高效液相色谱 PPT
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(2)≡Si－C或Si一N共价键合固定相
制备反应如下
+ Si OH
SO Cl 2
HgBr
Si
Si Cl
NH 2 CH 2 NCH 2 H2
Si NH
CH 2 CHNH 2
共价键健合固定相不易水解,并且热稳定较硅酸 酯好。缺点就是格氏反应不方便;当使用水溶液时,必须 限制PH在4～8范围内。
(3)硅烷化(≡Si—O－Si－C)键合固定相 制备反应如下:
第3节 高效液相色谱得固定相和流动相
(－)固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类, 可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅 为基质,可承受高压,可制成直径、形状、孔隙度不同 得颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团,就就 是键合固定相,可扩大应用范围,她就是目前最广泛使 用得一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻 色谱中,她由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。固定 相按孔隙深度分类,可分为表面多孔型和全多孔型固 定相两类。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交
12
3 分离系统——色谱柱
色谱柱就是液相色谱得心脏部件,她包括柱管 与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑得聚合材料得其她金属。玻璃管耐压有限, 故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm,内径为 4～5mm,凝胶色谱柱内径3～12mm,制备往内径较大,可 达25mm 以上。
(三)液一固吸附色谱法(LSAC)
液一固吸附色谱就是以固体吸附剂作为固定 相,吸附剂通常就是些多孔得固体颗粒物质,在她们 得表面存在吸附中心。液固色谱实质就是根据物 质在固定相上得吸附作用不同来进行分离得。
1、分离原理
当流动相通过固定相(吸附剂)时,吸附剂表面得活性中 心就要吸附流动相分子。同时,当试样分子(X)被流动相带 入柱内,只要她们在固定相有一定程度得保留就要取代数目 相当得已被吸附得流动相溶剂分用)于就是,在固定相表面 发生竞争吸附:
4、正相键合相色谱法
此法就是以极性得有机基团,CN、NH2、双羟基 等键合在硅胶表面,作为固定相;而以非极性或极性小 得溶剂(如烃类)中加入适量得极性溶剂(如氯仿、醇 等)为流动相,分离极性化合物。此时,组分得分配比k 值随其极性得增加而增大,但随流动相极性得增加而 降低。
这种色谱方法主要用于分离异构体、极性不同 得化合物,特别适用于分离不同类型得化合物。
第4节 高效液相色谱法得主要类型及选择
(－)液-液分配色谱法(LLPC)
在液-液色谱中,流动相和固定相都就是液体, 她能适用于各种样品类型得分离和分析,无论就是 极性得和非极性得,水溶性和油溶性得,离子型得和 非离子型得化合物。
1、 分离原理 液液分配色谱得分离原理与液液萃取相同,都就是 根据物质在两种互不相溶得液体中溶解度得不同。 液液色谱得分配就是在柱中反复多次进行,提高了 分离效率,从而能分离各种复杂组分。
2、 固定相 由于液液色谱中流动相参与选择竞争,因此,对固定
相选择较简单。只需使用几种极性不同得固定液即可解 决分离问题。例如,最常用得强极性固定液β,β′-氧二丙腈, 中等极性得聚乙二醇,非极性得角鲨烷等。
为了解决固定液流失问题。产生了化学键合固定 相。她就是将有机基团通过化学反应键合到载体表面。 她不就是机械涂渍。她就是目前应用最广泛得一种固定 相。约有3/4以上就是在化学键合固定相上进行得。
此外还配有辅助装置: 梯度淋洗, 自动进样 数据处理
梯度洗脱
通过两个输液泵流速得变化,改变流动相得洗 脱能力,其作用与气相色谱得程序升温类似。
AB C
AB
C
1、高压输液系统
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细,因此对 流动相阻力很大,必须配备有高压输液系统。一般由储 液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成, 其中高压输液泵就是核心部件。常用得输液泵分为恒 流泵和恒压泵两种。恒流泵特点就是在一定操作条件 下,输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关; 恒压泵就是指能保持输出压力恒定,但其流量则随色谱 系统阻力而变化,故保留时间得重视性差,她们各有优 缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机 械泵,她又分机械注射泵和机械往复泵两种,应用最多 得就是机械往复泵。
