隐球菌抗原检测的临床意义讲义
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? 由3种不同的单糖聚合而成 ? 是引起病理变化的主要毒性因子 ? 在菌体生长和繁殖过程中，GXM不断分 泌到胞外 ? 通过发挥免疫抑制作用和免疫调理作用影 响宿主免疫系统
荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据
一瑞生物
Oscar Zaragoza, etc..Adv Appl Microbiol. 2009, 68: 133–216
1
1
9
8
IMMY 乳胶凝集法
28
47
380
62
ELISA
28
23
>2,000
770
其他厂家乳胶凝集法
19
37
940
54
灵敏度远远高于其他方法
一瑞生物
TR Kozel, Clin. Vaccine Immunol. (2011) 18:1292 TR Kozel, 8th International Conference on Cryptococcus and Cryptococcosis (2011)
一瑞生物
临床意义
筛查了HIV感染病人 进行隐球菌抗原预防的 成本效益，使用隐球菌 抗原可以显著降低成本
一瑞生物
临床意义
? 荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染 确诊的依据。
? 在感染的初期，荚膜多糖抗原就被检测到，因此是隐 球菌病早期诊断的标志物。
? 随着病情的发展，荚膜多糖抗原的含量会随之发生变 化，还可作为病情监测的指标。
? 免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等
新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群， 如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。
一瑞生物
临床意义
? 在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患 者死亡的一种重要疾病，隐球菌抗原可以在病症发生的几 周前被检测到。 ? 隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极 的作用。
? 肺隐球菌病-呼吸科
肺部是隐球菌侵入的门户
一瑞生物
适用科室及临床意义
? 皮肤黏膜隐球菌病-皮肤科
10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、 脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱 等症状。
? 儿童脑膜炎-儿科
儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊 液样本都会做隐球菌筛查
? HIV感染者 ? 器官移植患者 ? 接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单
抗、英夫利昔单抗）和 /或其他免疫抑制剂治疗 的患者 ? 其他无基础疾病的患者
一瑞生物
John R. Perfect, etc. Clinical Infectious Diseases 2010; 50:291–322
流行病学
? 随着AIDS 患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为 继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV 中的感染率已达8.5% 。
? 隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30% ， 在发展中国家可达 到50-100% 。
? 早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球 菌性脑膜炎时，死亡率可达到20% 。
3. 抗原检测试验： 脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*， 能实现早期快速诊断
一瑞生物
* Tyler Warkentien, MD. Int J STD AIDS. 2010 October ; 21(10): 679–684.
隐球菌荚膜多糖抗原
隐球菌荚膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GXM) ：
特点
? 无需样本预处理 ? 10分钟得到结果 ? 定性或半定量测定 ? 结果客观 ? 血清，脑脊液，血浆
一瑞生物
样本收集及制备
? 按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。 ?样本最多可以在 2-8℃放置 72 小时。 ?不反复冻融的情况下，样本可以在 -20℃以下
保存更长时间。 ?样本在运输过程中应保持在 2-8℃或者-20℃以
一瑞生物
下。
一瑞生物
定性检测操作步骤
? 简单 5步， 10 分钟得到结果
一瑞生物
定性检测结果
注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。
一瑞生物
半定量检测操作步骤
