201410植物组织石蜡切片的制作
石蜡切片的主要步骤
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作试验药品和仪器试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。
试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。
试验方法1 叶片组织结构的观察对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。
具体操作步骤如下：1. 取材。
选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2mm x 5mm 的小段。
2. 固定。
将切取的植物材料立即放入FAA 固定液中（材料与固定液比例1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰），固定时间48h以上。
FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按18:1:1的比例配置。
3. 冲洗。
材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h,并在70%酒精中过夜。
4. 脱水。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行：70%酒精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精，每级酒精中放2h，无水酒精分2次，一次2h。
5. 透明。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。
材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1〜2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红染色，以便透明后找到材料）一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒精一二甲苯一二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放1h。
材料进入无水的透明剂中后，若透明剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到前面一级无水的脱水剂中再次脱水。
6. 浸蜡。
夏季采用熔点较高的石蜡（56-58）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52-54）。
新蜡应溶一次，增加密度，反复溶的旧蜡包埋效果更好。
在溶蜡箱中进行55-60C，恒温。
怎样制作石蜡切片
怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。
以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。
-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。
确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。
-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。
-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。
2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。
-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。
-等待石蜡冷却和凝固。
你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。
3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。
-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。
你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。
4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。
-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。
5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。
-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。
6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。
- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。
-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。
制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。
在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。
植物组织石蜡切片制作
