氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆菌病的治疗效果
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1 材料与方法
111 材料 11111 药品 氟苯尼考原粉 :浙江台洲海翔医药化工有限公司生产 ,氯霉素原粉 :东北制药厂生产 ,甲砜 霉素原粉 :山东省明发制药有限公司生产 ,盐酸多西环素 :开封制药厂生产. 11112 试剂 营养肉汤液体培养基及麦康凯营养琼脂均购自杭州天和微生物试剂有限公司 ;2 ,5-二甲基 甲酰胺 、氯化钠 、质量分数为 95 %的乙醇均为国产分析纯试剂. 11113 仪器 PYX-DHX-型隔水式恒温培养箱 、DW- CJ- IC 型超净工作台 、电热恒温水箱 、手提式压力蒸汽 灭菌器 、电子天平 、可调微量移液器 (10～50μL ,200～1 000μL) 等. 11114 试验动物 500 只 1 日龄刚出壳的罗曼仔鸡 ,购自郑州牧业工程高等专科学校孵化厂 ,全封闭箱式 隔离饲养 ,定期常规消毒 ,饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料 ,自由采食和饮水 ,预饲至 8 日龄进入正式试 验. 112 方法 11211 体外抑菌试验 无菌准确称取一定量药物 ,配制成质量浓度为1 280 mg·L - 1的贮存液 ,采用试管两 倍稀释法测定最小抑菌浓度[14] (MIC) ,鸡大肠杆菌菌悬液浓度为 105 CFU·mL - 1 . 以培养 18～24 h 后能抑 制细菌生长的最小药物浓度为 MIC ,继续培养到 48 h 并将能抑制细菌生长最小药物浓度的前后两管接种 普通平板 ,以菌落数 ≤5 个的最小药物浓度为最小杀菌浓度 (MBC) ,相同过程重复 3 次 ,求平均值. 11212 联合药敏试验 采用棋盘法[14] ,鸡大肠杆菌菌悬液用预温的营养肉汤稀释至 106 CFU·mL - 1. 阳性 对照 :取菌悬液 012 mL 加至 118 mL 营养肉汤中 ;试验组 : (1) 单独用药组 :将各质量浓度药物 (215 ,5 ,10 , 20 ,40 MIC) 012 mL 加至 116 mL 营养肉汤中 ,再加入菌悬液 012 mL ; (2) 联合用药组 :分别将 2 种药物 012 mL 分别加至 114 mL 营养肉汤中 ,再加入菌悬液 012 mL. 结果使各管中的药物最终质量浓度分别为 0125 , 015 ,1 ,2 ,4 MIC ,受试菌悬液浓度为 105 CFU·mL - 1. 相同过程重复 3 次. 试验结果以部分抑菌浓度 ( FIC) 指 数作为联合药敏试验的判断依据[15] . 11213 体外 PAE 测定 分别取 20 ,40 ,80 MIC 质量浓度的药液各 012 mL 与 118 mL 浊度为 107～108CFU· mL - 1对数生长期的菌悬液置 3 支试管中 ,此为试验管 ,同时设 2 个对照管 (分别为 012 mL 无菌生理盐水和 118 mL 菌悬液) ,各管混匀后置 37 ℃恒温水浴中培养 2 h. 再取上述各试验管药物 (细菌混合物) 及 2 个对 照管中的液体 ,用 37 ℃预温的营养肉汤1 000倍稀释除药 ,并在 1 个对照管中加入一定量的药物 ,使其中的 药物浓度相当于 8 MIC 试验管中被1 000倍稀释后的药物浓度 ,作为非残留药物造成 PAE 的对照. 以上各 管混匀后立即置 37 ℃恒温水浴中孵育 ,计为重建后零时. 于重建后 0 ,1 ,2 ,3 ,4 ,5 ,6 h 分别取菌液 011 mL 进 行细菌计数 (重复 3 次求均值) . 以各时间点 CFU·mL - 1值的常用对数 (lg) 为纵轴 ,以孵育时间 (h) 为横轴建 立对照管或试验管重建后恢复生长的动力学曲线 ,并计算出 T , C , 按公式抗菌效应 = T - C 计算 , 其中 , T , C 分别为试验管或对照管 CFU·mL - 1值高于重建后零时 10 倍 (1 lg CFU·mL - 1) 所需时间 (h) .
