南医微生物实验课件二
医学微生物学实验二抗酸染色
实验考试
（五）实验结果
初染
石
脱色
盐 酸 酒 精
复染
碱 性 美 兰
未染色
初染后
脱色后
复染后
红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。 红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序， 结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝 状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。 状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。
二实验原理分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质主要是分枝菌酸它包围在肽聚糖的外面所以分枝杆菌一般不易着色要经过加热和延长染色时间来促使其着色同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后就很难被酸性脱色剂脱色故名抗酸染色
医学微生物学实验二
微生物学教研室： 微生物学教研室：3029130
科教科： 科教科：3029945
实验内容
1.实验一结果的观察和分析； 1.实验一结果的观察和分析； 实验一结果的观察和分析 2.细菌内毒素的检测技术； 2.细菌内毒素的检测技术； 细菌内毒素的检测技术 3.抗酸染色； 3.抗酸染色； 抗酸染色 4.实验考试。 4.实验考试。 实验考试
一、实验一结果的观察和分析
咽喉部细菌
空气中细菌
ห้องสมุดไป่ตู้三）实验材料
1.细菌： BCG）。 1.细菌：卡介苗 （BCG）。 细菌 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱 抗酸染液 盐酸酒精 性美兰溶液。 性美兰溶液。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。 其它
二、内毒素的检测技术 鲎试验） （鲎试验）
1.内毒素检测方法 1.内毒素检测方法 家兔发热法，鲎试验。 家兔发热法，鲎试验。
南医微生物实验课件肥达、肠道等
原理基于抗原抗体反应，伤寒细菌的菌体抗原O抗原和鞭毛抗原H抗原刺激机体后可 产生特异性抗体，通过检测抗体效价即可推断是否感染伤寒细菌。
肥达试验具有较高的特异性和敏感性，是临床常用的诊断方法之一。
微生物致病性原理
微生物致病性是指微生物在一定条件下对宿主造成损伤或引发疾病的能力。
微生物致病性的机制主要包括粘附、侵入、繁殖和毒素产生等环节。
粘附是微生物附着在宿主细胞或黏膜表面并开始繁殖的第一步；侵入则是通过侵袭力突破宿 主防御屏障进入组织或血液；繁殖是微生物在宿主体内大量扩增的过程；毒素则是微生物产 生的具有毒性的代谢产物，可对宿主造成损伤。
南医微生物实验课 件
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握微生物实验的基本操作
01
02
03
04
培养基制备
掌握不同类型培养基的配制方 法和注意事项，如营养肉汤、
SS琼脂等。
微生物接种
学会使用接种环、涂布棒等工 具进行微生物的接种操作。
THANKS
感谢观看
肥达试验是一种用于诊断伤寒和副伤寒的实验方法。 通过比较患者血清与伤寒、副伤寒菌体的凝集反应程 度，可以辅助诊断伤寒和副伤寒。
需要注意的是，肥达试验阳性结果并不能完全确诊伤 寒，还需要结合临床表现和其他实验室检查结果进行 综合判断。
肠道致病菌的分离与鉴定结论
01
肠道致病菌是一类引起肠道感染的细菌，常见的有沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱 弧菌等。
步骤三
对可疑菌落进行生化试验和血 清学试验，以确定致病菌的种 类。
医学微生物实验课件_t02细菌生理及外界因素对细菌的影响
实验二细菌生理及外界因素对细菌的影响示教细菌的生长现象液体、固体、半固体培养基生物因素对细菌的影响药敏实验噬菌体对细菌的作用细菌的代谢产物的检查乳糖发酵实验硫化氢实验尿素分解实验操作紫外杀菌实验（大肠埃希菌、枯草杆菌）细菌分离培养方法――平板划线法（混合菌液）细菌代谢产物检查方法――IMViC试验接种（大肠埃希菌、产气肠杆菌）Nutrient requirements of bacterial growth water Carbon source Nitrogen source Minerals Growth factors: organic compounds such as amino acids, purines嘌呤, pyrimidines嘧啶, and vitamins that a cell must have for growth but cannot synthesize itself. culture medium培养基: Substances used for artificial cultivation of bacteria. Classification of culture medium：According to basic ingredients: Minimal