HPLC法测定小儿清热化痰栓中黄芩苷的含量
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科 技论 坛
ＨＰ Ｌ Ｃ法测定小儿清热化痰栓 中黄芩苷 的含量
卢德刚 （ 哈 尔滨三联药业有限公 司， 黑龙江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ２ ５ ）
摘 要： 目的 ： 建立一种高效液相 色谱 法测定小儿清热化 痰栓 中黄芩苷 的含 量。方法 ： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以甲醇 一 水 一磷 酸 （ ４ ７ ： ５ ３ ： ０ ． ２ ）为流动 相 ；流速 为 １ ． ０ ｍｌ ／ ｍ ｉ ｎ ；检测 波长 为 ２ ７ ６ ｎ ｍ。结 果 ：黄芩 苷 与其 它成分分 离良好 ，在 １ １ ． ２ ８ ｇ ／ ｍ ｌ ～ １ ０ １ ． ５ ２ Ｉ ａ ， ｇ ／ ｍｌ 浓度 范围 内， 黄芩苷浓度与峰 面积呈 良好的 线性 关 系； 平均加 样回收率为 ９ ８ ． ８ ％， Ｉ Ｌ Ｓ Ｄ为０ ． ６ ９ ％； 中间精 密度试验 不 同分析 人 员之间的 Ｒ ， Ｓ Ｄ为 １ ． ７ １ ％， 小于 ３ ． ０ ％； 样品溶液在 １ ０小时 内稳 定； 重复性 Ｒ ． Ｓ Ｄ为 １ ． ２ ２ ％， 小于 ３ ． Ｏ ％。结论 ： 该方法简便 、 快速、 准确 ， 可以 作为小儿清热化痰栓 中黄芩苷的含量测定方法。 关键词 ： 小儿清热化痰栓 ； 黄芩苷 ； 高效液相 色 谱 法 ｔ ｌ ， ， Ｊ Ｉ ， 清热化 痰栓为部颁标准 ｗｓ ｒＢ 一 ３ ７ ５ ６ — ９ ８收 载的品 种， 原标 准中没有含量测定项 ， 为更好地控制产 品质量 ， 参考 《 中国药典 ） ２ Ｏ Ｌ Ｏ 年版一部黄芩 中黄芩苷 的含量测定方法 ， 对 本 品中黄芩苷含量进行 了相关研究 ， 拟采用高效液相色谱法 测定其含量 ， 并对测定方法进行考察。
１仪器与试药 １ ． １仪器 ： 岛津 高效液相 色谱仪 ， 泵： Ｌ Ｃ 一 １ ０ Ａ Ｔ， 检测器 ： Ｓ Ｐ Ｄ 一 １ ０ Ａ， 工作站 ： Ｎ ２ ０ ０ ０双通道色谱工作 站。 １ ． ２试药 ： 黄芩苷对 照品（ 中国药品生物制 品检定所 ， 供 ‘ ’ ＿馆 ¨ ’ ‘ 协 嚣 含量测定 用 ， 批 号为 １ １ ０ ７ １ ５ — ２ ０ ０ ５ １ ４ ） ； 甲醇（ 色谱纯） ， 重蒸馏 。 ‘ ‘ 砷 ｔ ２ ” 博 ” 尊 ，∞ 轮 冀 暮 肄 ’ Ｉ 茹 盎 嚣 水， 其余试剂为分析纯。 图 １ 空 白溶 剂 图 ２ 阴性 ２ 方 法 ２ ． １色谱条件 ： 用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂 ； 甲醇 水 一磷酸 （ ４ ７ ： ５ ３ ： ０ ． ２ ） 为 流动相 ； 流 速为 １ ． ０ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ ； 检测 波 长为 ２ ７ ６ ｎ ｍ； 进样量 １ ０ ｌ 。 ２ ． ２溶液制备 ：对照 品溶液的制备 ：取黄芩苷对照品适 量， 精密 称定 ， 加７ ０ ％乙醇制成 每 ｈ ｉ ｄ约含 ５ ０ ｕ ｇ的溶 液 ， 作 为对照 品溶液。 供试 品溶液 的制 备 ： 取小儿 清热化痰 栓切碎 ， 取０ ． １ ２ ｇ ， 置 １ ０ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加７ ０ ％乙醇适量 ， 置温水 浴 中并振 摇使溶 解， 超声 １ ０分钟 ， 放 置至室 温 ， 加 ７ ０ ％乙醇稀 释至刻 度 ， 摇 匀， 滤过 ， 取续滤液 ，作为供试 品溶液 。 ‘ ’ 惦 “ Ｉ Ｉ 协 糖 ’‘ 籍 尊 。 ¨ ¨ ㈣ ” 幡 ’ Ｉ 卫 肆 譬 ∞ ¨ 取不含黄芩 的阴性样品 ， 同法制备阴性溶液 。 图 ３黄芩苷对照品 图 ４ 供 试 品 ３ 方 法 学 ３ ． １ 检 测 波 长 的 确 定 ：取 黄 芩 苷 对 照 品 溶 液 ， 于 ３ ． ５中间精密度试验 ： 取 同一批小儿清热化痰栓样 品， 由不 同分 １ ９ ０ — ６ ０ ０ ｎ ｍ波 长范 围内进 行紫 外扫 描 ，结 果黄 芩苷 在 ３ １ ６ ． ９ ｎ ｍ、 析人员于不同时间按上法测定含量 ， Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ７ １ ％； 小于 ３ ． ０ ％。 ２ ７ ５ ． ９ ｎ ｍ、 ２ ４ ３ ． ０ ｎ ｍ、 ２ １ ３ ． １ ｎ ｍ和 ２ １ ２ ． １ ｎ ｍ均有最大吸收峰 ；从溶 剂背 ３ ． ６ 溶 液稳定性试验 ： 取ｔ ｂ Ｊ Ｌ ， 清热化痰栓按上法制 备样 品溶液 ， 景吸收 、 方法灵敏度 和系统稳定性综合考虑 ， 选择 吸收值较大且无 分 别 于 ０ 、 ２ 录 黄 芩 苷 峰 面 积 ， Ｒ Ｓ Ｄ 为 溶剂背景干扰 的 ２ ７ ６ ｎ ｍ作为检测波长。 １ ． ０ ８ ％， 小于 ３ ． ０ ％， 样 品溶液在 １ ０ 小时 内稳定。 ３ ． ２ 专属性试验 ： 按“ ２ ． ２溶液制 备” 的方法 分别制备 对照 品溶 ３ ． ７重复性 ：取小儿清热化 痰栓切碎 ，分 别取 ０ ． ０ ９ ６ ｇ 、 ０ ． １ ２ ｇ和 液、 供试 品溶液和阴性样 品溶液 ， 并以 ７ ０ ％乙醇作为空 白溶剂 ； 分别 ０ ． １ ４ ４ ｇ各三份 ， 精 密称定 ， 分别置 １ ０ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 ７ ０ ％乙醇适量 ， 精密吸取空 白溶剂 、阴性样 品溶 液 、对照品溶液 和供试 品溶 液各 置 温水浴 中并振摇使溶解 ， 超声 １ Ｏ分钟 ， 放置至室温 ， 加７ ０ ％乙醇 ｌ Ｏ ｌ ， 注人液相色谱仪进行测定 。结果小儿清热化痰栓黄芩苷阴性 稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 滤过 ， 取续滤液 ， 作为供试 品溶液 ， 测定黄芩苷的 在１ ０ ｍｉ ｎ 左 右没有吸收峰 ， 溶剂空 白无干扰 ， 专属性 良好。图谱如图 含 量 。九个供 试品含量 的含量 分别为 ： ４ ７ ． ３ ７ ｍ ｇ ， 粒、 ４ ７ ． ０ ９ ａ ｒ ｇ ／ 粒、 １ － ４所 示 。 ４ ８ ． ４ ５ ａ ｒ ｇ ／ 粒、 ４ ７ ． １ ２ ｍｇ ／ 粒、 ４ ７ ． ０ ３ ａｇ ｒ ／ 粒、 ４ ７ ． ８ １ ｍｇ ／ 粒、 ４ ７ ． １ ８ ｍ 粒 、 ３ ． ３线性试 验 ： 取黄芩 苷对 照品 ５ ｍ ｇ ， 精密 称定 ， 置１ ０ ｍ ｌ 量 瓶 ４ ７ ． ２ ７ ｍｇ ／ 粒、 ４ ６ ． ３ ４ ｍ ｇ ／ 粒， Ｒ Ｓ Ｄ ％为 １ ． ２ ２ ％， 含量 测定重复性 良好 。 中，加 ７ ０ ％乙醇溶解并 稀释至刻度 ，摇 匀 。分别精 密量取 ０ ． ２ ｍ ｌ 、 结果见表 １ ． ０ ． ５ ｍｌ 、 ０ ． ８ ｍ ｌ 、 １ ． ０ ｍ ｌ 、 １ ． ５ ｍｌ 和１ ． ８ ｍ ｌ 置１ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加７ ０ ％乙醇稀释 ４ 样品含量 测定
