中药制药技术 六味地黄丸(浓缩丸)组方中药的鉴定

项目8 六味地黄丸（浓缩丸）组方中药的鉴定
【处方】熟地黄12021 酒萸肉60g 牡丹皮45g 山药60g 茯苓45g 泽泻45g 【制法】以上六味，牡丹皮用水蒸气蒸馏法提取挥发性成分；药渣与酒萸肉2021熟地黄、茯苓、泽泻加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩成稠膏；山药与剩余酒萸肉粉碎成细粉，过筛，混匀，与上述稠膏和牡丹皮挥发性成分混匀，制丸，干燥，打光，即得。

一、熟地黄的鉴定
本品为生地黄的炮制加工品。

【制法】（1）取生地黄，照酒炖法（通则0213）炖至酒吸尽，取出，晾晒至外皮黏液稍干时，切厚片或块，干燥，即得。

每100g生地黄，用黄酒30～50g。

（2）取生地黄，照蒸法（通则0213）蒸至黑润，取出，晒至约八成干时，切厚片或块，干燥，即得。

【性状】本品为不规则的块片、碎块，大小、厚薄不一。

表面乌黑色，有光泽，黏性大。

质柔软而带韧性，不易折断，断面乌黑色，有光泽。

气微，味甜。

【鉴别】取本品粉末1g，加80%甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg 的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液5µl、对照品溶液2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16：：2）为展开剂，展开，取出，晾干，用%的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍，晾干。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。

【检查】【浸出物】同地黄。

【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈%醋酸溶液（16：84）为流动相；检测波长为334nm。

理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。

对照品溶液制备取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含10µg 的溶液，即得。

供试品溶液制备取本品最粗粉约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，减压回收溶剂近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2021，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含毛蕊花糖苷（C29H36O15）不得少于%。

二、酒萸肉的鉴定
本品为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Zucc的干燥成熟果肉。

秋末冬初果皮变红时采收果实，用文火烘或置沸水中略烫后，及时除去果核，干燥。

【性状】本品呈不规则的片状或囊状，长1～，宽～lcm。

表面紫红色至紫黑色，皱缩，有光泽。

顶端有的有圆形宿萼痕，基部有果梗痕。

质柔软。

气微，味酸、涩、微苦。

【鉴别】（1）本品粉末红褐色。

果皮表皮细胞橙黄色，表面观多角形或类长方形，直径16～30μm，垂周壁连珠状增厚，外平周壁颗粒状角质增厚，胞腔含淡橙黄色物。

中果皮细胞橙棕色，多皱缩。

草酸钙簇晶少数，直径12～32μm。

石细胞类方形、卵圆形或长方形，纹孔明显，胞腔大。

（2）取本品粉末，加乙酸乙酯10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg 的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（2021：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。

（3）取本品粉末，加甲醇10ml，超声处理2021，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml 使溶解，作为供试品溶液。

另取莫诺苷对照品、马钱苷对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg 的混合溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】杂质（果核、果梗）不得过3%（通则2301）。

水分不得过%（通则0832第二法）。

总灰分不得过%（通则2302）。

【浸出物】照水溶性浸出物测定法（通则22021项下的冷浸法测定，不得少于%。

【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为240nm；柱温为35℃。

理论板数按马钱苷峰计算应不低于10000。

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时间（分钟）流动相A（％）流动相B（％）
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0~2021 7 93
20210 7→2021 93→80
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对照品溶液的制备取莫诺苷对照品、马钱苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含莫诺苷（C17H26O11）和马钱苷（C17H26O10）的总量不得少于%。