essential growth medium基础培养基enrichment medium增菌培养基selective medium选择培养基differential medium鉴别培养基According to physical condition: liquid medium液体培养基solid medium固体培养基: 1.5～2.5% of agar semisolid medium半固体培养基: 0.3～0.5% of agarPhenomena of bacterial growth细菌在培养基中的生长情况In liquid medium：surface growth pellicle表面生长, uniformly turbid均匀混浊生长, sediment in bottom沉淀生长On solid medium ：In semisolid medium ：susceptibility test 药敏试验* 无动力有动力抑菌圈涂布痢疾杆菌涂布大肠杆菌肉汤痢疾杆菌噬菌体*。
南医微生物实验课件肥达、肠道等
实验采用肥达氏试验等方法， 检测肠道微生物的种类和数量， 分析其对宿主健康的影响。
实验步骤
01
采集粪便样本，进行微 生物培养。
02
03
04
对培养出的微生物进行 形态观察和分类鉴定。
采用肥达氏试验等方法， 检测肠道微生物的抗原 和抗体。
分析实验数据，得出结 论。
03
CHAPTER
微生物培养技术
培养基的制备
THANKS
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ谢谢
高通量检测技术
随着基因组学、蛋白质组学等技术的发展，微生物实验将更加注 重高通量检测技术的应用，提高检测效率和准确性。
自动化与智能化
借助自动化仪器和智能技术，实现微生物实验的自动化和智能化， 提高实验效率和精度。
交叉学科融合
加强微生物实验与生物信息学、计算生物学等交叉学科的融合，推 动微生物实验的创新发展。
实验步骤
采集待检血清
采集患者的静脉血液，分离血 清备用。
观察结果
在规定时间内观察凝集反应的 结果，记录凝集程度和效价。
准备试剂和器材
包括肥达试验抗原、抗体检测 试剂盒、试管、吸管、显微镜 等。
加样
将待检血清分别加入试管中， 加入适量的抗原和抗体。
结果判断
根据凝集程度和效价判断患者 是否感染伤寒沙门氏菌。
05
CHAPTER
微生物实验的应用与展望
微生物实验在医学领域的应用
诊断疾病
微生物实验是诊断感染性疾病的 主要手段，通过分离培养、抗原 抗体检测等技术，确定病原体种
类，为临床治疗提供依据。
药物研发
微生物实验可用于筛选具有抗菌、 抗病毒活性的药物，为新药研发提 供候选药物。
《微生物学实验》PPT课件
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2
一.药品的微生物限度检查（一）
1.口服药物的微生物检查: ①大肠杆菌的检查： ②细菌总数的检查
2.外用药物的微生物检查: ①绿脓杆菌的检查： ②金黄色葡萄球菌的检查：
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3
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
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32
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33
1、制片 涂片、干燥、固定
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34
2.结晶紫初染 1min——水洗
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35
3. 碘液媒染
1min——水洗
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36
4. 95% 酒精脱色 30s——水洗
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5.沙黄复染 1min——水洗、滤纸吸干
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28
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29
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30
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31
※革兰染色步骤
• 1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢） 涂片、干燥、固定
• 2.初染：结晶紫——1min——水洗 • 3.媒染：碘液——1min——水洗 • 4.脱色：95% 酒精——30s——水洗 • 5.复染：沙黄——1min—水洗、滤纸吸干 • 6.油镜观察：
对照菌
(产气杆菌)
蛋白胨水培养 接种1支管 基2支管
接种1支管ห้องสมุดไป่ตู้