分别测定氟苯尼考 、多西环素及氟苯尼考与多西环素联合 (质量比为 1∶2) 后各相应质量浓度的 PAE , 联合用药的 PAE 值比两药单用 PAE 之和延长 1 h 以上为协同 ,相近为相加 ,与单药 PAE 的较大值相近为 无关 ,比单药 PAE 的较小值还小为拮抗[16] . 11214 疾病模型的复制 1121411 菌种及其特性检查 菌种为鸡大肠杆菌 O78标准株 (购自中国兽药监察所) ,取冻干标准毒株 ,无 菌操作启封后接种于麦康凯琼脂平板 ,37 ℃培养 18～24 h 后 ,菌落形态为紫红色 、直径为 1 mm 左右圆形 菌落 ,触片染色后镜检为小的杆状 G- 细菌.
收稿日期 :2004 - 06 - 22 作者简介 :苑 丽 (1973 - ) ,女 ,河南获嘉人 ,讲师 ,硕士 ,从事动物抗菌药药效学研究.
94
河 南 农 业 大 学 学 报
第 39 卷
氟苯尼考是一种化学合成的氯霉素类动物专用的新型广谱抗菌药 ,1990 年首次在日本上市 ,中国也 于 1999 年批准上市 ,主要用于治疗由敏感菌引起的猪 、鸡和鱼的细菌性疾病[1] . 目前 ,国内外对该药单独 使用的药动学[2～6]和药效学[7～13]的研究较多 ,但该药与多西环素联合对试验性鸡大肠杆菌病的治疗效果 尚未见有研究报道. 本试验在测定氟苯尼考单独及其与多西环素联合对鸡大肠杆菌体外抗菌活性 、抗菌后 效应 ( PAE) 的基础上 ,观察了氟苯尼考及其与多西环素联合时不同给药途径对鸡大肠杆菌病的治疗效果 , 以期为该药复方制剂及其在禽病防治上的合理使用提供科学依据.
苑 丽1 ,胡功政1 ,刘智明2 ,王升运1 ,梁 军1 ,杨玉荣1
(1. 河南农业大学牧医工程学院 ,河南 郑州 450002 ;2. 河南省畜牧局 ,河南 郑州 450002)
摘要 :研究了氟苯尼考单药及与多西环素联合对鸡大肠杆菌的抗菌活性 、抗菌后效应 ( PAE) 及对试验性鸡大肠杆菌病的治 疗效果. 结果表明 :氟苯尼考对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度 (MIC) 为 116 mg·L - 1 ,与氯霉素相同 ,是甲砜霉素的 215 % ;氟苯 尼考对鸡大肠杆菌的 PAE(1145～2107 h) 显著长于甲砜霉素 ( P < 0105) ,呈浓度依赖性. 棋盘法测得氟苯尼考与多西环素联 合对鸡大肠杆菌呈无关作用 ,部分抑菌浓度 (FIC) 指数值为 115 ,联合时的氟苯尼考 MIC 值是其单独时 50 %. 氟苯尼考以 1∶2 (质量比) 与多西环素联合时 ,对鸡大肠杆菌的 PAE 与单药 PAE 的较大值相近 ,与相应浓度的单药相比均表现为无相关作 用. 氟苯尼考 3 种剂量 (10 mg·kg - 1和 20 mg·kg- 1 (肌注) 、30 mg·kg - 1 (口服) ) 、或联合用药 (氟苯尼考 10 mg·kg - 1 + 多西环素 20 mg·kg- 1 、氟苯尼考 20 mg·kg- 1 + 多西环素 40 mg·kg - 1 (口服) ) 5 种治疗方案 ,对鸡大肠杆菌病的治愈率分别为 7313 % , 7617 % ,7313 % ,7617 % ,8010 % ,感染对照组的死亡率为 8010 %. 关键词 :氟苯尼考 ;联合用药 ;鸡大肠杆菌病 ;治疗 中图分类号 :S 859179 文献标识码 :A
Abstract : A study was conducted on the antibacterial activity ,post-antibiotic effect and efficacy of florfenicol and its combination with doxycycline against the experimental infection of chickens with E1 coli1The results revealed that the minimal inhibitory concentrations (MICs) of flofenicol against E1 coli were 116 mg·L - 1 ,equal to that of chlorampheni2 col and 215 % of thiamphenicol1The results also demonstrated that PAEs duration induced by florfenicol against E1 coli (1145～2107 h) was