饮片
【炮制】山萸肉除去杂质和残留果核。

【性状】【鉴别】【检查】（水分总灰分）【含量测定】同药材。

酒萸肉取净山萸肉，照酒炖法或酒蒸法（通则0213）炖或蒸至酒吸尽。

本品形如山茱萸，表面紫黑色或黑色，质滋润柔软。

微有酒香气。

【含量测定】同药材，含莫诺苷（C17H26O11）和马钱苷（C17H26O10）的总量不得少于%。

【鉴别】【检查】（水分总灰分）【浸出物】同药材。

三、牡丹皮的鉴定
本品为毛茛科植物牡丹，直径～，厚～。

外表面灰褐色或黄褐色，有多数横长皮孔样突起和细根痕，栓皮脱落处粉红色；内表面淡灰黄色或浅棕色，有明显的细纵纹，常见发亮的结晶。

质硬而脆，易折断，断面较平坦，淡粉红色，粉性。

气芳香，味黴苦而涩。

刮丹皮外表面有刮刀削痕，外表面红棕色或淡灰黄色，有时可见灰褐色斑点状残存外皮。

【鉴别】（1）本品粉末淡红棕色。

淀粉粒甚多，单粒类圆形或多角形，直径3～16μm，脐点点状、裂缝状或飞鸟状；复粒由2～6分粒组成。

草酸钙簇晶直径9～45μm，有时含晶细胞连接，簇晶排列成行，或一个细胞含数个簇晶。

连丹皮可见木栓细胞长方形，壁稍厚，浅红色。

⑵取本品粉末1g，加乙醚10ml，密塞，振摇10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（4：1：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸乙醇溶液（1→10），在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分不得过%（通则0832第四法）。

总灰分不得过%（通则2302）。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（通则22021项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于%。

【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（45：55）为流动相；检测波长为274nm。

理论板数按丹皮酚峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2021的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粗粉约，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率50H）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含丹皮酚（C9H10O3）不得少于%。

四、山药的鉴定
本品为薯蓣科植物薯蓣Dioscotea o，直径～6cm。

表面黄白色或淡黄色，有纵沟、纵皱纹及须根痕，偶有浅棕色外皮残留。

体重，质坚实，不易折断，断面白色，粉性。

气微，味淡、微酸，嚼之发黏。

山药片为不规则的厚片，皱缩不平，切面白色或黄白色，质坚脆，粉性。

气微，味淡、微酸。

光山药呈圆柱形，两端平齐，长9～18cm，直径～3cm。

表面光滑，白色或黄白色。

【鉴别】（1）本品粉末类白色。

淀粉粒单粒扁卵形、三角状卵形、类圆形或矩圆形，直径8～35μm，脐点点状、人字状、十字状或短缝状，可见层纹；复粒稀少，由2～3分粒组成。

草酸钙针晶束存在于黏液细胞中，长约至240μm，针晶粗2～5μm。

具缘纹孔导管、网纹导管、螺纹导管及环纹导管直径12～48μm。

（2）取本品粉末5g，加二氯甲烷30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取山药对照药材5g，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（9：1：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分毛山药和光山药不得过%；山药片不得过%（通则0832第二法）。

总灰分毛山药和光山药不得过%；山药片不得过%（通则2302）。

二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（通则2331）测定，毛山药和光山药不得过400mg/g；山药片不得过10mg/g。

【浸出物】照水溶性浸出物测定法（通则22021项下的冷浸法测定，毛山药和光山药不得少于%；山药片不得少于%。

五、茯苓的鉴定
本品为多孔菌科真菌茯苓，少数至16μm。

（2）取本品粉末少量，加碘化钾碘试液1滴，显深红色。

（3）取本品粉末1g，加乙醚50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（2021：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液-乙醇（4：1）混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

【检查】水分不得过%（通则0832第二法）。

总灰分不得过%（通则2302）。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（通则22021项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于%。

茯苓（菌核）粉末图
1分枝状团块2颗粒状团块3无色菌丝4棕色菌丝
六、泽泻的鉴定
本品为泽泻科植物泽泻Alisma orientale（Sam）Jue，直径2～6cm。

表面淡黄色至淡黄棕色，有不规则的横向环状浅沟纹和多数细小突起的须根痕，底部有的有瘤状芽痕。

质坚实，断面黄白色，粉性，有多数细孔。

气微，味微苦。

【鉴别】（1）本品粉末淡黄棕色。

淀粉粒甚多，单粒长卵形、类球形或椭圆形，直径3～14µm，脐点人字状、短缝状或三叉状；复粒由2～3分粒组成。

薄壁细胞类圆形，具多数椭圆形纹孔，集成纹孔群。

内皮层细胞垂周壁波状弯曲，较厚，木化，有稀疏细孔沟。

油室大多破碎，完整者类圆形，直径54～110µm，分泌细胞中有时可见油滴。

（2）取本品粉末2g，加乙酸乙酯2021，超声处理30分钟，滤过，滤液加于氧化铝柱（2021300目，5g，内径为1cm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取23-乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取
上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硅钨酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分不得过%（通则0832第二法）。

总灰分不得过%（通则2302）。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（通则22021项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于%。

【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（73：27）为流动相；检测波长为2021m。

理论板数按23-乙酰泽泻醇B峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取23-乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml含2021的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末（过五号筛）约，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50H）30分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含23-乙酰泽泻醇B（C32H50O5）不得少于%。