葡萄糖蛋白胨 接种2支管 水培养基4支管
接种2支管
枸橼酸盐培养 接种1支管 基2支管
接种1支管
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44
抗酸染色步骤
医学微生物实验二(新)
实验要求
实验前认真预习实验内容， 了解实验目的、原理和方 法。
按照实验步骤进行操作， 认真观察实验现象，记录 实验数据。
严格遵守实验室规章制度， 保持实验室卫生和安全。
实验结束后，整理实验器 材和试剂，撰写实验报告。
02
实验原理
微生物的形态与结构
微生物培养
将采集的样本接种在适宜的培养基 上，控制温度和湿度等培养条件， 观察微生物的生长情况。
显微镜检查
使用显微镜观察微生物的形态、染色 反应等特征，进行初步的微生物鉴定 。
生化实验
进行必要的生化实验，如糖发酵实 验、酶活性测定等，进一步确定微 生物的种类。
结果记录与分析
详细记录实验结果，包括微生物的 形态特征、生化反应等，进行分析 和总结。
微生物的繁殖方式
微生物的繁殖方式有分裂繁殖、孢子 繁殖、出芽繁殖等。了解其繁殖方式 有助于理解微生物种群的增长和变化 规律。
03
实验材料与试剂
实验材料
培养基
用于微生物培养的基质，提供微生物所需的营养物质。
显微镜
观察微生物形态和结构的工具。
实验试剂
01
02
03
04
染色剂
用于给微生物染色，以便更好 地观察其形态和结构。
实验方法
细菌分离培养
采用适当的培养基和培养条件 ，分离纯化样本中的细菌，获
得单一菌落。
染色与镜检
对细菌进行染色处理，通过显 微镜观察其形态、染色反应等 特征，初步鉴定细菌种类。
生化鉴定
利用生化实验方法，对细菌进 行进一步的鉴定和分类。
血清学试验
通过血清学试验方法，检测细 菌的抗原或抗体，以确定细菌
最新微生物综合实验2PPT课件
API Listeria
李斯特氏菌
API种类
鉴定细菌
API Candida
酵母菌
API 20 C AUX
酵母菌
API 20 A
厌氧菌
API Campy
弯曲杆菌
API NH
奈瑟氏球菌，嗜血杆菌和卡他布兰汉菌
API ZYM
半定量检测酶活性
API 50 CH API 50 CHB/E
Moraxella (莫拉菌属) (1) Flavobacterium (金黄杆菌) (3) Weeksella (威克斯菌属) (2) Bordetella/Alcaligenes (1) (博德特氏菌属/产硷菌属) Achromobacter (无色杆菌属) (1) Photobacterium (发光杆菌属) (1) Sphingomonas (鞘氨醇单胞菌属) (1) Shewanella (腐败希瓦氏菌属) (1) Sphingobacterium (鞘氨醇杆菌属) (1) Stenotrophomonas (寡养单胞菌属) (1)
微生物学综合实验（二）
第一阶段：分组---选题---制定实验方案
第二阶段：菌株筛选---分离纯化---菌落形态观察
第三阶段：菌株保藏----个体形态----生理生化特征
第四阶段：分子鉴定----生物信息学分析
样品的采集
采泥器：适用于采集海洋、河流、湖泊、水产养殖场等水底表层泥样
泥 样 的 采 集
API组成
API鉴定系统的主要部分是 API试剂条及检索工具此外有些反应还需使用添加试剂。
①发酵试验：为碳水化合物与酸的分解代谢试验 ，结果 是通过 PH的变化引起酸碱指示剂颜色的改变来判断。如葡萄糖、乳糖 、甘露糖、蔗糖、甘露醇、肌醇、山梨醇等。
南医微生物实验课件
录像：化脓性球菌 示教：化脓性球菌形态、培养特性
白喉棒状杆菌的形态、生长特性 炭疽杆菌生长特性 操作：革兰染色
医学ppt
1
葡萄球菌G＋
链球菌G＋
肺炎链球菌G＋
淋病奈瑟菌G－
医学ppt
2
培养特性：金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌 甲型、乙型、丙型链球菌 肺炎球菌
致病物质：透明质酸酶
医学ppt
3
白喉棒状杆菌：G+ 一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏
状或英文字母样，如V、W、X等
革兰染色
医学ppt
4
Albert染色
观察白喉杆菌异染颗粒——一端或两端
医学ppt
5
鉴别选择培养基 含0.03%～0.04%亚碲酸钾血平板
亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落
医学ppt
6
Elek平板
医学ppt
7
炭疽杆菌：G＋ 粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状； 有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央
12
实验报告
七张示教图 革兰染色步骤、结果（图示）
医学ppt
13
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
医学ppt
11
革兰染色操作步骤
【涂片】
取载玻片 接种环取混合菌液1-2环涂片（直径 约1cm） 自然干燥 固定（通过火焰三次）
【染色】
结晶紫1min 水洗 碘液1min 水洗 酒精 脱色30S 水洗 稀释复红1min 水洗 吸水纸 印干 油镜观察
*注意无菌操作！
有菌玻片放在水池旁玻片缸内!