植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。
2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。
3．学会植物内部结构的比较研究方法。
二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。
它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。
凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。
全都过程如下：1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。
良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。
2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。
常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。
酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内。
高浓度酒精有使材料收缩的作用。
70％的酒精可作保存液。
配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。
酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。
酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。
B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。
固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。
不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。
经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。
中学生物实验技能实验报告——石蜡切片的制作
东北师范大学生命科学学院中学生物实验技能实验报告
名称：石蜡切片的制作
姓名：路路
学院：生命科学学院
专业：生物科学（师范）
年级：10级
学号：1241410044
【实验名称】石蜡切片的制作
【实验目的】了解石蜡切片的用途，并掌握其制作过程和方法。
石蜡切片（paraffin section），组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
例如在医学上，常常用石蜡切片做病例分析和诊断。
【实验步骤及原理】石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
以下即为石蜡标本制作的流程图：。
石蜡切片的制作过程
石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。
4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。
6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。
7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。
8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。
9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。
10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。
11．封片、烘片：加拿大树胶封片。
封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。
最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。
制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。
4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。
一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。
（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。
组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。
如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定 以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。
材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
固定的时间长短依据材料大小而定。
固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。
有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。
（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。
植物组织切片制作以及注意事项
植物组织石蜡切片的制作
1 植物组织石蜡切片的制作方法
⑴固定：用50%或70% FAA固定液,置于4℃固定24 h。
⑵脱水：倒去固定液，蒸馏水洗，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，
室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。
次日继续脱水酒精浓度梯度和时间依次为：50%2h，80% 乙醇2h、95% 乙醇4h、无水乙醇3h。
⑶透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h纯二甲苯2h。
⑷浸蜡：一蜡缸1h，二蜡缸2h，三蜡缸2h。
⑸包埋：按照所要求的面进行包埋。
⑹切片：修整蜡块，用Thermo切片机切片，厚度8-10 μm。
⑺贴片: 在防脱载玻片将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，烤片1小时。
⑻脱蜡及染色：
①番红-固绿双染
1、脱蜡：二甲苯（1）10min，二甲苯（2）10 min、二甲苯（3）10 min ，无
水乙醇8 min、、95%乙醇8 min、80%乙醇8 min、70%乙醇8min，蒸馏水洗。
2、番红固绿染色：
苯胺番红约10分钟，95%酒精去浮色，苯胺固绿约2－3分钟，再经95%酒精、无水酒精、1/2无水酒精+1/2二甲苯、二甲苯（两次）各约4—5秒钟。
（9）封片中性树胶封片
结果：厚壁组织、导管、细胞核红色，其余部分为绿色。
植物组织切片制作以及注意事项(精)
植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定:用50%或70% FAA固定液(50%或70%酒精:甲醛:冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA;老的材料用70%的FAA,置于4℃固定24 h。
⑵脱水:将固定液倒去,加入50%乙醇,室温静置30 min;重复一次,室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制,室温脱水染色过夜。
次日继续脱水,酒精浓度梯度和时间依次为:80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min(2次。
⑶透明:1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h,纯二甲苯1h、40 min(2次。
最后加入少量二甲苯(浸没材料即可和碎蜡,放入38℃温箱中过夜。
⑷浸蜡:将温箱温度调至56℃,计时1h;换成二级蜡1h;三级蜡(3次各1h、1h、40min(从温度上升到56℃开始计时。
⑸包埋:将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中,迅速放入冰水中使蜡凝固,防止气泡产生,以及凝蜡不匀。
⑹切片:修整蜡块,用Lica RM2126切片机切片,厚度5-10 μm。
⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂,将切好的蜡带放入温水中,捞至载玻片上,最后置于37℃恒温箱过夜烤片。
⑻脱蜡及染色:①番红-固绿对染ⅰ脱蜡:二甲苯60min,二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。
ⅱ染色:80%乙醇5 min,1%固绿(用95%酒精配制迅速蘸一下,大约10s,直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min(2次。
②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡:二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。
石蜡切片制作基本程序
石蜡切片制作基本程序石蜡切片制作是科学研究和医学领域中常见的技术，用于制作组织学切片以便进行显微镜下的观察和分析。
下面是一个石蜡切片制作的基本程序。
首先，需要准备一些基本的材料和设备，包括石蜡块、切片机、石蜡模具、刀片、显微镜玻片和染色试剂等。
确保这些材料和设备都是清洁的，并且切片机是调整好的。
接下来，将要制作切片的组织材料固定在一块石蜡模具上。
通常，组织样本需要经过一系列的处理步骤，包括固定、去水合和脱脂等，以确保最佳的切片质量。
固定的方法可以根据具体的实验目的选择，常见的方法包括福尔马林固定和乙醇固定等。
然后，将石蜡块加热至融化状态，并将融化的石蜡倒入石蜡模具中。
在倒入石蜡之前，可以根据需要在模具底部放置一块显微镜玻片，以便后续切片时将切片直接放置在玻片上。
接着，将固定在石蜡模具上的组织样本放置在石蜡中，确保它完全浸泡在石蜡中。
然后，将石蜡模具放置在冷却平台上，让石蜡逐渐冷却和固化。
固化过程中，可以在模具顶部放置一个金属夹片，以确保石蜡块的平整度。
当石蜡完全固化后，将石蜡块从模具中取出，并将其固定在切片机上。
然后，使用切片机的切片刀片将石蜡块切割成薄片。
切片时，需要调整刀片的切割速度和厚度，以获得所需的切片质量。
最后，将切割好的石蜡切片放置在显微镜玻片上，并进行必要的染色处理。
染色可以增强切片的对比度和可见度，使得组织结构更加清晰可辨。
总的来说，石蜡切片制作的基本程序包括固定组织样本、石蜡浸渍和固化、切片以及染色等步骤。
这些步骤的顺序和具体方法可以根据不同的实验需求进行调整和改变。
石蜡切片制作是一项需要细心和耐心的工作，但它为科学研究和医学诊断提供了重要的技术支持。