much longer than that of thiamphenicol ( P < 0105) and showed concentration dependent1The sensitivity test for combination of florfenicol with doxycycline was conducted by“Chess- board”method1 The results il2 lustrated that the combinations were indifferent to E1 coli and fractional inhibitory concentration ( FICs) was 115 ,that is to say ,MICs of these combinations were 2 times lower than those of florfenicol alone1The PAEs of the combinations were little longer than those of singles against the same organism ,and they illustrated indifference1Following treatment with three doses of florfenicol (10 mg·kg - 1 and 20 mg·kg - 1 via intramuscular ,30 mg·kg - 1 via oral ) or two doses com2 binations (10 mg·kg - 1 florfenicol plus 20 mg·kg - 1 doxycycline or 20 mg·kg - 1 florfenicol plus 40 mg·kg - 1 doxycy2 cline by oral ) ,the curative rates against E1coli were 7313 % ,7617 % ,7313 % ,7617 % and 8010 % ,respectively ,and the mortality of infected control group was 8010 %1 Key words :Florfenicol ; combinations ; colibacillosis ; treatment
第 39 卷 第 1 期 2005 年 3 月
河南农业大学学报 Journal of Henan AgricultuMar. 2005
文章编号 :1000 - 2340 (2005) 01 - 0093 - 05
氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆 菌病的治疗效果
Treament Efficacy of Florfenicol and its Combinations Against E1 coli in Chickens
YUAN Li1 ,HU Gong-zheng1 ,LIU Zhi-ming2 ,WANG Sheng-yun1 ,LIANG J un1 , YANG Yu- rong1 (11Engineering College of Animal Husbandry and Veterinary Science ,Henan Agricultural University , Zhengzhou 450002 ,China ;21Animal Husbandry Bureau of Henan Province ,Zhengzhou 450002 ,China)
111 材料 11111 药品 氟苯尼考原粉 :浙江台洲海翔医药化工有限公司生产 ,氯霉素原粉 :东北制药厂生产 ,甲砜 霉素原粉 :山东省明发制药有限公司生产 ,盐酸多西环素 :开封制药厂生产. 11112 试剂 营养肉汤液体培养基及麦康凯营养琼脂均购自杭州天和微生物试剂有限公司 ;2 ,5-二甲基 甲酰胺 、氯化钠 、质量分数为 95 %的乙醇均为国产分析纯试剂. 11113 仪器 PYX-DHX-型隔水式恒温培养箱 、DW- CJ- IC 型超净工作台 、电热恒温水箱 、手提式压力蒸汽 灭菌器 、电子天平 、可调微量移液器 (10～50μL ,200～1 000μL) 等. 11114 试验动物 500 只 1 日龄刚出壳的罗曼仔鸡 ,购自郑州牧业工程高等专科学校孵化厂 ,全封闭箱式 隔离饲养 ,定期常规消毒 ,饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料 ,自由采食和饮水 ,预饲至 8 日龄进入正式试 验. 112 方法 11211 体外抑菌试验 无菌准确称取一定量药物 ,配制成质量浓度为1 280 mg·L - 1的贮存液 ,采用试管两 倍稀释法测定最小抑菌浓度[14] (MIC) ,鸡大肠杆菌菌悬液浓度为 105 CFU·mL - 1 . 