透射电镜的样品制备技术
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在光镜下选出所需观察的部位,在玻片反面用 笔做好标记.前固定、漂洗、后固定,脱水及浸 透同常规包埋方法,但各步骤时间可适当缩短. 在玻片有标记处的正面位置滴上包埋剂,将顶端
平整的废包埋块压在其上,于60 ℃聚合硬化.将 粘有包埋块的玻片置于90 ℃热板上加温10s,取
下包埋块修块,超薄切片及电子染色.
构不清
超薄切片质量好坏指标
• 样品结构保存良好,结构细腻,无丢失. • 切片厚薄均匀,厚度在60-90nm之间.表面无
皱折、刀痕、震颤等缺陷. • 样品反差良好,无染色沉淀. • 支持膜厚度适中,观察时不产生漂移和破裂.
六.电子染色
• 利用重金属盐类选择性地与生物样品中不同 结构成分相结合,来提高结构成分散射电子的 能力,从而增加图像反差的染色,又称为正染
Fig. 4. Colloidal gold nanoparticles 20 nm. 1: anti-TTX Mab labelled colloidal gold nanoparticles showing the protein halo around the labelled nanoparticles, 2: unlabelled colloidal gold nanoparticles.
• 多用于解剖关系比较复杂、质地柔软或对 缺氧比较敏感的组织.以保证器官的血液供 给,避免缺血造成的组织损伤或自溶.
• 操作步骤 在动物麻醉后保持血液供应的条件下,
边解剖边在取材的部位局部滴加固定液,直 至组织达到适当的硬度为宜.
灌流固定法
• 指通过血液循环途径,将固定液灌注 到组织器官内,进行固定后再取材的方法. 常用于对缺氧敏感,死后变化快的组织器 官,如中枢神经系统、心脏、胃肠道、视 网膜和肾脏等.也可用于所取组织的种类 较多以及解剖关系比较复杂、难以渗透 的组织器官.
体外培养细胞的固定
• 单层细胞固定 • 悬浮细胞固定
加入融化的2%琼脂或BSA增加粘附性. 离心.
三.脱 水
• 目的
–将组织内部游离的水分脱净,有利于 浸透和包埋
• 常用脱水剂
–乙醇:使组织收缩较小,但与包埋剂的互溶
性差
–丙酮:可溶解脂类,与包埋剂的互溶性好,
但易使组织变脆
脱水步骤
• 从低浓度至高浓度系列脱水
❖染色剂
磷钨酸PTA pH 6.7-7
❖染色步骤
复膜载网－滴样品-滴染1-2min－用滤纸 吸去染液－观察
❖优点
适用于悬浮液的样品细菌、病毒、其他微 生物、大分子、分离细胞器
操作快速、简便 样品用量少 图像结构反差好
小结：超薄切片 1.取材:要求部位准确,块小,时间短,低温,器械锋利, 减小机械损伤. 2.固定:戊二醛固定时间可以适当延长,一般不要超过 一周,期间要更换一次固定液,且要保持低温固定,充 分清洗后再进行锇酸固定1-2小时,时间一定不要太长. 3.脱水:锇酸固定后经过充分清洗,进行酒精梯度脱水, 一般50%,70%,80%,95%,无水酒精, 4.样品侵透,包埋.一定要保持干燥,侵透彻底. 5.聚合:由室温到高温梯度升温聚合.如35度,45度,60 度顺序. 6.超薄切片:切片机性能,片厚度,捞片,载网质量都需 要注意. 7.电子染色:过程中一定要避免一切污染.
–50% 酒精 4℃ 10～15min –70% 酒精 4℃ 10～15min或过夜 –80% 酒精 室温 10～15min –90% 酒精 室温 10～15min –95% 酒精 室温 10～15min –95%酒精：95%丙酮1：1室温 10～15min –95%丙酮 室温 10～15min –无水丙酮 室温 40min 中间换一次
锇酸Osmium tetroxide OsＯ4
• 淡黄色块状结晶,使用浓度1～4％,使 用温度4℃.
• 优点 –对蛋白质和脂类有较好的固定作用 –可避免组织块收缩或膨胀 –可产生明显的反差
锇酸Osmium tetroxide OsＯ4
• 缺点 –分子量大,穿透能力差 –对碳水化合物和酶固定效果不好 –固定时间较长易引起组织变脆 –有强烈的刺激味对角膜、鼻粘膜有毒性作用 –光热作用时易发生变化
常用固定剂
• 戊二醛Glutaraldehyde,GA
–无 色 透 明 液 体 ,pH=4, 使 用 浓 度 为 2.5 ～ 4 ％ , 使用温度4℃.