? 1、以 1:5 作为初始稀释浓度，依次 1:2 稀释至 1:2560 。 分别放置于10 个微离 心管中并编号1-10 。
? 2、向 1 号试管中加入 4 滴样本稀释液。 ? 3、分别向标号 2-10 的试管中加入 2 滴滴定液。 ? 4、将 40 μL 样本加入 1 号试管并混匀。 ? 5、从 1 号试管中吸取 80 μL 样本混合液转移至 2 号试管并混匀，依次进行稀释
灵敏度
胶体金法试剂盒 95.83%
墨汁染色
86.39%
真菌培养
60.72%
特异性 99.84% 100.00% 100.00%
一瑞生物
CrAg LFA package insert (IMMY)
胶体金法和ELISA/ 乳胶凝集法对比
IMM抗原/ml)
A
B
C
D
(新型隐球菌) (哥特隐球菌) (哥特隐球菌) (新型隐球菌)
检测的临床 意义
一 隐球菌病感染诊断现状
二 产品介绍 三 适用科室及临床意义 四 相关标准
一瑞生物
简介
? 隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内 有反光孢子，但无菌丝。
? 隐球菌属已知有37个不同的种，但具 致病性的多为新型隐球菌，其特点是 菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。
? 新型隐球菌主要包括新生变种、格特 变种等
一瑞生物
适用科室及临床意义
? 中枢神经系统隐球菌病-神经内科
隐球菌侵犯中枢神经系统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、 散播型脑膜炎等。
临床症状：首发症状间歇性头痛、恶心及呕吐，伴低 热、周身不适、精神不振等非特异性症状。随病情发展 ，头痛渐加重转为持续性、精神异常、躁动不安，严重 者出现不同程度意识障碍。
一 隐球菌病感染诊断现状
二 产品介绍
三 临床意义及适用科室 四 相关标准
一瑞生物
隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理
一瑞生物
隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）
?试剂盒组成
?隐球菌抗原检测试纸条 50条
?样本稀释液 ?滴定液 ?阳性对照
? 稳定性 /储存方法
?2年有效期 ?室温储存
一瑞生物
一瑞生物
质量控制
?阳性对照：将 1 滴样本稀释液加入试管中，再加 入 1 滴隐球菌抗原阳性对照。
?阴性对照为：将 2 滴样本稀释液加入试管中。 ?分别插入试纸条， 10 分钟后读取结果。
? 依据本地、国家的法规及认证机构的指导方针或 要求，可能需要做额外的质控检测。
一瑞生物
胶体金法和培养/墨汁染色对比
早期、快速、准确地诊断很有必要
一瑞生物
现有检测手段
? 墨汁染色（菌体） ? 真菌培养（活菌） ?ELISA （荚膜多糖抗原） ? 乳胶凝集法（荚膜多糖抗原） ?胶体金法 （荚膜多糖抗原）
一瑞生物
现有检测手段
1. 印度墨汁染色： 敏感性差，阳性检出率很低
2. 脑脊液或血液培养（金标准）： 阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊
隐球菌抗原分布
无症状 肺部
肺以外
症状 脑膜炎
脑脊液 血液
感染 一瑞生物
隐球菌抗原检测 的其他方法
时间
胶体金法
Adapted from Kozel and Bauman, Expert Opin. Med. Diagn. (2012) 6:245
胶体金法和乳胶凝集法对比
检测时间 样品预处理
样品类型 储存
隐球菌和接合菌包括毛霉菌根霉菌等荚膜很厚不易被吞噬细胞消化联合检测的意义一瑞生物联合检测的意义一瑞生物隐球菌病感染诊断现状一瑞生物收录指南共识中声明隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球菌病的的确诊证据之一一瑞生物资质认证一瑞生物物价标准2014年版一瑞生物物价标准2014年版一瑞生物谢谢大家
隐球菌抗原
胶体金法 10 分钟
无需
乳胶凝集法 长达60分钟 需要(蛋白酶处理血清)
血清, 脑脊液, 血浆 室温
血清和脑脊液 冷藏
一瑞生物
一 隐球菌病感染诊断现状 二 产品介绍
三 适用科室及临床意义
四 相关标准
一瑞生物
适用科室及临床意义
新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在 中枢神经系统、肺部、皮肤等。
一瑞生物
联合检测的意义
G实验： ? 检测真菌细胞壁特有成分1,3-β-D-葡聚糖 ? 吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-β-D-葡聚糖到血液 ? 不能检测到的真菌：隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、
根霉菌等） G实验检测隐球菌为阴性结果的原因： ? 隐球菌含1,3-β-D-葡聚糖的量少 ? 荚膜很厚，不易被吞噬细胞消化
一瑞生物
流行病学
? 38个 ICUs of 27 个意大利医院 ? 384 例真菌感染 (318 例侵袭性念
珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐 球菌感染)
一瑞生物
Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 73–79.
