医药 信 息杂 志 ，２００７ ，１４
（９） ：７４－７５ ． ［７］唐永富 ，黄丹菲 ，殷军艺 ，等 ，车前子多糖对骨髓来源树突
状细胞 表 型 和 吞 噬 功 能 的 影 响 ［Ｊ ］ ．食 品 科 学 ，２００７ ，２８
（１０） ：５１７－５２０ ． ［８］袁从英 ，熊晨 ，郭会彩 ，等 ．车前子多糖抗脂质过氧化作用
中木糖的浓度 ，并通过计算 ，得出结果 。 如表 １ 。
表 １ 车前子不同炮制品多糖含量测定结果
炮制品 生 品 清 炒 盐 炙
吸光度 Ａ ０畅５４２ ０畅４５３ ０畅４８０
多糖 Ｗ／％ ８畅２２０ ６畅８１０ ７畅２３０
２畅４ 精密度试验 准确移取 ０畅０３ ｍｇ ／ｍＬ 粗多糖样
枟中国药典枠［１］记载 ，车前子为车前科植物车前 Ｐｌａｎｔａｇｏ ａｓｉａｔｉｃａ Ｌ畅 或平车前 Ｐｌａｎｔａｇｏ ｄｅｐｒｅｓｓａ Ｗｉｌｌｄ畅 的干燥成熟种子 ，具有清热利尿 、渗湿通淋 、明目 、祛 痰的功能 ，用于治疗水肿胀满 、热淋涩痛 、暑湿泄泻 、 目赤肿痛 、痰热咳嗽 。 在临床上可治各种病症［２］ 。 目 前 ，国内外对车前子多糖的研究表明 ，车前子多糖具 有抗炎 、缓泄 、抗衰老 、抗氧化 、清除自由基 、保护动脉 内皮 、整肠通便 、降低血脂 、调节血糖的作用［３－１１］ 。 车 前子多糖的主要组成单糖是木糖和阿拉伯糖 等戊 糖［１２］ ，殷军艺等［１３］ 对大粒车前子多糖分离 、纯化及 单糖组成分析的研究中 ，经 ＧＣ－ＭＳ 分析确定 ＰＬＰ 由 阿拉伯糖 、木糖 、甘露糖和半乳糖构成 ，其摩尔比为 ５畅６∶９畅４∶１畅３∶１ ，但文献报道中车前子多糖测定通常 都是以己糖（如葡萄糖）作为标准对照品 。 所以本实 验采用周超等［１４］在研究中建立的一种准确测定车前 子多糖的方法 ，即采用苯酚－硫酸法测定车前子中多 糖量 ，以木糖作为标准对照物 ，检测波长 ４８０ ｎｍ ，希 望更准确地测定车前子中多糖的含量 。 为在选用车 前子的不同炮制品时 ，提供量的参考 。 １ 实验部分 １畅１ 实验材料 ７５１－ＧＷ 分光光度计（惠普上海分析 仪器有限公司） ，８０－２ 离心机（上海手术器械厂） ，隔膜 真空泵（天津市津藤实验设备有限公司） ，单相电容运 转电动机（上海申生科技有限公司） ，美的多功能电磁 炉（广东美的生活电器制造有限公司 ） ，万用电热器 （浙江嘉兴市风桥电热器厂制造） ，分析天平 ，冰箱 ，透 析袋 ，回流装置 ，容量瓶（２５ 、１００ ｍＬ） ，移液管（０畅５ 、１ 、
车前子多糖中木糖的质量浓度（ｍｇ ／ｍＬ） ，Ｄ－多糖的稀 释因素（ｍＬ） 。 １畅２畅５ 样品中车前子多糖的测定 精密称取生品车
前子 粗 多 糖 ０畅０３０ ０ ｇ ，配 制 成 ０畅０３ ｍｇ ／ｍＬ ，按 照 １畅２畅３ 确定的最佳显色条件 ，由回归方程求出生品车