酶底物法检测水中菌落总数的效果评价

致。

流感以低年龄段和高年龄段发病例数较多。

手足口病以0~10岁儿童发病例数较多。

今后应把上述人群作为重点人群来开展工作。

时间分布情况，不同传染病发病季节不同。

发病率第一位的流感主要集中在11月到1月发病，第二位的其他传染性腹泻主要集中在6月到8月，手足口病主要集中在4月到8月。

我们应当根据东城区主要传染病的时间分布情况有针对性地做好宣传预防。

地区分布上主要以人口底数大的街道传染病
发病例数较多，人口底数较少的前门、安定门等街道发病例数较少。

东城区流感和手足口病发病率较高。

而流感疫苗和手足口病的预防可以通过大力开展疫苗接种来进行有效预防。

手足口病疫苗是自费接种疫苗，由于经济水平和家长认知等因素，对儿童手足口病疫苗接种有影响。

针对东城区前3位传染病发病的流行病学分
析，建议如下：①做好儿童免疫接种工作，
尤其是自费疫苗重要性的宣传，提高适龄儿童手足口病、水痘等自费疫苗的接种率。

②托幼机构、
学校和餐饮场所是各类传染病聚集性疫情和暴发的主要发生
场所［3］。

针对这些主要场所大力开展呼吸道和消化
道传染病健康教育工作，
增强传染病防治知识。

③积极联系校医、园医严格落实学校、
托幼机构室内通风换气、消毒隔离、晨午捡、缺课追踪等防控措施。

④加大流感疫苗接种宣传工作，
积极和街道、社区、学校联动。

在自愿的基础上做到应种尽种。

参考文献
［1］王子军.我国1990—2000年传染病流行态势［J ］.中华流行
病学杂志，2002，23（4）：312⁃313.
［2］王鲁茜，
王靓洁，王秀云，等.2005—2017年北京市昌平区法定报告传染病流行特征分析［J ］.疾病监测，2019，34（7）：645⁃659.
［3］高建华，黄若刚.2004—2012年北京市其他感染性腹泻流行
特征分析［J ］.疾病监测，2013，28（7）：549⁃552.（收稿日期：2020⁃01⁃15）
DOI ：10.3969/j.issn.0253⁃9926.2020.12.007
作者单位：030012太原市疾病预防控制中心检验科
酶底物法检测水中菌落总数的效果评价
张晓华高瑞红
王骥涛
高
丽王波
郭晓芳
孙燕妮
水是人类生活中必不可少的，
水质的好坏对人们的健康有直接影响，水中的菌落总数与水体有机污染程度呈正相关，因此菌总落数常作为评价水体
污染程度的一个重要指标。

目前，
我国生活饮用水和水源水的菌落总数检验方法是平皿倾注法。

该检测方法的结果极易受到其培养基配制水平的影响。

美国和欧洲大部分国家都采用了一种新型的
技术——
—酶底物法来对饮用水进行菌落总数的检测，并通过美国环境保护署（EPA ）
认证［1］。

本研究将这两种方法进行比较以了解酶底物法在检测水
中菌落总数中的应用效果。

1
材料和方法
2019年7-8月采集了我市小店区、
晋源区、清徐县一些村镇水源水40份作为研究对象，分别采用平皿法和酶底物法进行检测。

1.1
方法原理
酶底物法的培养基中含有多种独特的酶基质，
每一种都针对不同的细菌酶设计，
包含了所有最普遍的介水传播的细菌。

水样中存在的细菌能够分解一种或者多种酶基质并在紫外光下产生相同的
荧光信号。

1.2
培养基及材料
①复合酶底物培养基；②无菌蒸馏水；③无菌
0.9%氯化钠注射液；④营养琼脂；⑤培养盘：
含有84个孔槽；⑥培养箱：（36±1）℃；⑦紫外灯：6W ，365nm ；⑧无菌平皿（
直径9cm ）、无菌刻度吸管、无菌采样袋等。

