艾滋病实验室的设置和质量管理 ppt课件
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ppt课件 2
艾滋病检测工作管理办法
实验室必备条件 ►人员条件 ▪国家艾滋病参比实验室:略 ▪艾滋病确认中心和确认实验室 至少由5名医技人员组成, 高级卫生技术人员至少1 名、中级2名或以上,负责确认实验的人员需具有3年以 上从事HIV抗体初筛工作经验、接受过国家级或确认 中心实验室的技术培训,并获得合格证书. ▪筛查中心实验室和筛查实验室 至少由3名医技人员组成，具有中级卫生技术职称 人员至少1名。负责筛查试验的人员需具有2年以上从 事血清学检测工作经验，接受过省确认中心实验室的 技术培训，并获得合格证书。 （现场筛查点：有1名以上的技术人员，且经过确认 中心实验室培训合格。）
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艾滋病检测工作管理办法
实验室的任务 国家艾滋病参比实验室（略） 艾滋病确认中心实验室和确认实验室（略） 艾滋病筛查中心实验室 (1)承担辖区内艾滋病病毒抗体的筛查任务。 (2)负责辖区内阳性反应标本的复检，及时将需要做确认 试验的标本转送确认实验室。 (3)负责辖区内艾滋病筛查实验室的技术培训和指导。 (4)按规范要求开展检测前后咨询和培训。 艾滋病筛查实验室 (1)承担本地区艾滋病抗体筛查任务。 (2)负责将筛查阳性反应标本送艾滋病筛查中心实验室复 检或直接送确认实验室确认。 (3)按规范要求开展检测前后咨询。
艾滋病筛查实验室的设置 和质量管理
ppt课件
1
艾滋病检测工作管理办法
▶实验室的设置 国家艾滋病参比实验室:中国CDC 艾滋病确认中心实验室:省CDC 艾滋病确认实验室 艾滋病筛查中心实验室:地(市)级CDC 艾滋病筛查实验室 另外，在没有检测条件的偏远地区因工作需 要建立的现场检测点。
管理是关键 (组织结构、岗位责任) 硬件要规范（试剂、仪器、实验室环境） 人员要合格 (人员素质与培训 ) 操作按文件
（制度、操作指导、质量控制及质量记录）
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11
５．HIV检测实验室文件和文件管理要求
（1）建立标准操作程序文件(SOP) （2）建立实验原始记录表
（3）建立 HIV 抗体检测程序
0.105
0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105
1.43
1.90 1.35 2.00 1.52 1.71 1.81 1.52
18
19 20
0.221
0.210 0.150
0.105
0.105 0.105
2.10
2.00 1.43
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x 计算公式为： x = s 计算公式为：
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ELISA反应强度曲线
OD
ppt课件
样品强度 20
（3）外部对照质控血清的保存
1 ）外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验 室一年使用 2）外部对照血清应该均一、无菌 3 ）外部对照血清标定后应该等量分装，每个分装的量 应足够一周使用 4）外部对照应该分类作好标记，使用不同颜色的标签 5）外部对照血清应该存放在－70 ℃，如无条件则存放 在非自动除霜的－20 ℃冰箱 6 ）外部对照血清一旦融解以后应该存放在 2 － 8 ℃， 一周后必须弃去，不能重新冻存。
次数
日期
21
22 23 24 25 26 27 28 29
7.4
7.7 7.8 7.11 7.12 7.15 7.16 7.18 7.19
质控血清 OD 0.160 0.190 0.200 0.228 0.139 0.221 0.150 0.170 0.225
Cut-off值
（一） 定义
质量保证是指从接收检验标本起，到实验室发出报 告止，为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的 全过程，包括采取各种行政和技术上的措施和方法。
为了提供足够的信任,表明实体能够满足质量要求.而在质量体系中实施, 并根据需要进行证实的,全部有计划和有系统的活动 (GB/T 6583 1994) 为确保实验室所报告的最终结果的正确性所采取的所有程序控制 (逆转 录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制 里尔.康斯坦丁)
ppt课件 14
实验前质量控制
①采集标本前病人的准备； ②正确的标本采集方法； ③准确及时的运送标本； ④实验前正确地处理和保存标本。
实验中质量控制
①质控品的准备； ②试剂盒的评价； ③开展Levey-Jennings 质控图质控（或“即刻法”质控）。
实验后质量控制
①实验后准确填写检验结果； ②及时发出报告； ③正确地解释检验结果的临床意义。
（8）文件存档
原始记录包括实验原始记录表、打印数据、膜反应条带或其照片、检测记 录表、标本登记记录、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等重要记录 都应该妥善存档保存15年以上。推荐同时使用计算机保存各种文件和记录。内 含病人姓名的所有工作记录一定要保密，参见《规范》第8页。