宿主因素
美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（ 2010 年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：
直至 10 号试管。 ? 6、10 号试管中吸取 80 μL 样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为 80 μL。 ? 7、将试纸条的白端分别没入试管中。 ? 8、等待 10 分钟，读取并记录实验结果。
一瑞生物
半定量检测操作步骤
一瑞生物
半定量检测操作步骤-2
一瑞生物
半定量检测(滴度)结果
对于半定量滴定检测，患者的滴度应 报告为产生阳性结果的最高稀释度。
一瑞生物
联合检测的意义
一瑞生物
一 隐球菌病感染诊断现状 二 产品介绍 三 适用科室及临床意义
四 相关标准
一瑞生物
收录指南
共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性 隐球菌病的的确诊证据之一
一瑞生物
资质认证
一瑞生物
物价标准（2014年版）
一瑞生物
物价标准（2014年版）
一瑞生物
谢谢大家
荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据
一瑞生物
Oscar Zaragoza, etc..Adv Appl Microbiol. 2009, 68: 133–216
1
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9
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IMMY 乳胶凝集法
28
47
380
62
ELISA
28
23
>2,000
770
其他厂家乳胶凝集法
19
37
940
54
灵敏度远远高于其他方法
一瑞生物
TR Kozel, Clin. Vaccine Immunol. (2011) 18:1292 TR Kozel, 8th International Conference on Cryptococcus and Cryptococcosis (2011)
一瑞生物
临床意义
筛查了HIV感染病人 进行隐球菌抗原预防的 成本效益，使用隐球菌 抗原可以显著降低成本
一瑞生物
临床意义
? 荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染 确诊的依据。
? 在感染的初期，荚膜多糖抗原就被检测到，因此是隐 球菌病早期诊断的标志物。
? 随着病情的发展，荚膜多糖抗原的含量会随之发生变 化，还可作为病情监测的指标。
? 免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等
新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群， 如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。
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临床意义
? 在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患 者死亡的一种重要疾病，隐球菌抗原可以在病症发生的几 周前被检测到。 ? 隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极 的作用。
? 肺隐球菌病-呼吸科
肺部是隐球菌侵入的门户
一瑞生物
适用科室及临床意义
? 皮肤黏膜隐球菌病-皮肤科
10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、 脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱 等症状。
? 儿童脑膜炎-儿科
儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊 液样本都会做隐球菌筛查
? HIV感染者 ? 器官移植患者 ? 接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单
抗、英夫利昔单抗）和 /或其他免疫抑制剂治疗 的患者 ? 其他无基础疾病的患者
一瑞生物
John R. Perfect, etc. Clinical Infectious Diseases 2010; 50:291–322
流行病学
? 随着AIDS 患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为 继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV 中的感染率已达8.5% 。
? 隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30% ， 在发展中国家可达 到50-100% 。
? 早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球 菌性脑膜炎时，死亡率可达到20% 。
3. 抗原检测试验： 脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*， 能实现早期快速诊断
一瑞生物
* Tyler Warkentien, MD. Int J STD AIDS. 2010 October ; 21(10): 679–684.
隐球菌荚膜多糖抗原
隐球菌荚膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GXM) ：
特点
? 无需样本预处理 ? 10分钟得到结果 ? 定性或半定量测定 ? 结果客观 ? 血清，脑脊液，血浆
一瑞生物
样本收集及制备
? 按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。 ?样本最多可以在 2-8℃放置 72 小时。 ?不反复冻融的情况下，样本可以在 -20℃以下
保存更长时间。 ?样本在运输过程中应保持在 2-8℃或者-20℃以
一瑞生物
下。
一瑞生物
定性检测操作步骤
? 简单 5步， 10 分钟得到结果
一瑞生物
定性检测结果
注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。
一瑞生物
半定量检测操作步骤
? 1、以 1:5 作为初始稀释浓度，依次 1:2 稀释至 1:2560 。 分别放置于10 个微离 心管中并编号1-10 。
? 2、向 1 号试管中加入 4 滴样本稀释液。 ? 3、分别向标号 2-10 的试管中加入 2 滴滴定液。 ? 4、将 40 μL 样本加入 1 号试管并混匀。 ? 5、从 1 号试管中吸取 80 μL 样本混合液转移至 2 号试管并混匀，依次进行稀释
灵敏度
胶体金法试剂盒 95.83%
墨汁染色
86.39%
真菌培养
60.72%
特异性 99.84% 100.00% 100.00%
