医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (2)

常规的洗手方法（甲和丙操作）
将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。
反复搓揉双手，搓揉时间不应少于
30秒。 用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。
※能有效地去除大多数手上的暂住菌。
医学微生物学实验室标准洗手方法（乙和丁操作）

用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。
Hale Waihona Puke 1.掌心对掌心搓擦思考题


为何取链球菌作为空气的卫生指标之一? 为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的 重要病原菌? 为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略 了有什么危害? 做细菌培养时，平板为什么要倒置? 培养细菌的常用方法有哪些? 从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项?
实验内容
空气的细菌学检查P38
甲、乙、丙、丁。
甲 1 丙 讲 台 甲 乙 甲 乙 甲 乙 甲 乙 甲 乙 丁 丙 乙 甲 2 丁 丙 乙 甲 3 丁 丙 乙 甲 4 丁 丙 乙 甲 5 丁 乙
6
丙 丁 丙
7
丁 丙
8
丁 丙
9
丁 丙
10
丁
接种环烧灼灭菌
使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和
金属丝烧红即可。 使用后，先在火焰背面将把环上标本烤干， 再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污 染环境。 金属杆快速通过火焰2～3次，杀灭表面微生 物
手指皮肤的细菌学检查P41
在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受 到污染的机会也最多。一只外观比较“干净 ”的手， 可携带10万个细菌、200多种病毒。因此，经手传播的 疾病很多，范围很广，包括肠道传染病、部分呼吸道传 染病、皮肤传染病，以及一切可经手间接传播的疾病。 常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量 比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法， 常不易去除。 暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外 来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通 常是暂住菌。
2.手指交错掌心对手背搓擦
3.手指交错掌心对掌心搓擦
4.两手互握互搓指背

5.拇指在掌中转动搓擦
6.指尖在掌心中搓擦
分别搓擦10～15次。 保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。
1.掌心对掌心搓擦
2.手指交错掌心对手背搓擦
3.手指交错掌心对掌心搓擦
4.两手互握互搓指背
5.拇指在掌中转动搓擦
6.指尖在掌心中搓擦
器材准备
自然界中的微生物
已经发现的微生物大约13万5千种，被认为非常
危险的有600种，在人间传染的病原微生物380 种。这些微生物存在于地球的各个角落，从寒 冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到 85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹 。 空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通 的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。 存在于人体消化道的细菌超过800种，数量可达 100万亿（1014），菌体重量1～1.5公斤。
接种环直径3mm
环面水平离开液面：快速6ul,慢速2ul。
环面垂直离开液面：快速3ul,慢速1ul。
接种环与平板接触点和划线方法？
5～10mm2 ↓
↙ ＞30条线
平板划线不少于150条线
37℃培养24小时
37℃培养24小时
37℃培养24小时
37℃培养24小时
安全警告
接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶
微生物学公共器材柜-2
（东侧边台中段）
电炉、石棉网 手套
酒精棉球
碘酒棉球 镊子
实验室器材 整齐有序
医学微生物学实验 综合性实验三 (P38)
空气与人体体表细菌学检查
空气的细菌学检查P38
手指皮肤的细菌学检查P41
空气的细菌学检查P38
空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病 传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分 泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶 胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。 环境：不利于微生物生长。 种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致 病菌的数量比较多。 作用：可迅速全球传播。 危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸 道传染病。
手指皮肤的 细菌学检查
上:甲、丙→常规洗手 下:乙、丁→标准洗手
丙
2人1块平板 甲（丙）
第1格为洗手前， 第2格为洗手后， 第3格为消毒后， 第4格空白对照。
1
2
丁
3
4
1 2 3 4
乙（丁）
医学微生物学实验 综合性实验一(P2)
脓汁和粪便标本中病原菌的检测（二）
临床标本的检查程序
细菌的分离与培养P7
医务人员洗手指征