石蜡切片方法
试验三、石蜡切片制作方法一、取材1．方法：取材应根据需要，用锋利的刀片从所需部位上切取一小块放在固定液中固定。
植物组织应根据实际情况，细的根茎和窄的叶片，可取3-5mm长一小段；粗的根、茎和宽的叶片，也可以切取一部分进行固定。
2．注意：所选材料要具有典型性、代表性。
材料要新鲜，保持生活状态，防止失水。
取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。
二、固定1．方法：切取新鲜的材料，应按材料的种类，大小，性质和制作要求，立即将材料投入固定液中加以固定，使其形态结构和成分被化学试剂固定下来，与生活时保持相仿。
固定的时间，视材料的种类，大小，性质，固定液的种类与性质，渗透力的强弱等而定，可以从1-2小时到十几小时或二十几小时，甚至可以长到几天。
一些小的材料，仅需几十分钟。
例如把洋葱根尖固定与FAA固定液里，固定时间为12-24小时。
FAA固定液：50-70%酒精90ml，福尔马林（37-40%甲醛水溶液）5ml，冰醋酸5ml。
固定时间2-24小时，可作为保存剂长期保存，中间需换固定液。
固定液需放室温阴凉处储藏，也可放0-4℃下储藏。
2．注意：固定材料时固定液必须充足，一般为样品的20-30倍。
一般固定液都以新配为好，配好后应储存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。
三、冲洗1．方法：将材料放入指管或广口瓶，并加入半管水，用纱布将管口扎住，然后倒置于水槽中，这样可以使指管半沉半浮于水中。
打开水龙头，让材料按冲洗的时间在流水中冲洗。
注意水流不宜太急，以免冲坏材料。
流水时间可根据材料和固定液的情况而定，一般需要12-24小时。
2．注意：固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。
若需冲洗则必须用与固定的酒精相近浓度的酒精冲洗。
含有铬酸、重铬酸钾的，必须用流水冲洗。
冲洗时间应与固定时间相同或更长。
四、脱水1．方法：脱水一般多使用酒精，为了不使材料急剧收缩，应用不同浓度的酒精，自低浓度到高浓度逐级脱水。
石蜡切片的操作方法
石蜡切片的操作方法石蜡切片是一种常用的组织切片制备方法，用于细胞学和组织学的研究。
下面是石蜡切片的操作方法：1. 收集样本：选择要制备切片的组织样本或细胞样本。
样本可以是动物组织、植物组织或细胞培养物。
2. 选择合适的浸渍剂：石蜡切片需要将样本浸渍在石蜡之中，以固定和保护样本。
常用的浸渍剂包括甲醇、乙醇和二甲苯。
3. 固定样本：将样本固定在固定剂（如甲醛）中，以保持其形态结构。
固定时间根据样本的类型和大小而定，一般在4C下静置数小时或过夜。
4. 脱水：在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中，将固定的样本从水中脱水，使其逐渐转移到纯度较高的乙醇中。
5. 渗透：将脱水的样本浸渍在二甲苯或其他有机溶剂中，使其渗透并置换乙醇。
浸渍时间根据样本的大小和组织特性而定，一般在一到数小时之间。
6. 包埋：将渗透后的样本置于石蜡中，使其完全浸润。
石蜡块可以预先加热至液态，然后将样本放入其中，或者将样本以及适量的石蜡放入模具中，然后通过加热使其固化。
7. 切片：将制备好的石蜡块放入石蜡切片机中，使用旋转切片刀将其切成薄片。
切片厚度一般为4-10微米。
8. 取片：用切片刀或镊子将切好的石蜡切片取出，并放置在清洁的显微镜载玻片或切片架上。
9. 脱脂：将石蜡切片置于加热的二甲苯或其他脱蜡剂中，使其脱去石蜡。
10. 染色：根据需要，可对石蜡切片进行染色，例如常用的血液和组织标本染色方法如伊红染色(H&E染色)。
11. 干燥：将染色的切片在室温下晾干或在加热台上加热至干燥。
最后，将切片用显微镜载玻片覆盖，并封口保存。
以上就是石蜡切片的一般操作方法，每个实验室可能会根据具体需求进行微调。
在操作过程中要注意安全，避免接触有毒溶剂和使用锋利的刀片时的切割操作。
植物组织石蜡切片的制作
• (1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良，配法是100毫 升纯水中，加明胶4毫克，加热熔化，过滤即得。
• (2) 梅氏蛋白质： • 鸡蛋清 50ml • 甘 油 50m1 • 水杨酸纳 1g • 用蛋白与甘油搅拌，同时加入水杨酸纳，调匀过滤，应用时以滤
液15滴，放入纯水50毫升中即得。 • (3) Land氏液： • 阿拉伯胶 1克 • 重铬酸钾 0.2克 • 纯 水 100毫升
贰
修块、粘块、整修的步 骤：
叁
选取所要切片的材料， 从包埋的石蜡块上用单 面刀片切割下来，注意 不可损伤包埋的组织。
肆
确定切面的方位，用刀 片将石蜡块的四面作初 步的整修。保证材料四 周都有石蜡包围。但不 可太多。切面的上、下 边平行。
01
点燃酒精灯，并准备一把旧的解 剖刀。
02
左手大拇指与食指间持整修好的 石蜡块，材料向上用其余三指夹 住台木。此时将解剖刀在酒精灯 上加温后，即放在台木与石蜡块 之间，因解剖刀已加温，遇上两 面的石蜡都会融化，可立即将解 剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木 上。
切成的蜡带到2030厘米时，即以右 手用另一只毛笔轻 轻将蜡带挑起，平 放在黑电光纸上。 靠刀的一面较光滑， 应向下，较皱的一 面向上。
切下的蜡片是否良 好，此时应先行检 查。
切片工作结束后， 仍将刀片用具擦拭 干净。
01
贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落；是皱褶的蜡片伸展平整。
02
