HPLC法测定盐酸莫西沙星中R—异构体含量研究
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பைடு நூலகம்
相色谱仪内，记录相应的色谱图。将峰面积（A：μV×s）、 浓度（C：μg/ml）分别设定为纵、横坐标，以此为据进行线性 回归分析，获得如下的线性方程：A=3. 926×105C-1. 566×105 r=0. 9995
线性范畴是0.55~5.40μg/ml。 2.4 加样回收率试验 称取莫西沙星原药（批号20110612 其内R-异构体含量 0.24%），大概24mg，精准称定，共计8份，依次将其置在50ml 量瓶内，精确投用“系统适用性试验”下的R-异构体储备液 0.5、1.0、1.5mL各3份，添加溶剂溶解并稀释到设计刻度，混 合充分摇均，将其设定成异 构体回收率试验中的测试液。取适量测试液与R—异构体 对照品各10μL，按序注入值液相色谱仪内，依照峰面积，利 用外标法测算出回收率。统计结果发现，低、中、高浓度回收 率（n=3）依次是98.3%、99.7%、99.6%；RSD依次是0.68%、 0.92%、0.83%，平均回收率（n=8)达到了99.3%。 2.5 检测限与定量限 取适量R—异构体对照品溶液，适当稀释处理，进样检 测。当信噪比（S/N）达到3时，检测得到R—异构体的检测限 是1. 1 ng；当信噪比（S/N）是10时，检测出R—异构体的定量 限是3. 5ng[3]。 2.6 进样精密度试验 取适量R—异构体对照品溶液，持续进样6次，检测R—异 构体的峰面积，RSD（n=6）是0.29%。 2.7 溶液稳定性试验 称取原药（批号20110620）25㎎左右，精准定容，将其安 置于50 mL量瓶内，添加适量溶解（超声波助溶）并稀释到设 计刻度，摇匀，将其作为供试品溶液（0.5㎎/mL），考察分析 溶液的稳定性。室温条件下分别安置0h、1h、2h、4h、6h、8h 以后分别进样10μL，记录相应的色谱图，其R—异构体峰面积 的RSD（n=6）对应值是0.94%，提示在室温条件下本溶液持续 放置8h内，依然能维持自身性质的相对稳定性。 2.8 重复性试验 量取相同批次试样（批号20110703），精准量取、定容， 添加事前准备好的溶剂进行溶解及稀释处理，配制出浓度大 概为0.5㎎/ml的6份供试品溶液，分别规范的检测R—异构体含 量。通过结果发现R—异构体含量平均值（n=6）s 0.24%,RSD 是2.6%，提示本课题研究中采用的HPLC法重复性优良。 2.9 测定R—异构体 即称取适量莫西沙星原药，添加试剂溶解及稀释处理， 配制成浓度大概0.5㎎/ml供试品溶液，精准称取以上溶液及
1 仪器和试药 高效液相色谱仪（LC-2010C HT型），其内含有LC-
Solution色谱工作站。 盐酸莫西沙星对照品I（批号：Y0000703，纯度达
99.906%），R-异构体对照品II（批号：20110726，纯度99.820%） 与原药（批号20110612、20110620与20110703）；硫酸铜；L-苯丙 氨酸；选用蒸馏水、甲醇分别作为超纯水、色谱纯。
2 操作方法与结果分析 2.1 配制溶液 对照品II贮备液：准确称取10㎎对照品II，将其安置在
10ml容量瓶内，添加流动相溶解并定容处理，便能配制出1㎎/ ml对照品II贮备液[2]。
供试品溶液：取10㎎原药，置于10ml瓶中，操作方法同上 制得1㎎/ml的供试品溶液。
2.2 色谱条件和适用性试验 Zorbax SB-C18色谱柱（4.5mm×150mm，5μm）；流动 相：手性流动相添加剂溶液（750㎎硫酸铜+991.3㎎ L- 苯丙氨 酸，添加适量蒸馏水溶解并定容到1L）—甲醇（39:11），流速 1.0mL/min，柱温45℃，检测波长293nm；进样量10μL。 量取对照品I、II适量，添加流动相溶解并稀释制备成含 有I 1㎎/ml、II 2μg/ml混合液，将其作为系统适用性试验用溶 液。量取适量对照品II，溶解、稀释制得1μg/ml溶液。取以上 两种溶液作为系统适用性溶液（含有异构体0.5%左右）。称量 10μL以上系统适用性溶液，将其输注至液相色谱仪内，R-异 构体和莫西沙星的留存时间分别是13.8min、16.6min，两者的 分离度是3,.4，基于R-异构体峰进行计量，理论塔板数是4296。 2.3 线性关系分析 称取适量的莫西沙星R—异构体对照品，精准定容，添加 溶剂溶解并稀释制得0. 55、1.10、2.20、2.75、5. 50μg/ml的系 列溶液。准确量取以上系列溶液各10 μL，依次将其输注至液