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质量控制 (Quality Control, QC)
ppt课件 17
（1） 外部对照质控血清的组成
理想的外部对照应该包括阳性对照、 弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。 在每次实验时应设置一个单一浓度水平 的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对 照的值以设定在该试剂盒 Cut-off 值的 2 －3倍为宜。
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18
（2）外部对照质控血清的来源和选择
（一） 定义
质量控制是指为确保实验工作正常进行而在每一次 实验过程中必须采取的各种措施。
为达到质量要求所采取的作业技术和活动. 1.质量控制包括作业和活动, 其目的在于监视过程,并排除质量环节中所有 阶段中导致不满意的原因,以取得经济效益. 2.质量控制和质量保证的某些活动是相互联系的. (GB/T 6583 1994) 在每一次实验过程中所必须采取的一切监测手段以确保实验工作的正常进行 (逆转录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制 里尔.康斯坦丁)
3．必须按照 SOP 中规定的要求进行操作
包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置、试剂、标本加样量、 孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等。
4．标本质量
在实验前必须检查所有待检标本的质量，如有脂血、溶血或污染的标本原则 上不能使用，必须重新采集标本。若无法重新采集标本，必须在室主管批准下使 用，在检测结果中应该注明该份标本的情况。
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质量管理 (Quality management,QM)
对确定和达到质量要求所需的职能和 活动的管理。是制定和实施质量方针的 一系列管理职能，通过质量体系来实现 质量管理。 实验室质量管理包括质量保证、质 量控制和质量评价。
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质量保证 (Quality Assurance, QA)
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15
基本要求
标准 1．试剂种类
必须使用经卫生部批准或注册，经过中国药品生物制品检定所批批检定合格 的国产或进口 HIV 抗体初筛和确认检测试剂。初筛用的 HIV 检测试剂必须是 HIV－1/2 混合型。在选用试剂时应优先选择经过临床评估质量优良的试剂盒。
2．必须使用在有效期内且保存条件符合要求的诊断试剂
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质量保证
质量保证是确保实验结果质量的基本 条件，其实施程度直接影响试验结果和最 后报告的每个参数。质量保证取决于良好 的质量控制程序，并经良好的质量评价程 序加以鉴定。因此，要求所有的实验室工 作人员有责任时刻注意解决影响实验结果 的每个环节上可能出现的问题。
ppt课件 10
质量保证
（6）建立HIV 阳性标本的保存记录
记录中填写阳性标本血清/血浆的储存量、标本储存温度、标本储存起始时间以 及标本保管人姓名。所有经确认的阳性标本，包括实验室留存的标本，应送省 级 HIV 抗体确认中心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得擅自处理。
（7）建立实验室安全措施
参见《规范》附件一，第9页。
Σx ── N ∑( xn - x )2 ───────
s =
n－1
cv 计算公式为： s cv = ── x 100 % x
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通过上表，计算S/CO值的均值（x），标准差（s）和变异系数（cv）
x =1.72 s =0.29 cv =16.9% 根据以上数据绘制室内质控框架图, 开始质量控制
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（4）外部对照质控血清的使用 原则上每一次实验必须使用外部 对照质控血清，建立质控图，以便 监控实验操作的一致性和结果的准 确性。同时可以了解各批试剂盒之 间的误差(批间差异)。
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质控图(1)
X-2S
X-S
X
ppt课件
X+S
X+2S
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建立质控图参数
对HIV抗体检测(ELISA)外部对照质控血清的评 价采用多次测定的OD值的均值上下各两个标准差的 范围，即外部对照OD值的95％可信限为 x 2s。 各个外部对照的标定即确定外部对照的均值和可信 限，可用几个统计学参数如均值( x )、标准差(s) 以及变异系数(cv)来确定可信限。 ① 算术平均值( x )代表一组OD值数的平均值。 ② 标准差(s) ③ 变异系数(cv)