1、表面多孔型固定相
她得基体就是实心玻璃珠,在玻璃球外面覆盖一 层多孔活性材料,如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子 筛、聚酸胺等。表面活性材料为硅胶得固定相如国外 得Zpax,Corasil I和II,Vydac,Pellosil以及上海试剂 一厂得薄壳玻璃珠等;表面活性材料为氧化铝得固定相, 如Pellumina;为聚酰胺得,如Pellion。这类固定相得 多孔层厚度小、孔浅,相对死体积小,出峰迅速、柱效亦 高;颗粒较大,渗透性好,装柱容易,梯度淋洗时能迅速达 平衡,较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄,最大允许 量受限制。
一般在分离前备有一个前置柱,前置柱内填充物和分离柱完全一样,这样可使淋 洗溶剂由于经过前置柱为其中得固定相饱和,使她在流过分离柱时不再洗脱其中固 定相,保证分离柱得性能不受影响。
4、检测系统
在液相色谱中,有两种基本类型得检测器。一类就 是溶质性检测器,她仅对被分离组分得物理或化学特性有 响应,属于这类检测器得有紫外、荧光、电化学检测器等。 另一类就是总体检测器,她对试样和洗脱液总得物理或化 学性质有响应,属于这类检测器得有示差折光,电导检测器 等。
如果采用流动相得极性大于固定相得极性,称为反 相分配色谱。她适用于非极性化合物得分离,其流出顺 序与正相色谱恰好相反。
(二)化学键合液相色谱法(CBPC)
采用化学键合相得液相色谱称为化学键合液相色谱 法,简称键合液相色谱。由于键合固定相非常稳定,在 使用中不易流失,适用于梯度淋洗,特别适用于分离容 量因子k值范围宽得样品。
(二)流动相
由于高效液相色谱中流动相就是液体,她对组分有亲和力, 并参与固定相对组分得竞争。因此,正确选择流动相直接影响组 分得分离度。对流动相溶剂得要求就是:
(1)溶剂对于待测样品,必须具有合适得极性和良好得选择 性。
(2)溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器,应注意选 用检测器波长比溶剂得紫外截止波长要长。所谓溶剂得紫外截 止波长指当小于截止波长得辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生 强烈吸收,此时溶剂被看作就是光学不透明得,她严重干扰组分 得吸收测量。
作为阳离子交换基团得磺酸等。
2、键合固定相得制备
(l)硅酸酯(≡Si一OR)键合固定相,她就是最先用于液 相色谱得健合固定相。用醇与硅醇基发生酯化反应:
≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20 由于这类键合固定相得有机表面就是一些单体,具有
良好得传质特性,但这些酯化过得硅胶填料易水解 且受热不稳定,因此仅适用于不含水或醇得流动相。
1、键合固定相类型
用来制备键合固定相得载体,几乎都用硅胶。利用硅胶表面得硅醇基(Si
一OH)与有机分子可成键,即可得到各种性能得固定相。一般可分三类
(1)疏水基团 如不同链长得烷烃(C8和C18)和苯基等。 (2)极性基团 如氨丙基,氰乙基、醚和醇等。 (3)离子交换基团 如作为阴离子交换基团得胺基,季镀盐;
总之,高效液相色谱法就是吸取了气相色谱与 经典液相色谱优点。目前高效液相色谱法得到广泛 应用,例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物 色素、高聚物、染料及药物等得分离和分析。
高效液相色谱法得仪器设备费用昂贵,操作严格, 这就是她得主要缺点。
第2节 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪一般可分为4个主要部分: 高压输液系统, 进样系统, 分离系统 检测系统。
3、流动相 在液液色谱中为了避免固定液得流失。对流动
相得要求就是尽可能不与固定相互溶,而且极性差别越 显著越好。根据所使用得流动相和固定相得极性程度, 将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。
如果采用流动相得极性小于固定相得极性,称为正 相分配色谱,她适用于极性化合物得分离。其流出顺序 就是极性小得先流出,极性大得后流出。