– 优点
• 穿透能力强 • 能较好地保存蛋白质、碳水化合物的结构及酶的
活性 • 固定保存时间长4℃可达数周至数月
– 缺点
• 组织反差不好 • 对脂类无固定作用 • 固定后标本要充分冲洗
• 1、组织块：前固定后用振动切片机切成50100μm的厚片,显微镜下选出含有所需结构的 厚片进行漂洗.经过1%锇酸后固定,乙醇及丙酮 系列脱水,环氧树脂浸透,把厚片铺于载玻片上, 将顶端平整的废包埋块安在切片的特定部位
上,60 ℃聚合后修块,常规切片及染色.
• 2 、切片及单层培养细胞需要在玻片上进行：
二.固定
• 目的
–尽可能保存组织和细胞在生活状态下的结构 –使细胞内的各种成分固定下来,避免在以后
的冲洗和脱水等步骤中溶解和流失 –防止细胞内酶活性造成的细胞自溶 –防止外界微生物侵入繁殖而产生腐败致使细
胞的超微结构遭受破坏
• 方法
–物理方法 •快速冷冻法 •干燥法
–化学方法 •浸泡固定法 •原位固定法 •灌流固定法
透射电镜的生物 样品制备技术
分为两类： • 透射电镜样品的基本制备技术
–超薄切片技术 –负染技术 • 生物样品特殊制样技术
超薄切片技术
• 概念:
指制备厚度低于100nm的切片技术.
• 特点：
• 是透射电镜生物样品制备技术中最 常见、最基本的技术；
• 是其他技术方法的基础； • 程序长、操作较复杂、精细.
包埋剂配方K4M
K4M单体
8.65g
交联剂
1.35g
引发剂
50mg
LR white:
为混合的丙烯酸单体,对脂类溶解 度低,保存膜结构较好,可耐受电子束轰 击,因而可不做支持膜.热聚合60 ℃；冷 聚合-25 ℃ ,加速剂协助聚合.
包埋方法
1.常规包埋方法 适用于大多数组织块及细胞团
• 浸透
–环氧丙烷 室温 20min
• 包括全身灌流固定法适用于小动物 和器官灌流固定法适用于大动物.
• 操作步骤以全身灌流固定法为例
麻醉要进行灌流的动物,将动 物固定于实验台上,打开胸腔暴露 心脏,将针头刺入左心室,剪开右心 耳以引出血液和灌流液.用注射器 或输液器缓慢注入37 ℃、 0.9%NaCl,直至内脏血色消失或流 出液无血色为止,注入4 ℃固定液, 待组织变硬后取材.
常用的包埋剂
具有低黏度、亲和性强和优良的切割性能, 切片透明度高,组织结构保存好,并能耐受电 子束的轰击及在低温下聚合的特点.
• 环氧树脂Epon812进口 渗入组织容易,对细胞结构保存好,较常 用.
• 丙烯酸酯acrylic resin 618国产
Lowcryl K4M：
为低温水溶性包埋剂,较常用.特点是低温下-35 ℃可保 持低黏度；在紫外光波长360nm下可聚合.聚合后可在常温 下切片；能较好地保持组织结构和抗原性及植物凝血素结合 部位,减少背景非特异性染色,故多用于免疫细胞化学的包埋 后染色.
• 超薄切片:采用超薄切片机
–操作步骤: •包埋块固定 •刀固定 •水槽加水 •切片 •选片 •捞片
切片带弯曲可能原因及解决办法
可能原因 梯形或矩形组织面上下边不平行 刀刃锋利程度不一 组织面上边或下边与刀刃不平行
解决办法 用双面刀片重新休整组织切面使之平行 更换新玻璃刀 重新调整组织与刀刃距离,使之平行
是将所取样品直接放入预冷固定液内固定
的方法,适用于大多数组织器官.最常用的是戊 二醛、锇酸双重固定.
操作步骤:
前固定： 2.5%-4%戊二醛 4℃ 1-2h或数月
漂洗：用配固定液的缓冲液 4℃ 2-4h 中间换3次
后固定：1%锇酸 4℃ 1.5-2h培养细胞 30min
漂洗： 蒸馏水
4℃
10min
原位固定法
Food Chemistry
生物医学样品的特点：
1、样品多样化,包括组织、细胞、微生物及生 物大分子.