用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏水、展片机及铐片机。
用解剖刀将蜡带切成小段， 每段的长度应以盖玻片的 长度为准，一般应比盖玻 片短约1/5-2/5。分片应 从蜡带交界处分。
将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡片光面应向下贴在载 玻片上，依次排列整齐。留出右端贴标签处。
植物石蜡切片的制作
一、实验目的：通过对材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片等实验操作，了解石蜡切片的基本过程，掌握石蜡切片的制作方法。
二、实验准备：1．用具小标本瓶，指管，眼科镊子，蜡杯，载玻片，毛笔，蜡铲，刀片，量筒（10）毫升，漏，滴管，酒精灯，小木块，切片木框，切片盒，吸水纸，标签纸，切片刀，熔蜡箱，展片台，真空泵，解剖针。
2．器皿的清洗指管的清洗：切片所用的载玻片必须洗得很干净，否则切片容易脱落。
新的载玻片用洗液浸泡半天取出，用自来水冲洗后，用纱布擦干净，放入盒内备用。
擦拭时应捏住玻片两端的边缘操作，手指勿与玻片的表面接触，以免手指上的脂肪沾污玻片。
盖玻片的擦洗：新的盖片可放入95%酒精内浸泡数十分钟，或用洗液浸泡。
注意盖片要一片片投入，使盖片的二面都接触到液体，浸泡后，水冲洗干净后再放入95%酒精中浸泡，然后用干净白布擦拭。
擦拭时应注意，手指不能接触玻面，应以左手拇指和食指夹持盖片，右持布趁酒精未干时，一一擦拭之。
3．实验需用药品及其配制70%、85%、95%、100%的酒精，二甲苯，甘油蛋白，固定液，石蜡。
1各种浓度酒精配制实验室常以95%酒精来配制各种低浓度的酒精，因100%纯酒精系由95%酒精再蒸馏而成，价格昂贵，一般不用于稀释。
配制方法：配70%酒精时，可取95%酒精70毫升再加入蒸馏水25毫升即得。
一般遵照以下原则：无论用任何浓度的酒精稀释时，即稀释多大浓度就取多少毫升的酒精，然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即可。
2固定液的配制采用卡诺氏醋酸酒精固定液，醋酸用冰醋酸，酒精用纯酒精，体积比为醋酸：酒精=1：3。
注意须现配现用。
取鸡蛋的蛋白加入等量的甘油搅拌混合，至均匀为止。
加入约为1%量的麝香酚小块，借以防止微生物的侵入和腐败。
放入冰箱备用。
三、实验材料：蚕豆根尖或洋葱根尖等。
四、实验步骤：取材固定发芽的蚕豆，当其根尖长到一粒米大小时，用刀片切下来，立即投入盛有固定液体的标本瓶中，贴上标签，注明固定日期、固定液名称。
石蜡切片的详细制作过程
石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。
1．取材材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。
（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。
（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。
（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。
（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。
一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。
2．固定组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。
为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。
这种处理就是固定。
除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。
固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。
固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。
这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。
良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。
，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。
固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。
简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。
病理制片技术――组织石蜡切片
病理制片技术――组织石蜡切片组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。
石蜡切片法现使用的切片机有平推式切片机、轮转式切片机两种。
一、平推式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载物片(或免清洗的)，毛笔，铅笔，小竹片，水槽，雾化器，摊片器，切片刀，刀架。
2．切片制作步骤：刀架的粗削部放在头端，在切片机刀架部夹紧。
组织蜡块装在切片机蜡块固定器上夹紧。
右手握切片机刀头运动手柄，左手转动切片机蜡块运动旋钮。
先转动此钮，后平拉刀架运动手柄，进行粗削，直至组织切全。
停止，将刀架移到细削部，轻轻转动蜡块运动旋钮，后拉刀架手柄进行细削。