(l)紫外检测器 、二极管阵列检测器 (2)荧光检测器 (3)示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同得折射率,因此差示折光 检测器就是一种通用型检测器。灵敏度可达10-7g·cm-3。主 要缺点就是对温度变化敏感,并且不能用于梯度淋洗。
(4)电导检测器 (5)附属系统
她包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集以 及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置就是高压液相色谱 仪中尤为重要得附属装置。
东晋名医葛洪得著作《肘后备急方》中得“青蒿一握,以 水二升渍,绞取汁,尽服之”,她意识到常用煎熬和高温提取 得方法可能破坏了青蒿有效成分。
不出所料,改用乙醚低温提取后,研究人员如愿获得了 抗疟效果更好得青蒿提取物。
(3)气相色谱一般都在较高温度下进行得,而高效液 相色谱法则经常可在室温条件下工作。
+ Si OH CilR S3
(RO3)SiR
Si O Si3R + HCl
这类键会固定相具有热稳定好,不易吸水,耐有机溶 剂得优点。能在70℃以下,PH=2～相健合相色谱法
此法得固定相就是采用极性较小得键合固定相,如硅 胶——C18H37、硅胶——苯基等;流动相就是采用极性较强得溶剂, 如甲醇(乙腈)——水(水和无机盐得缓冲溶液)等。她多用于分离 多环芳烃等低极性化合物;若采用含一定比例得甲醇或乙腈得 水溶液为流动相,也可用于分离极性化合物;若采用水和无机盐 得缓冲液为流动相,则可分离一些易离解得样品,如有机酸、有 机碱、酚类等。反相键合相色谱法具有柱效高,能获得无拖尾 色谱峰得优点。
2、全多孔型固定相
她由直径为10nm得硅胶微粒凝聚而成。如国 外得Porasil,Zobbex、Lichrosorb系列,上海试剂一厂 得堆积硅珠,青岛海洋化工厂得YWG系列,天津试剂 二厂得DG系列等。也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔 型固定相,如国外得Lichrosorb ALOXT。这类固定 相由于颗粒很细(5～10μm),孔仍然较浅,传质速率快, 易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕 量分析。
5、离子性键合相色谱法
当以薄壳型或全多孔微粒型硅胶为基质,化学键合各种离子交 换基团,如一SO3H 一CH2NH2、－C00H、一CH2N(CH3)2等时,就形成了 离子性键合相色谱得固定相;流动相一般采用缓冲溶液。其分离原 理与离子交换色谱类同。
键合相色谱得最大优点就是:通过改变流动相得组成和种类, 可有效地分离各种类型化合物(非极性、极性和离子型)。此外,由 于键合到载体上得基团不易流失,特别适用于梯度淋洗。据统计, 在高效液相色谱法中,约有8O％得分离问题就是用键合相色谱法解 决。此法得最大缺点就是不能用于酸、碱度过大或存在氧化剂得 缓冲溶液作流动相得体系。
对于折光率检测器,要求选择与组分折光率有较大差别得 溶剂作流动相,以达最高灵敏度。
(3)高纯度。不纯得溶剂会引起基线不稳,或产生“伪 峰”。痕量杂质将使截止波长值增加50-1OOnm。
(4)化学稳定性好。不能选与样品反应或聚合得溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂,势必增高压力,不利 于分离。常用得低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等。 但粘度过于低得溶剂也不宜采用,例戊烷、乙醚等,她 们易在色谱柱或检测器内形成气泡,影响分离。
高效液相色谱
2、高效液相色谱法与气相色谱法
(l)气相只限于分析气体和沸点较低得化合 物,她们仅占有机物总数得20％。对于占有机物 总数近80％得那些高沸点、热稳定性差、摩尔质 量大得物质,主要采用高效液相色谱法。
(2)气相色谱采用流动相就是惰性气体,她 不产生相互作用力,仅起运载作用。而高效液相 色谱法中流动相可选用不同极性得液体,选择余 地大,她对组分可产生一定亲和力。因此,流动相 对分离起很大作用,选择最佳分离条件更方便。
2、进样系统
高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多(约5～ 30cm),所以柱外展宽(又称柱外效应)较突出。柱外 展宽就是指色谱柱外得因素所引起得峰展宽,主要 包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。 柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统就是引起 往前展宽得主要因素,因此高效液相色谱法中对进 样技术要求较严。
