2020版《中国药典》通则0512HPLC如何优化色谱方法

2020版《中国药典》通则0512HPLC如何优化⾊谱⽅法
2020版《中国药典》通则0512 HPLC 如何优化⾊谱⽅法随着超⾼效液相技术（⼩粒径⾊谱柱的应⽤）的发展，药典在适应新技术的使⽤，指导企业如何去优化⽅法，达到缩短分析时间、节省流动相的⽬的。

今天，我们⼀起来分析在保持与现有⽅法相似的分离效果的前提下，如何选择合适的⾊谱柱和相应的⾊谱参数。

⼀、2020版药典与2015版药典0512参数调整对⽐
表1：2020版药典与2015版药典0512参数调整对⽐
（其余参数，如流动相⽐例、缓冲盐浓度、柱温、pH等改变，本⽂不涉及，此处不细说）上表1中A/B/C三项，扩充了⾊谱柱的选择范围，⽽D/E/F则针对具体的每⼀个参数调整提供计算⽅式。

下⾯，我们⽤具体的案例进⾏推导。

⼆、案例推导
1、改变柱长L和粒径dp
假设当前⼀个⾊谱⽅法为：
⽬标：保持分离度R基本不变，缩短分析时间和流动相。

过程：根据公式1：
其中，k为保留因⼦，α为选择因⼦。

当⾊谱柱固定相、流动相的组成及⽐例、柱温不变，则α和k不变。

因此，分离度R仅与理论塔板数N相关。

⽽N∝L/dp（正⽐），只要保持L/dp基本不变，则R基本不变。

当前⾊谱柱Column1的L1/dp1=250/5=50，所以需要从当前市场上常⽤的⾊谱柱中选择L/dp≈50的⾊谱柱，例如柱长为
100mm，粒径dp为1.8µm的⾊谱柱，则L2/dp2=100/1.8=56，与当前⾊谱柱Column1的L1/dp1基本⼀致（⽐Column1的L1/dp1值50变化+12%，在药典规定的-25%~+50%范围内。

有⼀定程度的增加，但有利于分离度R）。

注：此处粒径1.8µm是全多孔填料，产⽣的柱压⽐较⾼，因此，可选择表⾯多孔填料，例如2.7µm粒径的表⾯多孔填料⾊谱柱，因为其特殊的填料技术，实际的硅胶粒径仍只有约1.8µm（如下图1）。

图1：全多孔填料和表⾯多孔填料⽰意图。