一瑞生物
CrAg LFA package insert (IMMY)
胶体金法和ELISA/ 乳胶凝集法对比
IMM抗原/ml)
A
B
C
D
(新型隐球菌) (哥特隐球菌) (哥特隐球菌) (新型隐球菌)
检测的临床 意义
一 隐球菌病感染诊断现状
二 产品介绍 三 适用科室及临床意义 四 相关标准
一瑞生物
简介
? 隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内 有反光孢子，但无菌丝。
? 隐球菌属已知有37个不同的种，但具 致病性的多为新型隐球菌，其特点是 菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。
? 新型隐球菌主要包括新生变种、格特 变种等
一瑞生物
适用科室及临床意义
? 中枢神经系统隐球菌病-神经内科
隐球菌侵犯中枢神经系统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、 散播型脑膜炎等。
临床症状：首发症状间歇性头痛、恶心及呕吐，伴低 热、周身不适、精神不振等非特异性症状。随病情发展 ，头痛渐加重转为持续性、精神异常、躁动不安，严重 者出现不同程度意识障碍。
一 隐球菌病感染诊断现状
二 产品介绍
三 临床意义及适用科室 四 相关标准
一瑞生物
隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理
一瑞生物
隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）
?试剂盒组成
?隐球菌抗原检测试纸条 50条
?样本稀释液 ?滴定液 ?阳性对照
? 稳定性 /储存方法
?2年有效期 ?室温储存
一瑞生物
一瑞生物
质量控制
?阳性对照：将 1 滴样本稀释液加入试管中，再加 入 1 滴隐球菌抗原阳性对照。
?阴性对照为：将 2 滴样本稀释液加入试管中。 ?分别插入试纸条， 10 分钟后读取结果。
? 依据本地、国家的法规及认证机构的指导方针或 要求，可能需要做额外的质控检测。
一瑞生物
胶体金法和培养/墨汁染色对比
早期、快速、准确地诊断很有必要
一瑞生物
现有检测手段
? 墨汁染色（菌体） ? 真菌培养（活菌） ?ELISA （荚膜多糖抗原） ? 乳胶凝集法（荚膜多糖抗原） ?胶体金法 （荚膜多糖抗原）
一瑞生物
现有检测手段
1. 印度墨汁染色： 敏感性差，阳性检出率很低
2. 脑脊液或血液培养（金标准）： 阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊
隐球菌抗原分布
无症状 肺部
肺以外
症状 脑膜炎
脑脊液 血液
感染 一瑞生物
隐球菌抗原检测 的其他方法
时间
胶体金法
Adapted from Kozel and Bauman, Expert Opin. Med. Diagn. (2012) 6:245
胶体金法和乳胶凝集法对比
检测时间 样品预处理
样品类型 储存
隐球菌和接合菌包括毛霉菌根霉菌等荚膜很厚不易被吞噬细胞消化联合检测的意义一瑞生物联合检测的意义一瑞生物隐球菌病感染诊断现状一瑞生物收录指南共识中声明隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球菌病的的确诊证据之一一瑞生物资质认证一瑞生物物价标准2014年版一瑞生物物价标准2014年版一瑞生物谢谢大家
隐球菌抗原
胶体金法 10 分钟
无需
乳胶凝集法 长达60分钟 需要(蛋白酶处理血清)
血清, 脑脊液, 血浆 室温
血清和脑脊液 冷藏
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一 隐球菌病感染诊断现状 二 产品介绍
三 适用科室及临床意义
四 相关标准
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适用科室及临床意义
新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在 中枢神经系统、肺部、皮肤等。
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联合检测的意义
G实验： ? 检测真菌细胞壁特有成分1,3-β-D-葡聚糖 ? 吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-β-D-葡聚糖到血液 ? 不能检测到的真菌：隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、
根霉菌等） G实验检测隐球菌为阴性结果的原因： ? 隐球菌含1,3-β-D-葡聚糖的量少 ? 荚膜很厚，不易被吞噬细胞消化
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流行病学
? 38个 ICUs of 27 个意大利医院 ? 384 例真菌感染 (318 例侵袭性念
珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐 球菌感染)
一瑞生物
Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 73–79.
宿主因素
美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（ 2010 年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：
直至 10 号试管。 ? 6、10 号试管中吸取 80 μL 样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为 80 μL。 ? 7、将试纸条的白端分别没入试管中。 ? 8、等待 10 分钟，读取并记录实验结果。
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半定量检测操作步骤
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半定量检测操作步骤-2
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半定量检测(滴度)结果
对于半定量滴定检测，患者的滴度应 报告为产生阳性结果的最高稀释度。
一瑞生物
联合检测的意义
一瑞生物
一 隐球菌病感染诊断现状 二 产品介绍 三 适用科室及临床意义
四 相关标准
一瑞生物
收录指南
共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性 隐球菌病的的确诊证据之一
一瑞生物
资质认证
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物价标准（2014年版）
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物价标准（2014年版）
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