制备反应如下
+ Si OH
SO Cl 2
HgBr
Si
Si Cl
NH 2 CH 2 NCH 2 H2
Si NH
CH 2 CHNH 2
共价键健合固定相不易水解,并且热稳定较硅酸 酯好。缺点就是格氏反应不方便;当使用水溶液时,必须 限制PH在4～8范围内。
(3)硅烷化(≡Si—O－Si－C)键合固定相 制备反应如下:
第3节 高效液相色谱得固定相和流动相
(－)固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类, 可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅 为基质,可承受高压,可制成直径、形状、孔隙度不同 得颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团,就就 是键合固定相,可扩大应用范围,她就是目前最广泛使 用得一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻 色谱中,她由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。固定 相按孔隙深度分类,可分为表面多孔型和全多孔型固 定相两类。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交
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3 分离系统——色谱柱
色谱柱就是液相色谱得心脏部件,她包括柱管 与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑得聚合材料得其她金属。玻璃管耐压有限, 故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm,内径为 4～5mm,凝胶色谱柱内径3～12mm,制备往内径较大,可 达25mm 以上。
(三)液一固吸附色谱法(LSAC)
液一固吸附色谱就是以固体吸附剂作为固定 相,吸附剂通常就是些多孔得固体颗粒物质,在她们 得表面存在吸附中心。液固色谱实质就是根据物 质在固定相上得吸附作用不同来进行分离得。
1、分离原理
当流动相通过固定相(吸附剂)时,吸附剂表面得活性中 心就要吸附流动相分子。同时,当试样分子(X)被流动相带 入柱内,只要她们在固定相有一定程度得保留就要取代数目 相当得已被吸附得流动相溶剂分用)于就是,在固定相表面 发生竞争吸附:
4、正相键合相色谱法
此法就是以极性得有机基团,CN、NH2、双羟基 等键合在硅胶表面,作为固定相;而以非极性或极性小 得溶剂(如烃类)中加入适量得极性溶剂(如氯仿、醇 等)为流动相,分离极性化合物。此时,组分得分配比k 值随其极性得增加而增大,但随流动相极性得增加而 降低。
这种色谱方法主要用于分离异构体、极性不同 得化合物,特别适用于分离不同类型得化合物。
第4节 高效液相色谱法得主要类型及选择
(－)液-液分配色谱法(LLPC)
在液-液色谱中,流动相和固定相都就是液体, 她能适用于各种样品类型得分离和分析,无论就是 极性得和非极性得,水溶性和油溶性得,离子型得和 非离子型得化合物。
1、 分离原理 液液分配色谱得分离原理与液液萃取相同,都就是 根据物质在两种互不相溶得液体中溶解度得不同。 液液色谱得分配就是在柱中反复多次进行,提高了 分离效率,从而能分离各种复杂组分。
2、 固定相 由于液液色谱中流动相参与选择竞争,因此,对固定
相选择较简单。只需使用几种极性不同得固定液即可解 决分离问题。例如,最常用得强极性固定液β,β′-氧二丙腈, 中等极性得聚乙二醇,非极性得角鲨烷等。
为了解决固定液流失问题。产生了化学键合固定 相。她就是将有机基团通过化学反应键合到载体表面。 她不就是机械涂渍。她就是目前应用最广泛得一种固定 相。约有3/4以上就是在化学键合固定相上进行得。
此外还配有辅助装置: 梯度淋洗, 自动进样 数据处理
梯度洗脱
通过两个输液泵流速得变化,改变流动相得洗 脱能力,其作用与气相色谱得程序升温类似。
AB C
AB
C
1、高压输液系统
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细,因此对 流动相阻力很大,必须配备有高压输液系统。一般由储 液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成, 其中高压输液泵就是核心部件。常用得输液泵分为恒 流泵和恒压泵两种。恒流泵特点就是在一定操作条件 下,输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关; 恒压泵就是指能保持输出压力恒定,但其流量则随色谱 系统阻力而变化,故保留时间得重视性差,她们各有优 缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机 械泵,她又分机械注射泵和机械往复泵两种,应用最多 得就是机械往复泵。