2、含水量多、质地软、脱水时容易皱缩变形. 3、机械程度低,对电子束轰击的耐受力差. 4、多由低原子序数的元素组成,故导电性能差. 5、样品形态对试剂的PH值及温度较敏感
主要步骤
• 取材 • 固定 • 脱水 • 浸透及包埋 • 切片 • 染色
–环氧丙烷:包埋剂 1:1 室温 40-60min
–包埋剂
室温
3h
• 包埋
–将样品放入包埋板或胶囊内
–放好标签
–充填满包埋剂
• 聚合使包埋剂变硬
35 ℃ 12h
45 ℃ 12h
55 ℃ 12h
2.原位包埋法
适用于组织块中数量少的特殊结构,如：运 动终板；冷冻切片、半薄切片及单层培养细胞 的某些结构的观察.
注意事项 负染
样品浓度要适中 样品要不含杂质 样品的pH值要与染液pH值一致 掌握滴染时机样品要未完全干燥时 负染样品观察时,加速电压要适当,物镜光 阑要小,反差较好,照相要快.
Fig. 1. The labelling results of colloidal gold probe. A: colloidal gold, B: labeled colloidal gold showing the protein halo around the labeled particles.
色.
• 常用的染色剂: –0.5％～１％醋酸双氧铀
• 可使核酸、蛋白质、结缔组织纤维的反差增强.
–0.1％～0.4％柠檬酸铅
• 可使膜结构、脂类的反差增强.
❖正染色
❖TEM样品：
①超薄切片厚度要均匀 ②无震颤 ③无刀痕 ④无染色污染 ⑤反差适当
负染技术
• 指利用重金属盐类与结构背景 相结合,增加背景电子散射能力, 使背景呈黑色,样品度小于100nm的切片 • 准备工作:
1.复膜载网
• 支持膜 –formvar膜 –火棉胶膜 –碳膜 用于负染技术
• 支持网 –铜网 常用 –不锈钢网、镍网、铂网组化用
2.制刀
3.修块
–目的是去除组织块周围多余的包埋介 质,便于切片.
• 半薄切片:
–目的是确定所要观察的准确部位,厚度 为0.5～1μm,用甲苯胺兰染色显示.
多聚甲醛Paraformaldehyde
• 白色粉末,使用浓度为4％ • 优点
–对组织的浸透力强 –保存抗原性物质,多用于免疫电镜技
术中 • 缺点
–高浓度时可使组织结构流失,多不单 独使用
常用缓冲液
• 用于配制固定液和漂洗
0.2M磷酸盐缓冲液:较常用 0.2M二甲砷酸盐缓冲液:用于电镜细胞化学
浸泡固定法
四.浸透及包埋
• 浸透：目的是使包埋剂逐渐取代脱水剂
渗透到组织细胞中.因包埋剂与脱水剂不 相溶,需用一种既能与脱水剂相溶,又能与 包埋剂相溶的物质进行转换,常用的转换 剂为环氧丙烷.
• 包埋：目的是让包埋剂完全浸透到组织
细胞内部,使组织具有一定的硬度、弹性 和韧性,能够承受切片时的各种压力,以便 制备超薄切片.
一.取材
• 从人体、动植物、细胞和微生物的培养物中 选取电镜观察材料的过程.
• 在活体取材时要做到：
•快─离体1～2min内放入固定液
•准─取材部位要准,有代表性
•小─1mm×1mm×1mm大小,太小时结构少, 太大时固定不充分结构保存不好
•轻─动作要轻,器械要锋利
•冷─0℃ ～ 4℃ ,器械、容器、固定液 均需预冷
支持膜的制作
支持膜是一种能支持观察样品的膜,厚度约 20nm.性能良好的支持膜应具备： 1.较高的透明度 2.在电镜下无可见结构 3.与所支持的各种样品不发生化学反应
方华膜、碳膜、火棉胶基底碳膜、硝化纤维素基底碳膜、微筛膜等
支持膜的制作
方华膜方华的化 学成分是聚乙烯 醇缩甲醛,为淡黄 色粉末：准备-附 膜-漂膜-捞膜
支持膜的制作
碳膜：观察高分 辨率的样品及某 些悬浮液对方华 膜有溶解作用时 需用碳膜.碳膜的 机械性能及化学 性能较好,减少热 漂移.喷膜-漂膜 摆网-捞膜
• 切片的厚度可根据干涉色来判断.