以培养 18～24 h 后能抑 制细菌生长的最小药物浓度为 MIC ,继续培养到 48 h 并将能抑制细菌生长最小药物浓度的前后两管接种 普通平板 ,以菌落数 ≤5 个的最小药物浓度为最小杀菌浓度 (MBC) ,相同过程重复 3 次 ,求平均值. 11212 联合药敏试验 采用棋盘法[14] ,鸡大肠杆菌菌悬液用预温的营养肉汤稀释至 106 CFU·mL - 1. 阳性 对照 :取菌悬液 012 mL 加至 118 mL 营养肉汤中 ;试验组 : (1) 单独用药组 :将各质量浓度药物 (215 ,5 ,10 , 20 ,40 MIC) 012 mL 加至 116 mL 营养肉汤中 ,再加入菌悬液 012 mL ; (2) 联合用药组 :分别将 2 种药物 012 mL 分别加至 114 mL 营养肉汤中 ,再加入菌悬液 012 mL. 结果使各管中的药物最终质量浓度分别为 0125 , 015 ,1 ,2 ,4 MIC ,受试菌悬液浓度为 105 CFU·mL - 1. 相同过程重复 3 次. 试验结果以部分抑菌浓度 ( FIC) 指 数作为联合药敏试验的判断依据[15] . 11213 体外 PAE 测定 分别取 20 ,40 ,80 MIC 质量浓度的药液各 012 mL 与 118 mL 浊度为 107～108CFU· mL - 1对数生长期的菌悬液置 3 支试管中 ,此为试验管 ,同时设 2 个对照管 (分别为 012 mL 无菌生理盐水和 118 mL 菌悬液) ,各管混匀后置 37 ℃恒温水浴中培养 2 h. 再取上述各试验管药物 (细菌混合物) 及 2 个对 照管中的液体 ,用 37 ℃预温的营养肉汤1 000倍稀释除药 ,并在 1 个对照管中加入一定量的药物 ,使其中的 药物浓度相当于 8 MIC 试验管中被1 000倍稀释后的药物浓度 ,作为非残留药物造成 PAE 的对照. 以上各 管混匀后立即置 37 ℃恒温水浴中孵育 ,计为重建后零时. 于重建后 0 ,1 ,2 ,3 ,4 ,5 ,6 h 分别取菌液 011 mL 进 行细菌计数 (重复 3 次求均值) . 以各时间点 CFU·mL - 1值的常用对数 (lg) 为纵轴 ,以孵育时间 (h) 为横轴建 立对照管或试验管重建后恢复生长的动力学曲线 ,并计算出 T , C , 按公式抗菌效应 = T - C 计算 , 其中 , T , C 分别为试验管或对照管 CFU·mL - 1值高于重建后零时 10 倍 (1 lg CFU·mL - 1) 所需时间 (h) .
分别测定氟苯尼考 、多西环素及氟苯尼考与多西环素联合 (质量比为 1∶2) 后各相应质量浓度的 PAE , 联合用药的 PAE 值比两药单用 PAE 之和延长 1 h 以上为协同 ,相近为相加 ,与单药 PAE 的较大值相近为 无关 ,比单药 PAE 的较小值还小为拮抗[16] . 11214 疾病模型的复制 1121411 菌种及其特性检查 菌种为鸡大肠杆菌 O78标准株 (购自中国兽药监察所) ,取冻干标准毒株 ,无 菌操作启封后接种于麦康凯琼脂平板 ,37 ℃培养 18～24 h 后 ,菌落形态为紫红色 、直径为 1 mm 左右圆形 菌落 ,触片染色后镜检为小的杆状 G- 细菌.
收稿日期 :2004 - 06 - 22 作者简介 :苑 丽 (1973 - ) ,女 ,河南获嘉人 ,讲师 ,硕士 ,从事动物抗菌药药效学研究.
94
河 南 农 业 大 学 学 报
第 39 卷
氟苯尼考是一种化学合成的氯霉素类动物专用的新型广谱抗菌药 ,1990 年首次在日本上市 ,中国也 于 1999 年批准上市 ,主要用于治疗由敏感菌引起的猪 、鸡和鱼的细菌性疾病[1] . 目前 ,国内外对该药单独 使用的药动学[2～6]和药效学[7～13]的研究较多 ,但该药与多西环素联合对试验性鸡大肠杆菌病的治疗效果 尚未见有研究报道. 本试验在测定氟苯尼考单独及其与多西环素联合对鸡大肠杆菌体外抗菌活性 、抗菌后 效应 ( PAE) 的基础上 ,观察了氟苯尼考及其与多西环素联合时不同给药途径对鸡大肠杆菌病的治疗效果 , 以期为该药复方制剂及其在禽病防治上的合理使用提供科学依据.