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ＨＰ Ｌ Ｃ法测定小儿清热化痰栓 中黄芩苷 的含量
卢德刚 （ 哈 尔滨三联药业有限公 司， 黑龙江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ２ ５ ）
摘 要： 目的 ： 建立一种高效液相 色谱 法测定小儿清热化 痰栓 中黄芩苷 的含 量。方法 ： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以甲醇 一 水 一磷 酸 （ ４ ７ ： ５ ３ ： ０ ． ２ ）为流动 相 ；流速 为 １ ． ０ ｍｌ ／ ｍ ｉ ｎ ；检测 波长 为 ２ ７ ６ ｎ ｍ。结 果 ：黄芩 苷 与其 它成分分 离良好 ，在 １ １ ． ２ ８ ｇ ／ ｍ ｌ ～ １ ０ １ ． ５ ２ Ｉ ａ ， ｇ ／ ｍｌ 浓度 范围 内， 黄芩苷浓度与峰 面积呈 良好的 线性 关 系； 平均加 样回收率为 ９ ８ ． ８ ％， Ｉ Ｌ Ｓ Ｄ为０ ． ６ ９ ％； 中间精 密度试验 不 同分析 人 员之间的 Ｒ ， Ｓ Ｄ为 １ ． ７ １ ％， 小于 ３ ． ０ ％； 样品溶液在 １ ０小时 内稳 定； 重复性 Ｒ ． Ｓ Ｄ为 １ ． ２ ２ ％， 小于 ３ ． Ｏ ％。结论 ： 该方法简便 、 快速、 准确 ， 可以 作为小儿清热化痰栓 中黄芩苷的含量测定方法。 关键词 ： 小儿清热化痰栓 ； 黄芩苷 ； 高效液相 色 谱 法 ｔ ｌ ， ， Ｊ Ｉ ， 清热化 痰栓为部颁标准 ｗｓ ｒＢ 一 ３ ７ ５ ６ — ９ ８收 载的品 种， 原标 准中没有含量测定项 ， 为更好地控制产 品质量 ， 参考 《 中国药典 ） ２ Ｏ Ｌ Ｏ 年版一部黄芩 中黄芩苷 的含量测定方法 ， 对 本 品中黄芩苷含量进行 了相关研究 ， 拟采用高效液相色谱法 测定其含量 ， 并对测定方法进行考察。
１仪器与试药 １ ． １仪器 ： 岛津 高效液相 色谱仪 ， 泵： Ｌ Ｃ 一 １ ０ Ａ Ｔ， 检测器 ： Ｓ Ｐ Ｄ 一 １ ０ Ａ， 工作站 ： Ｎ ２ ０ ０ ０双通道色谱工作 站。 １ ． ２试药 ： 黄芩苷对 照品（ 中国药品生物制 品检定所 ， 供 ‘ ’ ＿馆 ¨ ’ ‘ 协 嚣 含量测定 用 ， 批 号为 １ １ ０ ７ １ ５ — ２ ０ ０ ５ １ ４ ） ； 甲醇（ 色谱纯） ， 重蒸馏 。 ‘ ‘ 砷 ｔ ２ ” 博 ” 尊 ，∞ 轮 冀 暮 肄 ’ Ｉ 茹 盎 嚣 水， 其余试剂为分析纯。 图 １ 空 白溶 剂 图 ２ 阴性 ２ 方 法 ２ ． １色谱条件 ： 用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂 ； 甲醇 水 一磷酸 （ ４ ７ ： ５ ３ ： ０ ． ２ ） 为 流动相 ； 流 速为 １ ． ０ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ ； 检测 波 长为 ２ ７ ６ ｎ ｍ； 进样量 １ ０ ｌ 。 ２ ． ２溶液制备 ：对照 品溶液的制备 ：取黄芩苷对照品适 量， 精密 称定 ， 加７ ０ ％乙醇制成 每 ｈ ｉ ｄ约含 ５ ０ ｕ ｇ的溶 液 ， 作 为对照 品溶液。 供试 品溶液 的制 备 ： 取小儿 清热化痰 栓切碎 ， 取０ ． １ ２ ｇ ， 置 １ ０ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加７ ０ ％乙醇适量 ， 置温水 浴 中并振 摇使溶 解， 超声 １ ０分钟 ， 放 置至室 温 ， 加 ７ ０ ％乙醇稀 释至刻 度 ， 摇 匀， 滤过 ， 取续滤液 ，作为供试 品溶液 。 ‘ ’ 惦 “ Ｉ Ｉ 协 糖 ’‘ 籍 尊 。 ¨ ¨ ㈣ ” 幡 ’ Ｉ 卫 肆 譬 ∞ ¨ 取不含黄芩 的阴性样品 ， 同法制备阴性溶液 。 图 ３黄芩苷对照品 图 ４ 供 试 品 ３ 方 法 学 ３ ． １ 检 测 波 长 的 确 定 ：取 黄 芩 苷 对 照 品 溶 液 ， 于 ３ ． ５中间精密度试验 ： 取 同一批小儿清热化痰栓样 品， 由不 同分 １ ９ ０ — ６ ０ ０ ｎ ｍ波 长范 围内进 行紫 外扫 描 ，结 果黄 芩苷 在 ３ １ ６ ． ９ ｎ ｍ、 析人员于不同时间按上法测定含量 ， Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ７ １ ％； 小于 ３ ． ０ ％。 ２ ７ ５ ． ９ ｎ ｍ、 ２ ４ ３ ． ０ ｎ ｍ、 ２ １ ３ ． １ ｎ ｍ和 ２ １ ２ ． １ ｎ ｍ均有最大吸收峰 ；从溶 剂背 ３ ． ６ 溶 液稳定性试验 ： 取ｔ ｂ Ｊ Ｌ ， 清热化痰栓按上法制 备样 品溶液 ， 景吸收 、 方法灵敏度 和系统稳定性综合考虑 ， 选择 吸收值较大且无 分 别 于 ０ 、 ２ 录 黄 芩 苷 峰 面 积 ， Ｒ Ｓ Ｄ 为 溶剂背景干扰 的 ２ ７ ６ ｎ ｍ作为检测波长。 １ ． ０ ８ ％， 小于 ３ ． ０ ％， 样 品溶液在 １ ０ 小时 内稳定。 ３ ． ２ 专属性试验 ： 按“ ２ ． ２溶液制 备” 的方法 分别制备 对照 品溶 ３ ． ７重复性 ：取小儿清热化 痰栓切碎 ，分 别取 ０ ． ０ ９ ６ ｇ 、 ０ ． １ ２ ｇ和 液、 供试 品溶液和阴性样 品溶液 ， 并以 ７ ０ ％乙醇作为空 白溶剂 ； 分别 ０ ． １ ４ ４ ｇ各三份 ， 精 密称定 ， 分别置 １ ０ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 ７ ０ ％乙醇适量 ， 精密吸取空 白溶剂 、阴性样 品溶 液 、对照品溶液 和供试 品溶 液各 置 温水浴 中并振摇使溶解 ， 超声 １ Ｏ分钟 ， 放置至室温 ， 加７ ０ ％乙醇 ｌ Ｏ ｌ ， 注人液相色谱仪进行测定 。结果小儿清热化痰栓黄芩苷阴性 稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 滤过 ， 取续滤液 ， 作为供试 品溶液 ， 测定黄芩苷的 在１ ０ ｍｉ ｎ 左 右没有吸收峰 ， 溶剂空 白无干扰 ， 专属性 良好。图谱如图 含 量 。九个供 试品含量 的含量 分别为 ： ４ ７ ． ３ ７ ｍ ｇ ， 粒、 ４ ７ ． ０ ９ ａ ｒ ｇ ／ 粒、 １ － ４所 示 。 ４ ８ ． ４ ５ ａ ｒ ｇ ／ 粒、 ４ ７ ． １ ２ ｍｇ ／ 粒、 ４ ７ ． ０ ３ ａｇ ｒ ／ 粒、 ４ ７ ． ８ １ ｍｇ ／ 粒、 ４ ７ ． １ ８ ｍ 粒 、 ３ ． ３线性试 验 ： 取黄芩 苷对 照品 ５ ｍ ｇ ， 精密 称定 ， 置１ ０ ｍ ｌ 量 瓶 ４ ７ ． ２ ７ ｍｇ ／ 粒、 ４ ６ ． ３ ４ ｍ ｇ ／ 粒， Ｒ Ｓ Ｄ ％为 １ ． ２ ２ ％， 含量 测定重复性 良好 。 中，加 ７ ０ ％乙醇溶解并 稀释至刻度 ，摇 匀 。分别精 密量取 ０ ． ２ ｍ ｌ 、 结果见表 １ ． ０ ． ５ ｍｌ 、 ０ ． ８ ｍ ｌ 、 １ ． ０ ｍ ｌ 、 １ ． ５ ｍｌ 和１ ． ８ ｍ ｌ 置１ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加７ ０ ％乙醇稀释 ４ 样品含量 测定