–暗灰色调 40nm –灰色 40-50nm,较薄,易被电子
束击破 –银白色 60-70nm,最常用 –金黄色 70-80nm –紫色为 90nm以上,较厚,细节结
平整的废包埋块压在其上,于60 ℃聚合硬化.将 粘有包埋块的玻片置于90 ℃热板上加温10s,取
下包埋块修块,超薄切片及电子染色.
构不清
超薄切片质量好坏指标
• 样品结构保存良好,结构细腻,无丢失. • 切片厚薄均匀,厚度在60-90nm之间.表面无
皱折、刀痕、震颤等缺陷. • 样品反差良好,无染色沉淀. • 支持膜厚度适中,观察时不产生漂移和破裂.
六.电子染色
• 利用重金属盐类选择性地与生物样品中不同 结构成分相结合,来提高结构成分散射电子的 能力,从而增加图像反差的染色,又称为正染
Fig. 4. Colloidal gold nanoparticles 20 nm. 1: anti-TTX Mab labelled colloidal gold nanoparticles showing the protein halo around the labelled nanoparticles, 2: unlabelled colloidal gold nanoparticles.
• 多用于解剖关系比较复杂、质地柔软或对 缺氧比较敏感的组织.以保证器官的血液供 给,避免缺血造成的组织损伤或自溶.
• 操作步骤 在动物麻醉后保持血液供应的条件下,
边解剖边在取材的部位局部滴加固定液,直 至组织达到适当的硬度为宜.
灌流固定法
• 指通过血液循环途径,将固定液灌注 到组织器官内,进行固定后再取材的方法. 常用于对缺氧敏感,死后变化快的组织器 官,如中枢神经系统、心脏、胃肠道、视 网膜和肾脏等.也可用于所取组织的种类 较多以及解剖关系比较复杂、难以渗透 的组织器官.
体外培养细胞的固定
• 单层细胞固定 • 悬浮细胞固定
加入融化的2%琼脂或BSA增加粘附性. 离心.
三.脱 水
• 目的
–将组织内部游离的水分脱净,有利于 浸透和包埋
• 常用脱水剂
–乙醇:使组织收缩较小,但与包埋剂的互溶
性差
–丙酮:可溶解脂类,与包埋剂的互溶性好,
但易使组织变脆
脱水步骤
• 从低浓度至高浓度系列脱水
❖染色剂
磷钨酸PTA pH 6.7-7
❖染色步骤
复膜载网－滴样品-滴染1-2min－用滤纸 吸去染液－观察
❖优点
适用于悬浮液的样品细菌、病毒、其他微 生物、大分子、分离细胞器
操作快速、简便 样品用量少 图像结构反差好
小结：超薄切片 1.取材:要求部位准确,块小,时间短,低温,器械锋利, 减小机械损伤. 2.固定:戊二醛固定时间可以适当延长,一般不要超过 一周,期间要更换一次固定液,且要保持低温固定,充 分清洗后再进行锇酸固定1-2小时,时间一定不要太长. 3.脱水:锇酸固定后经过充分清洗,进行酒精梯度脱水, 一般50%,70%,80%,95%,无水酒精, 4.样品侵透,包埋.一定要保持干燥,侵透彻底. 5.聚合:由室温到高温梯度升温聚合.如35度,45度,60 度顺序. 6.超薄切片:切片机性能,片厚度,捞片,载网质量都需 要注意. 7.电子染色:过程中一定要避免一切污染.
–50% 酒精 4℃ 10～15min –70% 酒精 4℃ 10～15min或过夜 –80% 酒精 室温 10～15min –90% 酒精 室温 10～15min –95% 酒精 室温 10～15min –95%酒精：95%丙酮1：1室温 10～15min –95%丙酮 室温 10～15min –无水丙酮 室温 40min 中间换一次
锇酸Osmium tetroxide OsＯ4
• 淡黄色块状结晶,使用浓度1～4％,使 用温度4℃.
• 优点 –对蛋白质和脂类有较好的固定作用 –可避免组织块收缩或膨胀 –可产生明显的反差
锇酸Osmium tetroxide OsＯ4
• 缺点 –分子量大,穿透能力差 –对碳水化合物和酶固定效果不好 –固定时间较长易引起组织变脆 –有强烈的刺激味对角膜、鼻粘膜有毒性作用 –光热作用时易发生变化
常用固定剂
• 戊二醛Glutaraldehyde,GA
–无 色 透 明 液 体 ,pH=4, 使 用 浓 度 为 2.5 ～ 4 ％ , 使用温度4℃.