削至组织光滑发亮，右手拿毛笔扫净刀架及蜡块上的蜡屑，组织屑，放下毛笔，再用右手握住刀架运动手柄。
左手拿小竹片，用竹片头蘸一下水槽中的水。
左手中指搬动薄切钮，雾化器的喷头对准蜡块。
右手拉刀架运动手柄。
左手中的小竹片在蜡块空白处等待切片刀切起蜡片一端挑起粘住，随切片刀移动，完整的蜡片切出后，粘在竹片上，移入水槽中，捞片，放在摊片器上摊片5 min后，装在染色篮上，放入75℃烤箱烤片。
3．注意事项(1)无冷台的病理科可以将包埋好的组织蜡块放到冰箱内，但如放置时间过久温度太低切片时蜡块会产生热涨，切片会厚，要多切几张，后面的片子就会薄一些。
(2)雾化器是去除静电的，但也有增加切片厚度的缺陷。
尤其雾气大时，使蜡块热涨，厚度增加更明显。
为了保证切片厚度，一定要控制好风力、雾力。
雾化器使用自来水，水位控制在30刻度。
(3)切片机使用前一定要检查各部位情况。
先检查固定器是否固定在你所要的厚度上。
切片机刀架角度与蜡块呈90。
从蜡块右上角进刀。
二、轮转式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载玻片、毛笔、铅笔、盛有30％乙醇的小烧杯、牙科镊、展片槽、切片机、一次性刀片及刀架。
检查轮转式切片机切片厚度的钮是否固定于你所要切的厚度刻度上。
2．切片制作步骤：将放在－5℃冷台上的组织蜡块装在切片机固定器上夹紧，空白蜡多的一端在上。
植物组织石蜡切片的制备与染色观察
植物组织石蜡切片的制备与染色观察一．实验器具与试剂1.器具小培养皿、锡箔纸、尖头和平头镊子、剪刀、刀片、吸水纸、移液枪、1ml枪头、移液器和移液管、量筒（50mL，100mL，250mL，500mL）、废液瓶、水浴锅、酒精灯、三角瓶、真空锅、烘片箱、木筷、石蜡切片机、染色缸、载玻片、盖玻片、显微镜等2.试剂100%酒精、100%二甲苯、100%叔丁醇、石蜡块、蒸馏水、多聚甲醛、中性树胶、甲苯胺蓝（TB）染色剂等二. 实验步骤1.溶液配制10×PBS溶液：NaCl（国药或生工）75.95gNa2HPO4.12H2O（国药）25.07gNaH2PO4.2H2O （国药） 4.68g充分溶解后，用NaOH（国药）调PH7.0，定容1000mL，高压灭菌25min，4℃保存。
4%多聚甲醛固定液：1×PBS 100mL1M/L NaOH 0.5mL水浴加热至60-70℃，在通风橱中加入4g多聚甲醛，待溶解后冷却至4℃，加入100µl的10%的浓硫酸调节pH为7.0。
2.材料准备⑴固定取幼嫩的植物材料，将植物组织剪成合适大小的小块，立即放入一个装有新配制的4%多聚甲醛固定液的小器皿中，固定液体积视材料多少而定，一般材料少时10ml材料较多时可放15ml，小器皿置于冰上。
上面用锡箔纸盖好后扎孔。
抽真空使得材料浸没其中（反复真空和非真空状态，并保固定液不要沸腾），待材料下沉到管底。
具体操作如下：①放置在冰上的器皿放入真空锅里，盖上锅盖，拧开盖上螺旋，拧紧侧面螺旋，打开开关当压力表上显示到0.2时可计时10分钟。
②关上锅盖螺旋，拧松侧面螺旋，外面空气会进入真空锅内，当内外压力相等时计时10分钟。
③再重复步骤①，换一次新的固定液，4℃过夜固定，但不要超过16h。
(2)漂洗用1×PBS缓冲液（PH 7.0）漂洗组织块2次，每次4℃放置30min。
注意PBS容易结晶可75℃水浴加热。
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植物组织石蜡切片的制作
一、器具
石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片、切片架等。
二、试剂
酒精、二甲苯、甲醛、冰乙酸、番红、固绿、明胶、中性树胶、蒸馏水等
三、全都过程
1．固定2．脱水3．脱酒精4．浸蜡和封埋5．切片
6．粘片7．脱蜡8．染色9．胶封10. 拍照
四、操作步骤：
1、固定和保存（Fixation）
FAA固定液(事先冷却)固定24 h以上，然后转移到70%酒精中保存。
固定时，真空抽滤2-3次，以促使固定更充分。
2．脱水与硬化（Dehydration）
3．脱酒精（透明）
Dehydration in a series of ethanol
Day 1
85% Ethanol 1 Hr on ice
95% Ethanol + 0.1% Eosin OVERNIGHT 4°C
Day 2
100% Ethanol 30 min room temp
100% Ethanol 30 min room temp
100% Ethanol 1 Hr room temp
100% Ethanol 1 Hr room temp
25% Xylene+75% Ethanol 1 Hr room temp
50% Xylene+50% Ethanol 1 Hr room temp
75% Xylene+25% Ethanol 1 Hr room temp
100% Xylene 1 Hr room temp
100% Xylene 1 Hr room temp
100% Xylene 1 Hr room temp
4．浸蜡和封埋（Embedding）
（1）从二甲苯逐步梯度更换纯石蜡，使组织渗透彻底。
（2）将材料移入纸盒中，依将所要切的方向，妥善排列，再以两手平持纸盒，移至冷水(about 18°C)中，用口在蜡面上吹气，促其凝结，待蜡面凝成簿层时(about 1 minute)，将纸盒全部沉入。
水冷凝后，将纸撕去，即获蜡块，至此埋蜡完成。
（1）Embedding tissues in paraffin blocks
25% melted wax (Paraplast)+75% Xylene overnight 45℃
50% melted wax (Paraplast)+50% Xylene 4h 53℃