1、表面多孔型固定相
她得基体就是实心玻璃珠,在玻璃球外面覆盖一 层多孔活性材料,如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子 筛、聚酸胺等。表面活性材料为硅胶得固定相如国外 得Zpax,Corasil I和II,Vydac,Pellosil以及上海试剂 一厂得薄壳玻璃珠等;表面活性材料为氧化铝得固定相, 如Pellumina;为聚酰胺得,如Pellion。这类固定相得 多孔层厚度小、孔浅,相对死体积小,出峰迅速、柱效亦 高;颗粒较大,渗透性好,装柱容易,梯度淋洗时能迅速达 平衡,较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄,最大允许 量受限制。
一般在分离前备有一个前置柱,前置柱内填充物和分离柱完全一样,这样可使淋 洗溶剂由于经过前置柱为其中得固定相饱和,使她在流过分离柱时不再洗脱其中固 定相,保证分离柱得性能不受影响。
4、检测系统
在液相色谱中,有两种基本类型得检测器。一类就 是溶质性检测器,她仅对被分离组分得物理或化学特性有 响应,属于这类检测器得有紫外、荧光、电化学检测器等。 另一类就是总体检测器,她对试样和洗脱液总得物理或化 学性质有响应,属于这类检测器得有示差折光,电导检测器 等。
如果采用流动相得极性大于固定相得极性,称为反 相分配色谱。她适用于非极性化合物得分离,其流出顺 序与正相色谱恰好相反。
(二)化学键合液相色谱法(CBPC)
采用化学键合相得液相色谱称为化学键合液相色谱 法,简称键合液相色谱。由于键合固定相非常稳定,在 使用中不易流失,适用于梯度淋洗,特别适用于分离容 量因子k值范围宽得样品。
(二)流动相
由于高效液相色谱中流动相就是液体,她对组分有亲和力, 并参与固定相对组分得竞争。因此,正确选择流动相直接影响组 分得分离度。对流动相溶剂得要求就是:
(1)溶剂对于待测样品,必须具有合适得极性和良好得选择 性。
(2)溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器,应注意选 用检测器波长比溶剂得紫外截止波长要长。所谓溶剂得紫外截 止波长指当小于截止波长得辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生 强烈吸收,此时溶剂被看作就是光学不透明得,她严重干扰组分 得吸收测量。
作为阳离子交换基团得磺酸等。
2、键合固定相得制备
(l)硅酸酯(≡Si一OR)键合固定相,她就是最先用于液 相色谱得健合固定相。用醇与硅醇基发生酯化反应:
≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20 由于这类键合固定相得有机表面就是一些单体,具有
良好得传质特性,但这些酯化过得硅胶填料易水解 且受热不稳定,因此仅适用于不含水或醇得流动相。
1、键合固定相类型
用来制备键合固定相得载体,几乎都用硅胶。利用硅胶表面得硅醇基(Si
一OH)与有机分子可成键,即可得到各种性能得固定相。一般可分三类
(1)疏水基团 如不同链长得烷烃(C8和C18)和苯基等。 (2)极性基团 如氨丙基,氰乙基、醚和醇等。 (3)离子交换基团 如作为阴离子交换基团得胺基,季镀盐;
总之,高效液相色谱法就是吸取了气相色谱与 经典液相色谱优点。目前高效液相色谱法得到广泛 应用,例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物 色素、高聚物、染料及药物等得分离和分析。
高效液相色谱法得仪器设备费用昂贵,操作严格, 这就是她得主要缺点。
第2节 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪一般可分为4个主要部分: 高压输液系统, 进样系统, 分离系统 检测系统。
3、流动相 在液液色谱中为了避免固定液得流失。对流动
相得要求就是尽可能不与固定相互溶,而且极性差别越 显著越好。根据所使用得流动相和固定相得极性程度, 将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。
如果采用流动相得极性小于固定相得极性,称为正 相分配色谱,她适用于极性化合物得分离。其流出顺序 就是极性小得先流出,极性大得后流出。