– 优点
• 穿透能力强 • 能较好地保存蛋白质、碳水化合物的结构及酶的
活性 • 固定保存时间长4℃可达数周至数月
– 缺点
• 组织反差不好 • 对脂类无固定作用 • 固定后标本要充分冲洗
• 1、组织块：前固定后用振动切片机切成50100μm的厚片,显微镜下选出含有所需结构的 厚片进行漂洗.经过1%锇酸后固定,乙醇及丙酮 系列脱水,环氧树脂浸透,把厚片铺于载玻片上, 将顶端平整的废包埋块安在切片的特定部位
上,60 ℃聚合后修块,常规切片及染色.
• 2 、切片及单层培养细胞需要在玻片上进行：
二.固定
• 目的
–尽可能保存组织和细胞在生活状态下的结构 –使细胞内的各种成分固定下来,避免在以后
的冲洗和脱水等步骤中溶解和流失 –防止细胞内酶活性造成的细胞自溶 –防止外界微生物侵入繁殖而产生腐败致使细
胞的超微结构遭受破坏
• 方法
–物理方法 •快速冷冻法 •干燥法
–化学方法 •浸泡固定法 •原位固定法 •灌流固定法
透射电镜的生物 样品制备技术
分为两类： • 透射电镜样品的基本制备技术
–超薄切片技术 –负染技术 • 生物样品特殊制样技术
超薄切片技术
• 概念:
指制备厚度低于100nm的切片技术.
• 特点：
• 是透射电镜生物样品制备技术中最 常见、最基本的技术；
• 是其他技术方法的基础； • 程序长、操作较复杂、精细.
包埋剂配方K4M
K4M单体
8.65g
交联剂
1.35g
引发剂
50mg
LR white:
为混合的丙烯酸单体,对脂类溶解 度低,保存膜结构较好,可耐受电子束轰 击,因而可不做支持膜.热聚合60 ℃；冷 聚合-25 ℃ ,加速剂协助聚合.
包埋方法
1.常规包埋方法 适用于大多数组织块及细胞团
• 浸透
–环氧丙烷 室温 20min
• 包括全身灌流固定法适用于小动物 和器官灌流固定法适用于大动物.
• 操作步骤以全身灌流固定法为例
麻醉要进行灌流的动物,将动 物固定于实验台上,打开胸腔暴露 心脏,将针头刺入左心室,剪开右心 耳以引出血液和灌流液.用注射器 或输液器缓慢注入37 ℃、 0.9%NaCl,直至内脏血色消失或流 出液无血色为止,注入4 ℃固定液, 待组织变硬后取材.
常用的包埋剂
具有低黏度、亲和性强和优良的切割性能, 切片透明度高,组织结构保存好,并能耐受电 子束的轰击及在低温下聚合的特点.
• 环氧树脂Epon812进口 渗入组织容易,对细胞结构保存好,较常 用.
• 丙烯酸酯acrylic resin 618国产
Lowcryl K4M：
为低温水溶性包埋剂,较常用.特点是低温下-35 ℃可保 持低黏度；在紫外光波长360nm下可聚合.聚合后可在常温 下切片；能较好地保持组织结构和抗原性及植物凝血素结合 部位,减少背景非特异性染色,故多用于免疫细胞化学的包埋 后染色.
• 超薄切片:采用超薄切片机
–操作步骤: •包埋块固定 •刀固定 •水槽加水 •切片 •选片 •捞片
切片带弯曲可能原因及解决办法
可能原因 梯形或矩形组织面上下边不平行 刀刃锋利程度不一 组织面上边或下边与刀刃不平行
解决办法 用双面刀片重新休整组织切面使之平行 更换新玻璃刀 重新调整组织与刀刃距离,使之平行
是将所取样品直接放入预冷固定液内固定
的方法,适用于大多数组织器官.最常用的是戊 二醛、锇酸双重固定.
操作步骤:
前固定： 2.5%-4%戊二醛 4℃ 1-2h或数月
漂洗：用配固定液的缓冲液 4℃ 2-4h 中间换3次
后固定：1%锇酸 4℃ 1.5-2h培养细胞 30min
漂洗： 蒸馏水
4℃
10min
原位固定法
Food Chemistry
生物医学样品的特点：
1、样品多样化,包括组织、细胞、微生物及生 物大分子.