1.3
检测方法1.3.1样品的处理：
使用无菌采样袋直接采集，采样时不得用水样涮洗已无菌的采样袋，
并避免手指或其他物品对袋口的沾污。

采样量为500mL ，每125mL 水样加入0.1mg 硫代硫酸钠去除残余余
氯。

采集后的水样应4℃冷藏保存，尽快运回实验室，4h之内进行测定。

实验环境选择在洁净室内进行，洁净室温度25℃，相对湿度30%
1.3.2检测步骤：若取得的原始水样污染严重，可进行梯度稀释，以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL无菌纯水的试管中，混匀成1∶10稀释液。

按同法依次稀释成1∶100，1000，1∶10000稀释液等备用。

①平皿计数法：用无菌吸管取未稀释水样和2~3个适宜稀释度水样1mL，分别注入无菌平皿内，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

每个待测水样均需做1个平行接种，并同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

待冷却凝固后，倒置平皿于（36±1）℃培养箱内培养48h，进行菌落计数［2］。

②酶底物法：向无菌试管中加入0.1g复合酶底物培养基粉末，用无菌吸管吸取9mL无菌纯水至试管中，混摇均匀使之完全溶解。

用无菌吸管取适宜稀释度水样1mL加入上述试管中，涡旋震荡混匀。

将混匀后的水样分别倒入培养盘中。

同时将一个不加水样的液体复合酶底物培养基倒入培养盘作为空白对照。

将培养盘盖好，放置在水平桌面上，紧贴桌面顺时针轻柔晃动培养盘，将待测水样分配到培养盘全部84个样品孔中。

倒置放于（36±
1）℃培养箱中，培养48h，进行菌落计数。

1.3.3结果判读：①平皿计数法：依据《生活饮用水标准检验方法微生物指标》（GB/T5750.12—2006）［3］中“1.1.7不同稀释度的选择及报告方法”进行菌落计数。

②酶底物法：将培养盘盖打开，用6W、365 nm紫外灯距离培养盘12.7cm照射，记录有荧光的孔数，无论培养盘孔荧光强弱均需记录，并对照最可能数（MPN）表得出菌落数，再乘以稀释倍数。

空白对照的培养盘孔不得有荧光。

1.4统计学方法
将平皿计数法与酶底物法的菌落计数结果进行对数转换（log），利用统计学分析软件（SPSS）对转换后的2组数据进行配对t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果
结果显示，酶底物法与平皿计数法的检测结果无差异（P=0.251）。

平皿计数法与酶底物法检测结果具有相关性（r=0.944），酶底物法和平皿计数法在进行菌落总数检测时具有等效性。

见表1。

表1平皿计数法和酶底物法商落计数结果CFU/ml 方法x±s P0P25P50P75P100
平皿计数法18501±6604972168954800408000
酶底物法10387±2230126166680531090000合计14444±4915171967244135408000
3讨论
目前我国生活饮用水和水源水的检测执行的是《生活饮用水标准检验方法微生物指标》（GB/
T5750.12—2006），菌落总数的测定用平皿计数法，此方法一直沿用至今且存在很多不足，实验前需配置大量培养基，水源水稀释倍数较大，操作步骤比较繁琐，耗时较长，结果读数人为误差较大。

酶底物法是一种新型的运用酶底物技术的检测方法，此法最低检出限为2MPN/mL，在95%的置信区间内，未稀释的水样最高可检测到738 MPN/mL［4］。

最大程度减少稀释的必要，可以较好地弥补传统方法的不足，可有效提高生活饮用水中菌落总数测定的检验效率。

菌落总数酶底物法快速灵敏，操作便捷，结果判读更加明确，底物的特异性不仅可以降低检测结果的假阳性率，而且可以减少平皿倾注法中人为的操作误差，可以采用与总大肠菌群酶底物法检测同样的实验平台等优势，能满足实验室及现场检测水中菌落总数的要求，适合环境应急突发事件中进行现场及大批量水样中的微生物检测［5⁃7］。

菌落总数酶底物法的检测结果与平皿计数法得出的检测结果差异无统计学义（P=0.251），平皿计数法与酶底物法检测结果有相关性（r=0.944），表明该方法可以应用于水中菌落总数的检测。