75% melted wax (Paraplast)+ 25% Xylene 4h 53℃
100% melted wax (Paraplast) overnight60℃
100% melted wax (Paraplast) overnight60℃
5．切片
（1）用单面刀片修整蜡块，使上下面平行，下面略出，左右两边呈一定角度。
（2）安装切片刀，刀的斜度（around 7 degrees），非常重要，最好先切除的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合后，就不要随便变动，以免试刀麻烦。
（3）刀片斜度调好后，将刀片移近蜡块，使小蜡块的下边与刀锋平行，然后把它固定，再转下蜡块，呈矩形才行。
只有平整的蜡块，才能切出平整的蜡带。
（4）根据需要，调整控制切片厚度的机制（厚度10μm）。
调度后，把它固定下来。
上述四步骤完成后，就可进行切片，将切出的蜡带，平展于盒内以供粘片。
6．粘片
粘片时，以记号笔在载玻片上编号，滴加1或2滴1%明胶溶液（或直接用水），用胶头滴管将溶液涂匀，滴加1或2滴展开剂（2~4%的甲醛溶液），然后将切好的蜡带平整地放置在溶液上，置烤片机上的烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度，烤片温度为42℃。
1~2min 后用滤纸吸去多余液体，再放置于烘片台上烘烤1~2min。
放置于恒温环境35-40℃烘烤1-2d。
一般粘片后的材料需放置2~3天后方可脱蜡、染色。
7．脱蜡
将粘有材料的载玻片放入纯二甲苯中，然后逐级过渡到蒸馏水中。
Dewaxing:
100% Xylene 15 min room temp
100% Xylene 15 min room temp
50% Xylene+50% Ethanol 15 min room temp
100% Ethanol 15 min room temp
95% Ethanol 8 min room temp
85% Ethanol 8 min room temp
70% Ethanol 8 min room temp
50% Ethanol 8 min room temp
25% Ethanol 8 min room temp
Two rinse using distilled water
8．染色9．胶封
番红与固绿色法。
0.5% Safranin-O in 43% ethanol 1 h room temp
Two rinse using distilled water
50% Ethanol 8 min room temp
70% Ethanol 8 min room temp
85% Ethanol 8 min room temp
95% Ethanol 8 min room temp
0.5% (w/v) Fast Green (in 50% clove oil and 50% ethanol) 5–10 s room temp 100% ethanol quickly passed
Clove oil: ethanol : xylene (50:25:25) 10 min room temp
Clove oil: ethanol : xylene (50:25:25) 10 min room temp
50% Xylene+50% Ethanol 15 min room temp
100% Xylene 15 min room temp
100% Xylene 15 min room temp
Mounting with Permount (Fisher Scientific)
五、讨论和注意事项
(1) 用番红和固绿这个组合染成的切片，木化、栓化和角质的细胞壁，被番红染成鲜红色，纤维素的细胞璧，被固绿成绿色。
就维管束来讲，木质部染红，韧皮部染绿，区别极清楚。
(2) 在50％酒精中脱色，需经实践，如脱色不够，绿色难得染好，脱色太过分，做出来的切片，红色太淡，甚至于全是绿色，失掉了二色染法的用意。
(3) 染色时间，不是绝对的，常因材料种类，切片的厚簿而不同，在没有把握时，最好选用少数材料试染，试染成功后，再依次大批染色。
六、附录（药剂配方）
（1）F A A固定液的配方如下（100ml）：
50％或70%酒精90ml
冰醋酸5ml
福尔马林5ml
柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制。
（2）1%明胶液：50毫升纯水中，加明胶0.5克，加热搅拌溶解。
（3）展开剂（2~4%的甲醛溶液）：50ml纯净水中加入4ml甲醛。
（4）1%番红水溶液：100毫升纯水中加番红1克。
（5）0.5％固绿：用95％的酒精配制。
切片实验过程中不同浓度的酒精、二甲苯以及染色液等溶液能不能重复使用，如果能用可以用几次？
王英---可以。
前三步可以换勤点染100片左右可以换后面的看染色情况换；
染色用的酒精和二甲苯用的烧杯标明并分开使用染色前后也最好分开；
酒精易挥发，所以染色时要加盖。
徐沂春---染色10次左右对除染色液外都换；此外，开始的二甲苯、染色后的酒精大概5次。
我一般然500_1000片后换
我觉得要先加长透蜡时间，碎有可能是组织透蜡不充分，切得时候受到挤压，碎了。
第二个是略微增加切片厚度，在保证能观察的前提下。
第三个是切的时候要检查刀片，看刀片有没有缺口。
刀头有没有小碎物。
每次切都要清理一下
第四个是角度，这个我也调过，但不知道每个是不是一样的。
前提是能切就行，不能切的话，调整刀片要先竖直，在微调
第五个修蜡，我没看到你的。
关键是要修的平整，特别是夹的两面
第一步浸蜡能不能不过夜做好，让第二步开始过夜
把第3、4、5步在同一天做完，3、4步不少于4小时，第五步过夜。