AKTAexplorer标准操作及维护保养规程

1 目的
阐明和规范运用AKTAexplorer蛋白纯化系统。

2 范围
本操作规程适用于AKTAexplorer蛋白纯化系统的操作使用及维护保养。

3 职责
仪器操作人员负责仪器的正确使用，清洁及基本维护。

仪器负责人负责监督和培训其他人员对仪器的正确使用，同时仪器负责人对仪器进行定期维护和保养。

4 引用
4.1 AKTA_Purifier操作手册
4.2 AKTA_explorer 英文操作手册
5 内容
5.1 准备工作
5.1.1 将预先配置好的缓冲液，用0.45微米滤膜过滤，然后进行超声脱气。

5.1.2 将待分离样品用0.45微米滤膜进行过滤。

5.1.3 将对应的管路放入对应的缓冲液。

5.2 启动层析系统
5.2.1 连接好电源打开AKTAexplorer蛋白纯化系统电源，打开电脑点击操作软件。

5. 2.2 排出缓冲液管路气泡
检查进液管路有无气泡，少量气泡可进行泵洗排气，首先将管路滤头放入超纯水中，点击操作软件“system control”中“manual”操作菜单，然后在“pump”中点击“pump wash explorer”同时选择待要排气的管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。

当管路中气泡仍未排除时，“manual”操作菜单中点击“flowpath”选择未排尽气泡管路，点击“execute”，用注射器在对应的泵头上方阀门处抽出气泡，点击“end”。

5. 2.3 排除样品泵管路气泡
将进样管路放进超纯水中，“manual”操作菜单中点击“sample flow”设定流速10-20mL/min，“flowpath”中选择管路，“Alarms”设定样品泵压力0.3MPa，点击“execute”排气结束后点击“end”。

当管路中气泡仍未排除时，用注射器连接在injection valve V1的2号位抽气。

“direct load”设定流速样品才过柱子，在“sample flow”改变流速样品不过柱子。

5.2.4 管路液体置换
将使用的管路放进纯化水中，“manual”操作菜单，然后在“pump”中点击“pump wash
explorer”同时选择管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。

将管路放到对应的缓冲液中，置换成相应的缓冲液。

5.2.5 连接层析柱
连接层析柱若是预装填柱，预先设定一个小的流速1-5mL/min，“pump alarm”设定0.3MPa，先接上面不要太紧，再接柱子下端，拧紧柱子接头检查是否漏液
5.3 手动操作纯化样品
5.3.1 平衡层析柱
通常用上样缓冲液平衡5个柱体积，Manual操作菜单中“pump”设定流速，“flowpath”设定柱位、缓冲液进口、缓冲液流向、废液出口F1，“alarm”设定检测波长、泵压，选择完成点击
“execute”，平衡结束点击“end”。

5.3.2 上样
样品环上样
上样量较少时选择样品环上样，样品环接到injection valve V1的2号位和6号位，注射器抽取上样缓冲液冲洗上样环，冲洗缓冲液从3号位注入，注射器将样品由3号位注入，Manual操作菜单中“flowpath”“Inject valve”选定“inject”，设置好其他参数，选择完成点击“execute”上样结束点击“end”。

样品泵上样
上样量较大时选择样品泵上样，Manual操作菜单中“derict load”设定上样流速、上样量大小，“alarm”设定样品泵泵压，“flowpath”选定进样管路、柱位、流向、废液出口，选择完成点击“execute”，上样结束点击“end”。

5.3.3 方法洗脱及样品收集
5.3.3.1 冲洗未结合样品
用起始缓冲液冲洗未结合到层析柱上的样品，同时将未结合样品收集以备最后结果分析。

5..3.2 样品洗脱和收集
Manual操作菜单中设定好流速、柱位、流向、waste出口选择F2(F2与收集器相连)、缓冲液进口、系统泵压力（通常0.3MPa）、检测波长。

在“pump”中设定“gradient target B 100%”的各项参
数。

“Frc”中设定收集器参数，“Man fraction”选定“serpentine蛇形收集”“Frc size”设定没管收集样品量，选择完成点击“execute”。

5.4 编程操作
柱子平衡、上样、洗脱、收集可采用编程操作，通过运行程序来执行各步骤实验操作。

Method Editor页面点击Method wizard，main selection中选择填料类别，column中选择柱子类型，column position中选择柱位，点击Next设置检测波长及缓冲液进口，点击Next设置Equilibration参数，点击Next设置sample injection 参数通常选择（Manual/Sample direct loading），点击Next设置设置平衡过程中收集器收集流穿样品参数，点击Next设置收集器收集洗脱样品参数，点击Next设置洗脱参数。

变成完毕运行方法进行洗脱。

具体参照：AKTA explorer 方法编辑标准操作规程
6 维护保养
6.1 实验结束时，应先用水置换出所有管路的缓冲液，再用20%乙醇置换出所有管路的水。

应尽可能避免保存在装载缓冲液状态过夜。

尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚，假如不能避
免应于次日尽早用System Wash Method完成以蒸馏水将系统彻底清洗，才予以保存或再
更新使用其它缓冲液再次投入使用进行实验操作。

6.2 任何时间当不使用系统时，不要将pH电极留在流动池里。

电极可作以下处理：从流动池
卸下pH电极。

先以蒸馏水冲洗一遍，轻拭水份后，使其末端以其合适溶液泡浸保存。

6.3 若长时间不使用系统，除用蒸馏水彻底清洗系统外。

取下柱和pH电极通过细管道替
换柱，并安装虚拟pH电极（如果使用）。

然后用20%乙醇再冲洗所有使用的管件通道和
所有的流动池一遍，然后并以此将系统保存。

UV流动池也可以如上所述地用蒸馏水冲
洗然后用20%乙醇通过流动池。

6.4 每月定期保养处理或当发现假峰等问题出现时，可拆下柱子将所有的缓冲液入口管件
置于0.5mol NaOH中，对所有的入口管件通路运行System Wash Method，以流速为每分
钟5毫升流速，将整个系统充分冲洗若60分钟。

然后立即用超纯水，将整个系统运行 System Wash Method加以冲洗20分钟。

6.5 当收集器托盘或收集用的管子发生变化时，应及时调整运行程序中的相应参数，以免
造成跳管或收集体积错误情况发生。

6.6 注意要保持实验环境的清洁，以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的
损坏。

6.7 各种缓冲液应现用现配，配好的缓冲液应过滤和脱气，新配的乙醇必须脱气。

缓冲液和水不应放置时间太长，防止沉淀和长菌，缓冲液容器要定时清洗。

6.8 清洗泵头循环使用的20%乙醇，每周应更换一次。

7 其他
无。