工业与信息化
TECHNOLOGY AND INFORMATION
HPLC法测定盐酸莫西沙星中R—异构体含量研究
孙江峰 董艳华 张小军 扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司 江苏 泰州 225300
摘 要 建立HPLC法检测盐酸莫西沙星中要R-异构体含量。应用Zorbax SB-C18色谱柱，流动相选择手性流 动相添加剂溶液（3mmol/L硫酸铜+6mmol/L L- 苯丙氨酸）—甲醇（39:11），流速1.0mL/min，柱温45℃，检测 波长设定为293nm；进样量10μL。试验检测发现，S-与R-异构体的分离度是3.4，其中R-异构体的线性范畴是 0.55~5.40μg/ml（r=0.9995），检测限1.1ng，平均回收率（n=8)达到了99.3%。采用HPLC法检测，操作流程简单， 结果精准度较高，适用于检测盐酸莫西沙星内R-异构体的含量。 关键词 高效液相色谱；盐酸莫西沙星；R-异构体；杂质分离；含量检测
引言 盐酸莫西沙星是临床上常用的一种抗菌药物，有抗菌谱
广、抗菌能力强、半衰期长、疗效好、副作用小及和其他抗菌 药物之间不会形成交叉耐药性等特征，当下在国内实现商品化 的有盐酸莫西沙星片、胶囊及注射液，多用于治疗成人呼吸道 感染，也作为糖尿病、肾损伤患者的一种辅助性药物。从结构 层面上分析，盐酸莫西沙星的分子内存有2个手性中心，有学者 预测其可能存有4种异构体，4S、7S构型是当下临床准许应用的 异构体，但制造阶段可能会引进少许的其他异构体，故而精准分 离异构体与采用适宜的检查方法是很有现实意义的[1]。本文采用 HPLC手性流动相添加剂法拆分异构体，检测相应的含量值。
相色谱仪内，记录相应的色谱图。将峰面积（A：μV×s）、 浓度（C：μg/ml）分别设定为纵、横坐标，以此为据进行线性 回归分析，获得如下的线性方程：A=3. 926×105C-1. 566×105 r=0. 9995
线性范畴是0.55~5.40μg/ml。 2.4 加样回收率试验 称取莫西沙星原药（批号20110612 其内R-异构体含量 0.24%），大概24mg，精准称定，共计8份，依次将其置在50ml 量瓶内，精确投用“系统适用性试验”下的R-异构体储备液 0.5、1.0、1.5mL各3份，添加溶剂溶解并稀释到设计刻度，混 合充分摇均，将其设定成异 构体回收率试验中的测试液。取适量测试液与R—异构体 对照品各10μL，按序注入值液相色谱仪内，依照峰面积，利 用外标法测算出回收率。统计结果发现，低、中、高浓度回收 率（n=3）依次是98.3%、99.7%、99.6%；RSD依次是0.68%、 0.92%、0.83%，平均回收率（n=8)达到了99.3%。 2.5 检测限与定量限 取适量R—异构体对照品溶液，适当稀释处理，进样检 测。当信噪比（S/N）达到3时，检测得到R—异构体的检测限 是1. 1 ng；当信噪比（S/N）是10时，检测出R—异构体的定量 限是3. 5ng[3]。 2.6 进样精密度试验 取适量R—异构体对照品溶液，持续进样6次，检测R—异 构体的峰面积，RSD（n=6）是0.29%。 2.7 溶液稳定性试验 称取原药（批号20110620）25㎎左右，精准定容，将其安 置于50 mL量瓶内，添加适量溶解（超声波助溶）并稀释到设 计刻度，摇匀，将其作为供试品溶液（0.5㎎/mL），考察分析 溶液的稳定性。室温条件下分别安置0h、1h、2h、4h、6h、8h 以后分别进样10μL，记录相应的色谱图，其R—异构体峰面积 的RSD（n=6）对应值是0.94%，提示在室温条件下本溶液持续 放置8h内，依然能维持自身性质的相对稳定性。 2.8 重复性试验 量取相同批次试样（批号20110703），精准量取、定容， 添加事前准备好的溶剂进行溶解及稀释处理，配制出浓度大 概为0.5㎎/ml的6份供试品溶液，分别规范的检测R—异构体含 量。通过结果发现R—异构体含量平均值（n=6）s 0.24%,RSD 是2.6%，提示本课题研究中采用的HPLC法重复性优良。 2.9 测定R—异构体 即称取适量莫西沙星原药，添加试剂溶解及稀释处理， 配制成浓度大概0.5㎎/ml供试品溶液，精准称取以上溶液及
