影响ELISA试验因素
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增加或减少洗板次数。
洗 板2
4.洗板后，拍干包被板，应垂直扣在备好的 干净吸水纸或毛巾上，且每次拍板应换掉 前次拍过的毛巾或吸水纸,避免交叉污染.
5.洗液应调至适当的注出量，每孔应在 350ul-450ul之间，但不要溢出孔外。
洗 板3
6.稀释洗液应用蒸馏水或去离子水，pH 值不宜过酸或过碱，保证配出的洗液 pH值7.4±0.2，水质宜新鲜，长菌或 有沉淀不宜使用，水保存应用非金属 容器。
处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较 多，通常与当时实验的水平有关， 注意检查实验条件的波动 。
E避免加样时间过长 。 F由于试剂盒灵敏度过高而造成临
床假阳性偏高的结果。
问题８：多次实验重复性差。
处理意见：A加样后充分混均。 B尽可能使用同一加样器，装紧 枪头。 C测量波长保持一致。 D加样量、加试剂量保持一致。
标本处理的意义
标本处理过程严谨，可最大限度避免由 于标本因素造成的非特异反应对实验的 影响，最大限度避免重复实验,增加不 必要的工作量.
试剂
1.观察外包装，内组份有无漏液。 2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。
加样
１.仔细注意加样全部过程.
2.加样后及时放入孵育箱，避免包被板在室温 放置时间过长。
稀释洗液应用蒸馏水或去离子水ph值不宜过酸或过碱保证配出的洗液ph值7402水质宜新鲜长菌或有沉淀不宜使用水保存应用非金属容器
影响ELISA试验因素
试剂保存及使用前准备
试剂盒保存于2-8℃
使用前应先将检测试剂盒放置室温平衡15-30 分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性 剂的溶解。
真空包装袋漏气一般不影响试剂盒质量，如 须拼组板条于板架上，必须保证板条放平， 以免影响洗板机的操作。
处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备 是否定期校准。
D注意检查实验中所用Байду номын сангаас板、酶标 试剂的批号是否在有效期之内.
问题４：质控品灵敏度偏高 。
处理意见：卫生部临检中心的质控品存在 批间批内差异。 实验室相关条件改变导致质控变化。
问题５：多次实验灵敏度一直偏低。
处理意见：A保存环境不规范。 B孵箱温度不足。 C温育时间不足。
显 色2
5. 将加样槽清洗干净。 6.A、B液应避免接触污物 。 7.不同厂家显色液不得混用。
终止和读数
1．加完终止后30分钟内读取数据。
2．读板时板底如果不清洁，就会导致所读的 数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标 板的底部是清洁的。
灰区的定义
灰区又称灰色带反应。就是把 OD值在Cut off 值正负10%这个范围内的标本称为灰区标 本。 这个范围称为灰区。
3.标本较多时，请分批操作。
温育
1.按规定加盖封板膜。
2.按说明步骤严格控制孵育时间。
3. 严格控制温育仪器（水箱、温箱、全自动酶免） 的温度，建议在仪器内放置测量工具（全自动酶 免除外）。
洗 板1
1.要有适当的浸泡时间（30~60秒）。 2.洗板机吸液要彻底,残余量低于5ul。 3.洗板次数应与说明书要求一致，尽量不要私自
问题６：单次实验中出现假阳性
处理意见：注意实验过程中的影响因素，特 别是实验中的洗板应设置浸泡 30---60秒时间。
问题７：临床实验中出现假阳性偏高。
处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否 完全溶解。
B注意检查实验中所使用的仪器设 备是否定期校准 。
C注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。
灰区的处理
1.灰区是客观存在的，没有不存在灰区的试剂。 我们只是尽量减少灰区的出现比例。
2.减少灰区最有效的方法就是尽量将板洗涤干 净。
3.严格控制温浴时间。
问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或 者偏高。
处理意见：重新实验，并在实验中注意试 剂盒的温度平衡、温育的时间、 显色的时间等影响因素的控制 。
7.稀释好的洗液4度情况下可保存3--5天.
8.由于洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成 结晶，配制洗液时应完全溶解.
显 色1
1.试剂显色时先加A液，后加B液，二者不要颠倒.
2.前后加入的间隔时间不要超过10分钟.
3.若把A液和B液先混和，再加样显色，需要求二 者等体积混合。
4.底物溶液B应是澄清透亮，如倒出发现溶液已呈 微兰色，表明液体已受污染，应废弃不用。
问题2：质控品漏检
处理意见：检查质控品是否有反复冻融 的情况、质控品是否有批内 差异、质控品是否为4摄氏度 久置。
问题３：日常使用中出现弱阳性标本漏检。
处理意见：A标本本身由于各种因素影响而表现 为弱阳性，实际上为阴性标本。
B由于标本自身含量较低，易随实 验水平位试剂盒调整等因素波动， 对这部份标本的处理应格外慎重， 有条件的地区应进行确证实验。
不加抗凝剂的标本处理
１．标本采集后，应先将标本３７度放 置３０－６０分钟．
２．标本应进行离心：采用３０００转 速离心15－20分钟．
3.取上清液加样.
加抗凝剂的标本处理
１．标本采集后，应先将标本３７度或者 室温放置一定时间． ２．标本应进行离心：采用３０００转速 离心10－15分钟．
3.取上清液加样.