苑 丽1 ,胡功政1 ,刘智明2 ,王升运1 ,梁 军1 ,杨玉荣1
(1. 河南农业大学牧医工程学院 ,河南 郑州 450002 ;2. 河南省畜牧局 ,河南 郑州 450002)
摘要 :研究了氟苯尼考单药及与多西环素联合对鸡大肠杆菌的抗菌活性 、抗菌后效应 ( PAE) 及对试验性鸡大肠杆菌病的治 疗效果. 结果表明 :氟苯尼考对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度 (MIC) 为 116 mg·L - 1 ,与氯霉素相同 ,是甲砜霉素的 215 % ;氟苯 尼考对鸡大肠杆菌的 PAE(1145～2107 h) 显著长于甲砜霉素 ( P < 0105) ,呈浓度依赖性. 棋盘法测得氟苯尼考与多西环素联 合对鸡大肠杆菌呈无关作用 ,部分抑菌浓度 (FIC) 指数值为 115 ,联合时的氟苯尼考 MIC 值是其单独时 50 %. 氟苯尼考以 1∶2 (质量比) 与多西环素联合时 ,对鸡大肠杆菌的 PAE 与单药 PAE 的较大值相近 ,与相应浓度的单药相比均表现为无相关作 用. 氟苯尼考 3 种剂量 (10 mg·kg - 1和 20 mg·kg- 1 (肌注) 、30 mg·kg - 1 (口服) ) 、或联合用药 (氟苯尼考 10 mg·kg - 1 + 多西环素 20 mg·kg- 1 、氟苯尼考 20 mg·kg- 1 + 多西环素 40 mg·kg - 1 (口服) ) 5 种治疗方案 ,对鸡大肠杆菌病的治愈率分别为 7313 % , 7617 % ,7313 % ,7617 % ,8010 % ,感染对照组的死亡率为 8010 %. 关键词 :氟苯尼考 ;联合用药 ;鸡大肠杆菌病 ;治疗 中图分类号 :S 859179 文献标识码 :A
Abstract : A study was conducted on the antibacterial activity ,post-antibiotic effect and efficacy of florfenicol and its combination with doxycycline against the experimental infection of chickens with E1 coli1The results revealed that the minimal inhibitory concentrations (MICs) of flofenicol against E1 coli were 116 mg·L - 1 ,equal to that of chlorampheni2 col and 215 % of thiamphenicol1The results also demonstrated that PAEs duration induced by florfenicol against E1 coli (1145～2107 h) was much longer than that of thiamphenicol ( P < 0105) and showed concentration dependent1The sensitivity test for combination of florfenicol with doxycycline was conducted by“Chess- board”method1 The results il2 lustrated that the combinations were indifferent to E1 coli and fractional inhibitory concentration ( FICs) was 115 ,that is to say ,MICs of these combinations were 2 times lower than those of florfenicol alone1The PAEs of the combinations were little longer than those of singles against the same organism ,and they illustrated indifference1Following treatment with three doses of florfenicol (10 mg·kg - 1 and 20 mg·kg - 1 via intramuscular ,30 mg·kg - 1 via oral ) or two doses com2 binations (10 mg·kg - 1 florfenicol plus 20 mg·kg - 1 doxycycline or 20 mg·kg - 1 florfenicol plus 40 mg·kg - 1 doxycy2 cline by oral ) ,the curative rates against E1coli were 7313 % ,7617 % ,7313 % ,7617 % and 8010 % ,respectively ,and the mortality of infected control group was 8010 %1 Key words :Florfenicol ; combinations ; colibacillosis ; treatment
第 39 卷 第 1 期 2005 年 3 月
河南农业大学学报 Journal of Henan AgricultuMar. 2005
文章编号 :1000 - 2340 (2005) 01 - 0093 - 05
氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆 菌病的治疗效果
Treament Efficacy of Florfenicol and its Combinations Against E1 coli in Chickens
YUAN Li1 ,HU Gong-zheng1 ,LIU Zhi-ming2 ,WANG Sheng-yun1 ,LIANG J un1 , YANG Yu- rong1 (11Engineering College of Animal Husbandry and Veterinary Science ,Henan Agricultural University , Zhengzhou 450002 ,China ;21Animal Husbandry Bureau of Henan Province ,Zhengzhou 450002 ,China)