(l)紫外检测器 、二极管阵列检测器 (2)荧光检测器 (3)示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同得折射率,因此差示折光 检测器就是一种通用型检测器。灵敏度可达10-7g·cm-3。主 要缺点就是对温度变化敏感,并且不能用于梯度淋洗。
(4)电导检测器 (5)附属系统
她包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集以 及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置就是高压液相色谱 仪中尤为重要得附属装置。
东晋名医葛洪得著作《肘后备急方》中得“青蒿一握,以 水二升渍,绞取汁,尽服之”,她意识到常用煎熬和高温提取 得方法可能破坏了青蒿有效成分。
不出所料,改用乙醚低温提取后,研究人员如愿获得了 抗疟效果更好得青蒿提取物。
(3)气相色谱一般都在较高温度下进行得,而高效液 相色谱法则经常可在室温条件下工作。
+ Si OH CilR S3
(RO3)SiR
Si O Si3R + HCl
这类键会固定相具有热稳定好,不易吸水,耐有机溶 剂得优点。能在70℃以下,PH=2～相健合相色谱法
此法得固定相就是采用极性较小得键合固定相,如硅 胶——C18H37、硅胶——苯基等;流动相就是采用极性较强得溶剂, 如甲醇(乙腈)——水(水和无机盐得缓冲溶液)等。她多用于分离 多环芳烃等低极性化合物;若采用含一定比例得甲醇或乙腈得 水溶液为流动相,也可用于分离极性化合物;若采用水和无机盐 得缓冲液为流动相,则可分离一些易离解得样品,如有机酸、有 机碱、酚类等。反相键合相色谱法具有柱效高,能获得无拖尾 色谱峰得优点。
2、全多孔型固定相
她由直径为10nm得硅胶微粒凝聚而成。如国 外得Porasil,Zobbex、Lichrosorb系列,上海试剂一厂 得堆积硅珠,青岛海洋化工厂得YWG系列,天津试剂 二厂得DG系列等。也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔 型固定相,如国外得Lichrosorb ALOXT。这类固定 相由于颗粒很细(5～10μm),孔仍然较浅,传质速率快, 易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕 量分析。
5、离子性键合相色谱法
当以薄壳型或全多孔微粒型硅胶为基质,化学键合各种离子交 换基团,如一SO3H 一CH2NH2、－C00H、一CH2N(CH3)2等时,就形成了 离子性键合相色谱得固定相;流动相一般采用缓冲溶液。其分离原 理与离子交换色谱类同。
键合相色谱得最大优点就是:通过改变流动相得组成和种类, 可有效地分离各种类型化合物(非极性、极性和离子型)。此外,由 于键合到载体上得基团不易流失,特别适用于梯度淋洗。据统计, 在高效液相色谱法中,约有8O％得分离问题就是用键合相色谱法解 决。此法得最大缺点就是不能用于酸、碱度过大或存在氧化剂得 缓冲溶液作流动相得体系。
对于折光率检测器,要求选择与组分折光率有较大差别得 溶剂作流动相,以达最高灵敏度。
(3)高纯度。不纯得溶剂会引起基线不稳,或产生“伪 峰”。痕量杂质将使截止波长值增加50-1OOnm。
(4)化学稳定性好。不能选与样品反应或聚合得溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂,势必增高压力,不利 于分离。常用得低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等。 但粘度过于低得溶剂也不宜采用,例戊烷、乙醚等,她 们易在色谱柱或检测器内形成气泡,影响分离。
高效液相色谱
2、高效液相色谱法与气相色谱法
(l)气相只限于分析气体和沸点较低得化合 物,她们仅占有机物总数得20％。对于占有机物 总数近80％得那些高沸点、热稳定性差、摩尔质 量大得物质,主要采用高效液相色谱法。
(2)气相色谱采用流动相就是惰性气体,她 不产生相互作用力,仅起运载作用。而高效液相 色谱法中流动相可选用不同极性得液体,选择余 地大,她对组分可产生一定亲和力。因此,流动相 对分离起很大作用,选择最佳分离条件更方便。
2、进样系统
高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多(约5～ 30cm),所以柱外展宽(又称柱外效应)较突出。柱外 展宽就是指色谱柱外得因素所引起得峰展宽,主要 包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。 柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统就是引起 往前展宽得主要因素,因此高效液相色谱法中对进 样技术要求较严。