1 仪器和试药 高效液相色谱仪（LC-2010C HT型），其内含有LC-
Solution色谱工作站。 盐酸莫西沙星对照品I（批号：Y0000703，纯度达
99.906%），R-异构体对照品II（批号：20110726，纯度99.820%） 与原药（批号20110612、20110620与20110703）；硫酸铜；L-苯丙 氨酸；选用蒸馏水、甲醇分别作为超纯水、色谱纯。
2 操作方法与结果分析 2.1 配制溶液 对照品II贮备液：准确称取10㎎对照品II，将其安置在
10ml容量瓶内，添加流动相溶解并定容处理，便能配制出1㎎/ ml对照品II贮备液[2]。
供试品溶液：取10㎎原药，置于10ml瓶中，操作方法同上 制得1㎎/ml的供试品溶液。
2.2 色谱条件和适用性试验 Zorbax SB-C18色谱柱（4.5mm×150mm，5μm）；流动 相：手性流动相添加剂溶液（750㎎硫酸铜+991.3㎎ L- 苯丙氨 酸，添加适量蒸馏水溶解并定容到1L）—甲醇（39:11），流速 1.0mL/min，柱温45℃，检测波长293nm；进样量10μL。 量取对照品I、II适量，添加流动相溶解并稀释制备成含 有I 1㎎/ml、II 2μg/ml混合液，将其作为系统适用性试验用溶 液。量取适量对照品II，溶解、稀释制得1μg/ml溶液。取以上 两种溶液作为系统适用性溶液（含有异构体0.5%左右）。称量 10μL以上系统适用性溶液，将其输注至液相色谱仪内，R-异 构体和莫西沙星的留存时间分别是13.8min、16.6min，两者的 分离度是3,.4，基于R-异构体峰进行计量，理论塔板数是4296。 2.3 线性关系分析 称取适量的莫西沙星R—异构体对照品，精准定容，添加 溶剂溶解并稀释制得0. 55、1.10、2.20、2.75、5. 50μg/ml的系 列溶液。准确量取以上系列溶液各10 μL，依次将其输注至液
工业与信息化
TECHNOLOGY AND INFORMATION
HPLC法测定盐酸莫西沙星中R—异构体含量研究
孙江峰 董艳华 张小军 扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司 江苏 泰州 225300
摘 要 建立HPLC法检测盐酸莫西沙星中要R-异构体含量。应用Zorbax SB-C18色谱柱，流动相选择手性流 动相添加剂溶液（3mmol/L硫酸铜+6mmol/L L- 苯丙氨酸）—甲醇（39:11），流速1.0mL/min，柱温45℃，检测 波长设定为293nm；进样量10μL。试验检测发现，S-与R-异构体的分离度是3.4，其中R-异构体的线性范畴是 0.55~5.40μg/ml（r=0.9995），检测限1.1ng，平均回收率（n=8)达到了99.3%。采用HPLC法检测，操作流程简单， 结果精准度较高，适用于检测盐酸莫西沙星内R-异构体的含量。 关键词 高效液相色谱；盐酸莫西沙星；R-异构体；杂质分离；含量检测
引言 盐酸莫西沙星是临床上常用的一种抗菌药物，有抗菌谱
广、抗菌能力强、半衰期长、疗效好、副作用小及和其他抗菌 药物之间不会形成交叉耐药性等特征，当下在国内实现商品化 的有盐酸莫西沙星片、胶囊及注射液，多用于治疗成人呼吸道 感染，也作为糖尿病、肾损伤患者的一种辅助性药物。从结构 层面上分析，盐酸莫西沙星的分子内存有2个手性中心，有学者 预测其可能存有4种异构体，4S、7S构型是当下临床准许应用的 异构体，但制造阶段可能会引进少许的其他异构体，故而精准分 离异构体与采用适宜的检查方法是很有现实意义的[1]。本文采用 HPLC手性流动相添加剂法拆分异构体，检测相应的含量值。