接触传染病患者之后。 接触携带多耐药性细菌的病人之后。 接触病人的血液、体液、分泌物和排泄物之后。 接触高危病室两个病人之间、新生儿室两个新生儿之间。 接触旧钱币之后。 上厕所前后。 进行微生物操作或作血、尿等生化、免疫测定之后。 在施行各种手术前后。 诊断、治疗、护理特别易感染的病人之前。 进食之前。
★ CFU/m3 ＝ 50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。 N：平板上的菌落数。 A：平板面积(平方厘米)。 T：采样时间(分钟)。
空气的细菌学检查 组号 地点 时间(min) 菌落形成单位(CFU) 1 卫生间 15 2 食堂 15 3 门诊大厅 15 4 呼吸科病房 15 5 呼吸科ICU 15 6 外科病房 15 7 外科ICU 15 8 外科治疗室 15 9 婴儿室 15 10 实验室 15
平板分区划线分离法步骤（5区） 接种环烧灼灭菌，以免污染标本。 取标本在平板表面上方密集涂布5～10mm2。 烧掉接种环上多余的标本（火焰背面烤干→烧灼）。 晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度， 划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。 接种环与平板呈30～40度角，通过密集涂布部分1～3次，使接种 环重新沾上少量标本(细菌)，然后在平板表面，以曲线的形式， 作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区 划线不少于30条。 转动平板，接种环通过第一区1次，同样的方法划第二区。如此 依次划完3～5区。 接种环烧灼灭菌（火焰背面烤干→烧灼），以免污染环境。 将平板倒置（盖在下，底朝上），37℃培养18～24h 。 ★要充分利用平板面积，5区间隔尽量小，不能划破琼脂。
※目的要求：掌握分离、纯化微生物的基本操 作技术。
常见病原性球菌的检查程序P47：
直接涂片、革兰染色、镜检 脓汁、痰、咽部分泌物 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板培养 涂片染色镜检 挑取可疑菌落 生化反应 ↑ 纯培养 动物实验 药敏实验 血液、穿刺液 → 肉汤增菌培养 → 培养液涂片染色境检

实验方法：自然沉降法是根据空气中细菌气溶胶粒子， 在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养 基表面；培养以后，计数菌落形成单位（ colony forming unit ，CFU），了解空气的污染情况。

实验步骤：每组1块平板，选择采样地点（实验室、宿 舍、卫生间、饭堂或任选地点），将平板盖打开，盖 朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后 盖上盖子，作标记。37℃温箱培养24小时，观察结果。
普通平板(1组1块）
手指皮肤的细菌学检查P41
普通平板(2人1块→ 划分8格）
平板划线分离法P8
甲，乙→脓汁标本→普通平板(黄色，1人1块）
丙，丁→粪便标本→伊红美蓝(紫色，1人1块）
常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。 试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机的顺 序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。 ※器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。
5～10mm2 ↓
↙ ＞30条线
平板划线不少于150条线
平板划线分离法P8
甲→脓汁标本→普通平板（黄色） 乙→脓汁标本→普通平板
丙→粪便标本→伊红美蓝（紫色） 丁→粪便标本→伊红美蓝
实验分组
俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。 每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为
医务人员，经常要与病人接触，不管是直接接触，
还是间接接触，都有传播病菌的可能。虽然病菌 的直接来源是患者, 但是造成病菌扩散的主要途 径则是气溶胶和医务人员的手。因此，经常洗手 和消毒是控制医院内交叉感染的主要方法。 实际上，预防感染措施中，最简单又十分有效的 方法就是洗手。据测定，只用自来水洗手可使暂 住菌总数减少40%，用肥皂洗手可减少80%以上。 洗手？
常见肠道致病菌的检查程序P48： 粪便 → SS琼脂、伊红美蓝平板培养 → 挑取可疑菌落 ↑ ↓ 血清学鉴定 血、骨髓 → 增菌培养 双糖铁培养基 染色镜检 生化反应
平板划线分离法：
借助于划线，将混杂的多种细菌，在固体培 养基表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。 培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细 菌集团。 ☆ 在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部 位置不断增值的稠密群体称为单菌落。 ☆在固体培养基表面，由多个菌落融合在一起形成 的细菌堆积物,称为菌苔。
胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快，＜50um在0.4s内 扩散开，＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明 原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中 扩散引起的。 实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作， 保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感 染病原菌。