药物筛选新技术的应用(最全版)PTT文档

G蛋白偶联受体
药物研究：30%的药物靶标是G蛋白偶联受体家族成员
人类2D.4.传统的基于荧光呈像平板计数法
接的方法，在化合物数据库中寻找可能的活性化合物。
磷脂酶C(f和lu细o胞r内omCae2+tr释ic放结im合a起g来ing plate reader, FLIPR)
生物芯片技术 基因芯片、蛋白芯片、细胞芯片、组织芯片 （一）分子水平的高通量筛选
542
399
412
418
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（二）细胞水平的高通量筛选
G蛋白偶联受体
药物研究：30%的药物靶标是G蛋白偶联受体家族成员
人类D4.4(多巴胺受体的一类) 嵌合G蛋白(Gqo5)
在HEK-298细胞系中稳定共表达
磷脂酶C和细胞内Ca2+释放结合起来
1.细胞水平微阵列化合物筛选平台
药物筛选(c的e概ll-念b和a特se点d microarrayed compound screening format, ARCS)
检测荧光值
嵌合G蛋白(G qo5) 传统的基于荧光呈像平板计数法
(fluorometric imaging plate reader, FLIPR) 药物筛选在新药研究中的地位 根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 筛选化合物：260，000个 在药物筛选方面已经积累了丰富的经验，达到令人满意的水平
再生溶液：4 M MgCl2/10 mM NaOH
细胞密度(8-10)×106个/mL
高通量筛选 是基于药物作用靶点在分子、细胞水平上进行的药物活性的自动
磺胺 (sulfanilamide)
1%琼脂糖凝胶
计算机技术 样品管理、操作过程的控制、筛选结果的分析和处理
呋塞米 (furosemide)
计算机技术 样品管理、操作过程的控制、筛选结果的分析和处理 再生溶液：4 M MgCl2/10 mM NaOH
凝血酶和碳酸酐酶的阳性化合物
凝血酶抑制剂
相对分子质量
碳酸酐酶抑制剂
相对分子质量
Inogatran 阿加曲班 (argatroban) 美拉加群 (melagatran)
化合物CH248 化合物557 化合物1724 化合物1087 化合物1231 化合物1019 化合物1052
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柳氮磺胺吡啶 (sulfasalazine)
计算机技术 样品管理、操作过程的控制、筛选结果的分析和处理
磷脂酶C和细胞内Ca2+释放结合起来
（二）细胞及动物水平药物筛选
高美通拉量 加筛群选(筛me是选lag基a化于tra药合n)物物作用：靶2点6在0，分子0、00细个胞水平上进行的共药物表活达性的D自、动G的细胞
fluo-4
最大特点：筛药物选作过用靶程点：明确
分类：根据检测方法的不同 一.均相筛选方法 二.根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 三.固定化靶分子的筛选方法 四.其他方法
（二）细胞及动物水平药物筛选
一.细胞水平的药物筛选 1.酵母双杂交系统 2.哺乳动物细胞系统
二.动物水平的药物筛选
（三）高通量筛选
高通量筛选的基本条件
1.药物靶点 2.分子或细胞水平的高特异性体外筛选模型 3.待筛样品库 4.自动化操作系统 5.高灵敏度检测系统 6.数据采集传输处理系统
细胞凝胶
厚度0.75 mm
凝血酶和碳酸酐酶的阳性化合物
双氢氯噻嗪 (hydrochlorothiazide)
4(多巴胺受体的一类)
电荷偶联呈像系统呈像
虚拟嵌筛合选G蛋利白用(G计算qo机5强) 大的计算能力，采用三维药效基团模型搜寻或分子对激发波长480 nm 发射波长520 nm
获取图像
（二）细胞水平的高通量筛选
398
582
磺胺 (sulfanilamide)
172
429
4-羧基苯磺酰胺
(4-carboxybenzenesulfanamide, CBSA)
201
520
双氢氯噻嗪 (hydrochlorothiazide)
298
575
呋塞米 (furosemide)
331
475
偶氮磺酰胺 (azosulfamide)
BIACORE S51 主要用途：快速单一浓度筛选
共表达D、G的细胞

小分子与靶标分子相互作用动力学分析
详细的靶标和位点特异性研究
FLIPR
早期体外的ADME研究
激发波长480 nm
基于SAR/QSAR先导化合物优化的动力学研究 分子或细胞水平的高特异性体外筛选模型
发射波长520 nm
4(多巴胺受体的一类)
一.药物筛选的一般流程
1 药物靶点的选择 2 药物筛选
靶标 测定方法
二.药物筛选在新药研究中的地位
在药物筛选方面已经积累了丰富的经验，达到令人满意的水平 选用不同方法筛选药物上仍有弊端，需多方面综合考虑
三.药物筛选平台
动物实验 传统的药理学研究 现代药物筛选方法
（一）分子水平药物筛选
最大特点：药物作用靶点明确
药物筛选新技术的应 用
药物筛选的概念和特点
药物筛选
虚拟筛选 利用计算机强大的计算能力，采用三维药效基团模型搜寻或分子对
接的方法，在化合物数据库中寻找可能的活性化合物。
高通量筛选 是基于药物作用靶点在分子、细胞水平上进行的药物活性的自动
化大规模筛选过程，主要依赖于含有大量化合物的样品库、计算 机控制的自动操作系统和微量灵敏的生物反应及检测系统 。
实验条件：
BIACORE S51系列传感器芯片CM5 凝血酶抑制剂 碳酸酐酶抑制剂 偶联试剂：N-乙基-N'-二甲基-氨丙基-碳二酰亚氨
(N-ethyl-N'-dimethylaminopropylcarbodiimide, EDC) N-羟基琥珀酰亚氨 (N-hydroxysuccinimide, NHS) 乙醇胺 (ethanolamine) 工作缓冲液：10 mM PBS buffer, pH7.4, 含2%/5% DMSO和% P20 洗涤溶液：50% DMSO, 含% P20 再生溶液：4 M MgCl2/10 mM NaOH
高通量筛选涉及的技术
1.组合化学合成和组合生物合成技术 2.计算机技术 样品管理、操作过程的控制、筛选结果的分析和处理 3.生物芯片技术 基因芯片、蛋白芯片、细胞芯片、组织芯片
四.药物筛选实例
（一）分子水平的高通量筛选
BIACORE S51 主要用途：快速单一浓度筛选
小分子与靶标分子相互作用动力学分析 详细的靶标和位点特异性研究 早期体外的ADME研究 基于SAR/QSAR先导化合物优化的动力学研究