此次实验的不足之处是水样只有40份，样本量相对较少，在以后的实验过程中会适量补充样本量。

参考文献
［1］武利平，丁埕，孙宗科.水中菌落总数检测方法的等效性判定［J］环境与健康杂志，2017（3）：246⁃248.
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5750.12-2006生活饮用水标准检验方法—微生物指标［S］.
北京：中国标准出版社，2007：14⁃17.
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合物酶底物检测方法［S ］.广州：广东标准出版社，2018：19⁃25.
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刘姣.酶底物法测定生活饮用水中菌落总数的研究［J ］.环境与发展，2017（5）135⁃136.
（收稿日期：2020⁃02⁃27）
DOI ：10.3969/j.issn.0253⁃9926.2020.12.008
作者单位：528000广东省佛山市南海区许海初级中学
校医室（黎绮霞）；广东省佛山市禅城区人民医院门急诊科（郑才）
2015—2018年某校流感样病例疫情流行病学特征
及防控措施分析
黎绮霞
郑才
流行性感冒（流感）是一种由病毒感染引起的呼吸系统疾病，该病传染性强、传播速度快，临床表现为高热、乏力、全身疼痛、寒战及轻度上呼吸道症
状，且该病极易产生变异性，每年均会以不同形式流行，给社会造成严重损失。

中小学是人群聚集重
要场所，因而是流感疫情的重灾区，对学生的身心健康造成严重影响，因此需及早地做好流感样病例的监测，加强对学校内流感样病例的流行病学特征
的分析，并做好防控措施。

本研究中，对2015—2018年某校流感样病例进行分析，旨在了解该校流感流行病学特征，为流感防控提供重要依据，报道如下。

1资料与方法
1.1
一般资料：自我市流感监测系统中，搜索2015—2018年我校流感样病例资料。

严格按照国
家流感样病例定义：患者伴随发热、咽喉疼痛等，且体温超38℃，并根据《国家突发公共卫生事件相关信息报告管理工作规范（试行）》［1］
中相关规定对疫情进行分级和判定。

1.2病原学检测：
每起疫情于3d 内采集10例新发病例咽拭子样本，
并于4℃下保存运输至我区疾病预防中心进行检测。

于24h 内采用反转录聚合
酶链反应（RT⁃PCR ）
对呼吸道病原核酸进行检测。

然后再检测甲型H1N1病毒、甲型H3N2病毒等，结果均为阴性后，再对肺炎链球菌、结核分歧杆菌
等其他呼吸道病原进行检测。

应用肺炎多病原检测试剂盒，并严格按照说明书进行。

1.3观察指标：①基本情况：
记录我校2015—2018年发病的基本情况，包括病例数、波及人数、事件数
等。

②临床症状：记录暴发期间所选病例出现的发热、咽痛、四肢酸痛、
腹泻、咳嗽等临床症状。

③时间分布：
记录2015—2018年间暴发疫情的时间段。

④病原学检测：
对所选流感样病例采集的咽拭子标本进行检测，并记录实验室检验后病原体类型。

1.4统计学方法：
采用Excel 建立数据库，对疫情爆发年份、临床症状、时间分布、
病原学检测结果等进行描述性分析。

2
结
果
2.1基本情况：
我校在2015—2018年间共报告8起流感疫情，
其中涉及161例病例，波及1401人，罹患率为11.49%，未出现死亡病例。

见表1。

2.2临床症状：对2015—2018年间161例病例进行分析。

见表2。

2.3时间分布：
我校2015—2018年间，于2—4月暴发2起，发病45例，占总例数28.0%（45/161）
；9—10月暴发1起，发病18例，占总例数11.2%
（18/161）；12月至来年1月暴发5起，
发病98例，201519.832018112.62合计
4
11.493539
1613561309
014014
201619.81
4141822017463181114.47年份一般事件罹患率（%）病例数波及人数未分级事件表12015—2018年我校流感样病例分布情况。