2、含水量多、质地软、脱水时容易皱缩变形. 3、机械程度低,对电子束轰击的耐受力差. 4、多由低原子序数的元素组成,故导电性能差. 5、样品形态对试剂的PH值及温度较敏感
主要步骤
• 取材 • 固定 • 脱水 • 浸透及包埋 • 切片 • 染色
–环氧丙烷:包埋剂 1:1 室温 40-60min
–包埋剂
室温
3h
• 包埋
–将样品放入包埋板或胶囊内
–放好标签
–充填满包埋剂
• 聚合使包埋剂变硬
35 ℃ 12h
45 ℃ 12h
55 ℃ 12h
2.原位包埋法
适用于组织块中数量少的特殊结构,如：运 动终板；冷冻切片、半薄切片及单层培养细胞 的某些结构的观察.
注意事项 负染
样品浓度要适中 样品要不含杂质 样品的pH值要与染液pH值一致 掌握滴染时机样品要未完全干燥时 负染样品观察时,加速电压要适当,物镜光 阑要小,反差较好,照相要快.
Fig. 1. The labelling results of colloidal gold probe. A: colloidal gold, B: labeled colloidal gold showing the protein halo around the labeled particles.
色.
• 常用的染色剂: –0.5％～１％醋酸双氧铀
• 可使核酸、蛋白质、结缔组织纤维的反差增强.
–0.1％～0.4％柠檬酸铅
• 可使膜结构、脂类的反差增强.
❖正染色
❖TEM样品：
①超薄切片厚度要均匀 ②无震颤 ③无刀痕 ④无染色污染 ⑤反差适当
负染技术
• 指利用重金属盐类与结构背景 相结合,增加背景电子散射能力, 使背景呈黑色,样品度小于100nm的切片 • 准备工作:
1.复膜载网
• 支持膜 –formvar膜 –火棉胶膜 –碳膜 用于负染技术
• 支持网 –铜网 常用 –不锈钢网、镍网、铂网组化用
2.制刀
3.修块
–目的是去除组织块周围多余的包埋介 质,便于切片.
• 半薄切片:
–目的是确定所要观察的准确部位,厚度 为0.5～1μm,用甲苯胺兰染色显示.
多聚甲醛Paraformaldehyde
• 白色粉末,使用浓度为4％ • 优点
–对组织的浸透力强 –保存抗原性物质,多用于免疫电镜技
术中 • 缺点
–高浓度时可使组织结构流失,多不单 独使用
常用缓冲液
• 用于配制固定液和漂洗
0.2M磷酸盐缓冲液:较常用 0.2M二甲砷酸盐缓冲液:用于电镜细胞化学
浸泡固定法
四.浸透及包埋
• 浸透：目的是使包埋剂逐渐取代脱水剂
渗透到组织细胞中.因包埋剂与脱水剂不 相溶,需用一种既能与脱水剂相溶,又能与 包埋剂相溶的物质进行转换,常用的转换 剂为环氧丙烷.
• 包埋：目的是让包埋剂完全浸透到组织
细胞内部,使组织具有一定的硬度、弹性 和韧性,能够承受切片时的各种压力,以便 制备超薄切片.
一.取材
• 从人体、动植物、细胞和微生物的培养物中 选取电镜观察材料的过程.
• 在活体取材时要做到：
•快─离体1～2min内放入固定液
•准─取材部位要准,有代表性
•小─1mm×1mm×1mm大小,太小时结构少, 太大时固定不充分结构保存不好
•轻─动作要轻,器械要锋利
•冷─0℃ ～ 4℃ ,器械、容器、固定液 均需预冷
支持膜的制作
支持膜是一种能支持观察样品的膜,厚度约 20nm.性能良好的支持膜应具备： 1.较高的透明度 2.在电镜下无可见结构 3.与所支持的各种样品不发生化学反应
方华膜、碳膜、火棉胶基底碳膜、硝化纤维素基底碳膜、微筛膜等
支持膜的制作
方华膜方华的化 学成分是聚乙烯 醇缩甲醛,为淡黄 色粉末：准备-附 膜-漂膜-捞膜
支持膜的制作
碳膜：观察高分 辨率的样品及某 些悬浮液对方华 膜有溶解作用时 需用碳膜.碳膜的 机械性能及化学 性能较好,减少热 漂移.喷膜-漂膜 摆网-捞膜
• 切片的厚度可根据干涉色来判断.
–暗灰色调 40nm –灰色 40-50nm,较薄,易被电子
束击破 –银白色 60-70nm,最常用 –金黄色 70-80nm –紫色为 90nm以上,较厚,细节结