医学ppt
医学ppt
8
30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状
南医微生物实验课件肥达、肠道等
培养
将生化鉴定管放入恒温培养箱中，在适宜的 温度和湿度条件下培养一定时间。
结果判断
根据生化反应的结果，对照标准表确定细菌 的种类。
生化鉴定的结果解读
01
02
03
阴性反应
表示该细菌不产生特定的 代谢产物，可能为非目标 菌。
阳性反应
表示该细菌产生特定的代 谢产物，可能为目标菌。
可疑反应
表示该细菌产生的代谢产 物与标准表不完全一致， 需要进一步确认。
药敏试验的操作步骤
制备待测菌悬液
将待测菌接种于普通培养基上培养，然后用生理 盐水洗下菌落，制备成一定浓度的菌悬液。
培养
将涂布好的平板置于35℃恒温培养箱中培养1624小时。
ABCD
在药敏平板上涂布菌悬液
将菌悬液均匀涂布在含有不同抗菌药物的平板上 。
结果观察
观察各平板上菌落的生长情况，记录结果。
药敏试验的结果解读
症状。
志贺氏菌
导致细菌性痢疾的主要 病原菌，可引起腹泻、
腹痛等症状。
霍乱弧菌
引起霍乱的病原菌，可 导致严重腹泻和脱水。
肠道致病菌的检测方法
01
02
03
04
培养法
采集粪便、食品、水等样本进 行培养，观察是否有肠道致病
菌生长。
免疫学检测
利用抗原抗体反应检测肠道致 病菌，如ELISA、免疫荧光等
方法。
分子生物学检测
pH值
适宜的pH值可以维持微生物细胞 内的酸碱平衡，有利于微生物的 生长。
总结词
微生物的培养条件是影响微生物 生长和繁殖的重要因素，包括温 度、湿度、pH值、光照等。
光照
对于一些光合自养型的微生物， 光照是必需的生长条件之一。
《医学微生物实验》课件
《医学微生物实验》课件xx年xx月xx日•课程介绍•医学微生物学基础知识•临床微生物学实验技术目录•微生物感染与免疫01课程介绍课程目标培养学生掌握医学微生物学实验基本技能学生能够掌握医学微生物学实验的基本技术和方法，包括细菌分离培养、鉴定和药敏试验等。
增强学生实验操作能力通过本课程的学习，学生能够独立完成实验操作，提高实验技能和动手能力。
提高学生综合素质本课程注重培养学生的实验操作能力、观察能力、分析和解决问题的能力以及创新能力，提高学生的综合素质。
课程内容包括细菌分离培养、菌落形态观察、细菌染色制片、细菌生化反应等。
细菌学实验病毒学实验免疫学实验临床微生物学实验包括病毒分离、鉴定和检测等。
包括抗原抗体反应、免疫细胞功能检测、免疫分子生物学等。
包括标本的采集、处理和鉴定等。
课程安排•第一周：微生物学实验室安全及基本实验操作•第二周：细菌的分离培养与形态观察•第三周：细菌的生理生化反应与鉴定•第四周：病毒的分离鉴定与检测•第五周：免疫学基本概念与抗原抗体反应•第六周：免疫细胞功能检测与免疫分子生物学•第七周：临床微生物学标本的采集处理与鉴定02医学微生物学基础知识包括革兰阳性菌和革兰阴性菌，有细胞壁、细胞膜和细胞质等结构，通过二分裂方式进行繁殖。
细菌没有细胞结构，必须寄生在宿主细胞中进行增殖，包括DNA和RNA病毒。
病毒具有细胞壁和细胞膜等结构，以出芽方式进行繁殖，包括酵母菌和霉菌等。
真菌微生物的种类与特点微生物可通过接触感染、空气传播、水和食物传播等多种途径感染人体。
微生物的感染与传播感染途径包括表面感染、机会性感染、隐性感染、显性感染等。
感染类型微生物可通过直接接触、飞沫传播、媒介物传播等多种方式进行传播。
传播方式加强卫生管理、注意个人卫生、避免接触可疑感染源等。
预防措施针对不同微生物感染采取不同的治疗方法，如抗生素治疗、抗病毒治疗等。
同时还需要针对感染症状进行对症治疗。
治疗方法微生物感染的防治03临床微生物学实验技术鉴定细菌采用生化反应、抗原构造等实验手段，对细菌进行鉴定，包括种、属、种水平的鉴定。
医学微生物学实验二抗酸染色
抗酸染色法
将革兰氏高阳性细菌中的壁 酸 与背景染色分开，常用于 诊断 结核病和防治控制。
牛乳杆菌株的用途
抗酸染色中采用牛乳杆菌株 作为阳性 细胞壁酸标准菌， 以方便实验检测。
石蜡切片
为保证切片的纵向完整和平 面整齐， 采用质较软而黏稠 的石蜡先切得到小 块，再将 其切成0.3-10微米的块。
样本采集和处理
2. 涂层均匀度较差
可能是涂层次数不够多造成。
4. 样本质量差， 细胞数太小或涂片 太薄
不能达到有效检查的目的。
实验改进及展望
改进措施
我们将加强实验技术指导、提高实验室安全防 护意识，加强实验室管理和规范操作。若实验 过程中发现异常情况，第一时间停止操作并及 时向教师报告。
进一步应用
可以将该方法拓展解放到环保、医药、食品行 业甚至其他应用领域中，为各个领域提供快速、 准确、高效的检测方法。
4. 脱色
加热固定涂片
加热条件
采用显微镜加热载玻片的方法固定涂 片，温度 不宜过高，保持载玻片不会破裂。