洗 板2
4.洗板后，拍干包被板，应垂直扣在备好的 干净吸水纸或毛巾上，且每次拍板应换掉 前次拍过的毛巾或吸水纸,避免交叉污染.
5.洗液应调至适当的注出量，每孔应在 350ul-450ul之间，但不要溢出孔外。
洗 板3
6.稀释洗液应用蒸馏水或去离子水，pH 值不宜过酸或过碱，保证配出的洗液 pH值7.4±0.2，水质宜新鲜，长菌或 有沉淀不宜使用，水保存应用非金属 容器。
处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较 多，通常与当时实验的水平有关， 注意检查实验条件的波动 。
E避免加样时间过长 。 F由于试剂盒灵敏度过高而造成临
床假阳性偏高的结果。
问题８：多次实验重复性差。
处理意见：A加样后充分混均。 B尽可能使用同一加样器，装紧 枪头。 C测量波长保持一致。 D加样量、加试剂量保持一致。
标本处理的意义
标本处理过程严谨，可最大限度避免由 于标本因素造成的非特异反应对实验的 影响，最大限度避免重复实验,增加不 必要的工作量.
试剂
1.观察外包装，内组份有无漏液。 2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。
加样
１.仔细注意加样全部过程.
2.加样后及时放入孵育箱，避免包被板在室温 放置时间过长。
稀释洗液应用蒸馏水或去离子水ph值不宜过酸或过碱保证配出的洗液ph值7402水质宜新鲜长菌或有沉淀不宜使用水保存应用非金属容器
影响ELISA试验因素
试剂保存及使用前准备
试剂盒保存于2-8℃
使用前应先将检测试剂盒放置室温平衡15-30 分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性 剂的溶解。
真空包装袋漏气一般不影响试剂盒质量，如 须拼组板条于板架上，必须保证板条放平， 以免影响洗板机的操作。
处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备 是否定期校准。
D注意检查实验中所用Байду номын сангаас板、酶标 试剂的批号是否在有效期之内.
问题４：质控品灵敏度偏高 。
处理意见：卫生部临检中心的质控品存在 批间批内差异。 实验室相关条件改变导致质控变化。
问题５：多次实验灵敏度一直偏低。
处理意见：A保存环境不规范。 B孵箱温度不足。 C温育时间不足。
显 色2
5. 将加样槽清洗干净。 6.A、B液应避免接触污物 。 7.不同厂家显色液不得混用。
终止和读数
1．加完终止后30分钟内读取数据。
2．读板时板底如果不清洁，就会导致所读的 数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标 板的底部是清洁的。
灰区的定义
灰区又称灰色带反应。就是把 OD值在Cut off 值正负10%这个范围内的标本称为灰区标 本。 这个范围称为灰区。
3.标本较多时，请分批操作。
温育
1.按规定加盖封板膜。
2.按说明步骤严格控制孵育时间。
3. 严格控制温育仪器（水箱、温箱、全自动酶免） 的温度，建议在仪器内放置测量工具（全自动酶 免除外）。
洗 板1
1.要有适当的浸泡时间（30~60秒）。 2.洗板机吸液要彻底,残余量低于5ul。 3.洗板次数应与说明书要求一致，尽量不要私自
问题６：单次实验中出现假阳性
处理意见：注意实验过程中的影响因素，特 别是实验中的洗板应设置浸泡 30---60秒时间。
问题７：临床实验中出现假阳性偏高。
处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否 完全溶解。
B注意检查实验中所使用的仪器设 备是否定期校准 。
C注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。
灰区的处理
1.灰区是客观存在的，没有不存在灰区的试剂。 我们只是尽量减少灰区的出现比例。
2.减少灰区最有效的方法就是尽量将板洗涤干 净。
3.严格控制温浴时间。
问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或 者偏高。
处理意见：重新实验，并在实验中注意试 剂盒的温度平衡、温育的时间、 显色的时间等影响因素的控制 。
7.稀释好的洗液4度情况下可保存3--5天.
8.由于洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成 结晶，配制洗液时应完全溶解.
显 色1
1.试剂显色时先加A液，后加B液，二者不要颠倒.
2.前后加入的间隔时间不要超过10分钟.
3.若把A液和B液先混和，再加样显色，需要求二 者等体积混合。
4.底物溶液B应是澄清透亮，如倒出发现溶液已呈 微兰色，表明液体已受污染，应废弃不用。
问题2：质控品漏检
处理意见：检查质控品是否有反复冻融 的情况、质控品是否有批内 差异、质控品是否为4摄氏度 久置。
问题３：日常使用中出现弱阳性标本漏检。
处理意见：A标本本身由于各种因素影响而表现 为弱阳性，实际上为阴性标本。
B由于标本自身含量较低，易随实 验水平位试剂盒调整等因素波动， 对这部份标本的处理应格外慎重， 有条件的地区应进行确证实验。
不加抗凝剂的标本处理
１．标本采集后，应先将标本３７度放 置３０－６０分钟．
２．标本应进行离心：采用３０００转 速离心15－20分钟．
3.取上清液加样.
加抗凝剂的标本处理
１．标本采集后，应先将标本３７度或者 室温放置一定时间． ２．标本应进行离心：采用３０００转速 离心10－15分钟．
3.取上清液加样.