加热必要性
涂片制得后，用火炙置于Bunsen燃 气表面，使细菌细胞壁的脂质软化、 附于玻片 上，避免在染色过程中脱 落和变形。
脱色
脱色原理
抗酸染色中用稀硝酸脱除背景色， 使细菌时为红色或粉红色，背景为蓝色。
脱色方法
用70%的乙醇脱色涂片或用1%的酸酒 母进行脱色，然后用自来水将药液冲洗干 净，以去除 剩余的沉淀。
抗酸染色
1
染色需知
抗酸染色必须在导师指导下指导进行，
染色方法
2
操作过程必须严格遵循实验室安全规 范。
将脱色后的涂片置于第一草酸液中5-
10分钟后，绿青色背景逐渐淡化，然
南医微生物实验肥达、肠道等ppt课件
生 理 盐 水
1 1：40
2 1：80
3 1：160
4
5
1：320 1：640
6 对照
加菌液0.5ml/管（6→1），震荡混匀，43℃水浴1.5 h，观察结果
细菌生化反应
一、糖发酵试验 由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类 的分解能力不尽相同。
产酸产气 — 指示剂变色，小倒管内有气泡； 以＋ 表示
多细胞真菌 菌丝和孢子 丝状菌(filamentous fungus)
交织成团
或霉菌(mold)
真 菌（fungus ）
大分生孢子
厚膜孢子
白假丝酵母菌（白色念珠菌）— G+
新生隐球菌（新型隐球菌）— 墨汁负染
真菌培养物
新生隐球菌：表面粘稠 白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味
第6管
均匀混浊
＋
少量凝集
栅栏状或英文字母样，如V、W、X等
革兰染色
Albert染色 观察白喉杆菌异染颗粒——一端或两端
鉴别选择培养基 含0.03%～0.04%亚碲酸钾血平板
亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落
Elek平板
炭疽杆菌：G＋ 粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状； 有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央
30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状
可疑的乳白色菌落
双糖铁培养基初步鉴定
其他生化反应鉴定
血清学鉴定
SS培养基
胆盐
枸橼酸盐
抑制杂菌生长
煌绿
乳糖 被非致病菌分解产酸 蛋白胨 被致病菌分解产碱
中性红 酸：红
碱：黄
双糖铁培养基
上层
（固体）
下层
南医大微免实验(2)幻灯片
作业：
1、作图—细菌根本形态、特殊构 造 2、ELISA：原理、方法、结果、 结论 3、革兰染色：方法、结果〔图示〕
作图请注意大小比例、标注
【方法】主要有直接法和间接法。
免疫荧光
酶联免疫吸附试验〔ELISA〕 〔Enzyme linked lmmunosorbent
Assay〕
【原理】把抗原抗体的免疫反响和酶〔主要有辣根过氧化物 酶、碱性磷酸酶等〕的高效催化作用有机地结合起来，并 仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶 在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或复原， 从而产生有色的物质。颜色反响的深浅与抗体或抗原的量 成正比。
细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物， 形体微小，一般以微米〔µm〕作为测量单位。 细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大 类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直 径约1µm，杆菌长2∼5µm，宽0.3∼1µm。
球菌〔coccus〕
杆菌〔bacillus〕
螺形菌〔spiral bacterium〕
待检系统：Ag〔未知〕+Ab〔〕+补体
指示系统：绵羊红细胞〔Ag〕＋溶血素〔 Ab〕
结果：溶血——阴性
不溶血——阳性
（四）中和反应（neutralization） 病毒中和试验 毒素中和试验
（五）免疫标记技术
将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无 抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。
【方法】主要有间接法和双抗体夹心法。
ELISA：间接法------用于测定抗体
ELISA：双抗体夹心法------用于测定抗原
ELISA：双抗体夹心法检测尿HCG
器材：1个小杯/人，标本1、标本2
A、B、C液