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艾滋病检测工作管理办法
建筑条件和设备条件 国家艾滋病参比实验室（略） 艾滋病确认中心和确认实验室（略） ■艾滋病筛查中心实验室和筛查实验室 有独立实验用房或专用检测台，分为清洁 区和污染区。 配备筛查试验所需设备，包括酶标仪、洗 板机、移液器、普通冰箱、离心机；消毒与污 物处理设备；安全防护用品；有条件的还应配 备实验室恒温设备。筛查中心实验室应配备低 温冰箱。
5．标本使用
冰冻的标本待全部融化后必须充分摇匀。
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质控血清
1．内部对照质控血清 内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供 的一套阴性和阳性对照 2．外部对照质控血清 外部对照质控血清是各级实验室为了监控每次检测 的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套 阴性和阳性对照血清。设立外部对照还可以提示标本处于 临界值状态时的检验操作情况。
1）通过向有关机构购买获得
2）通过实验室制备获得 ( 比较经济的方法 )
① 混合试剂盒内部对照血清，等量分装。 ② 混合HIV抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟离心15分钟，用 0.2m 生物滤膜过滤除菌后再进行56 ℃30分钟加热灭活处理。弱 阳性对照可以通过使用HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体 强阳性血清并经标定后得到。弱阳性对照的OD值以2－3倍于 Cut-off为宜。
（4）填写检测结果表 （5）建立标本的登记记录
实验室收到标本后，有关参数应该及时登记在标本的登记记录 中，包括受检者的姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、 送检单位、人群类别、检验结果( 包括初筛、复检、确证 )、 送检日期、报告日期、备注 ( 必要时记录通信地址 )。 ppt课件
12
５．HIV检测实验室文件和文件管理要求
ppt课件 24
范例：参考郑怀竞主编《免疫学检验室间质评与室内质控》，1997年出版。
次数 1 质控血清 OD 0.180 Cut-off值 OD 0.105 S/CO值 1.71
2
3 4 5 6 7 8 9
90
0.200 0.228 0.137 0.221 0.150 0.170 0.180
ppt课件
5
HIV抗体初筛检测的必要条件
►经省级卫生行政部门批准的艾滋病初筛实验室
►严格执行卫生部《全国艾滋病检测工作规范》 ( 1997 ) 和中国CDC《全国艾滋病检测技术规 范》 (2003年5月)
ppt课件
6
艾滋病检测工作管理办法
艾滋病筛查实验室的审批
1、在人员条件和实验室硬件均符合《全国艾滋病检测 工作规范》要求的前提下，拟申请艾滋病筛查实验室 的单位，须填写艾滋病筛查实验室申请表，一式三份， 报当地卫生行政部门签署意见后，交省疾病预防控制 中心确认实验室。 2、省CDC组织专家3人进行现场考核与验收，如符合申 报条件则会形成意见报省级卫生行政部门。 3、经省级卫生行政部门批准后方可成为艾滋病初筛实 验室。
0.105
0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105
1.81
1.90 1.81 1.09 2.10 1.43 1.62 2.14
10
11 12 13 14 15 16 17
0.150
0.200 0.142 0.210 0.221 0.180 0.190 0.160
艾滋病检测工作管理办法
实验室必备条件 ►人员条件 ▪国家艾滋病参比实验室:略 ▪艾滋病确认中心和确认实验室 至少由5名医技人员组成, 高级卫生技术人员至少1 名、中级2名或以上,负责确认实验的人员需具有3年以 上从事HIV抗体初筛工作经验、接受过国家级或确认 中心实验室的技术培训,并获得合格证书. ▪筛查中心实验室和筛查实验室 至少由3名医技人员组成，具有中级卫生技术职称 人员至少1名。负责筛查试验的人员需具有2年以上从 事血清学检测工作经验，接受过省确认中心实验室的 技术培训，并获得合格证书。 （现场筛查点：有1名以上的技术人员，且经过确认 中心实验室培训合格。）
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艾滋病检测工作管理办法
实验室的任务 国家艾滋病参比实验室（略） 艾滋病确认中心实验室和确认实验室（略） 艾滋病筛查中心实验室 (1)承担辖区内艾滋病病毒抗体的筛查任务。 (2)负责辖区内阳性反应标本的复检，及时将需要做确认 试验的标本转送确认实验室。 (3)负责辖区内艾滋病筛查实验室的技术培训和指导。 (4)按规范要求开展检测前后咨询和培训。 艾滋病筛查实验室 (1)承担本地区艾滋病抗体筛查任务。 (2)负责将筛查阳性反应标本送艾滋病筛查中心实验室复 检或直接送确认实验室确认。 (3)按规范要求开展检测前后咨询。
艾滋病筛查实验室的设置 和质量管理
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艾滋病检测工作管理办法
▶实验室的设置 国家艾滋病参比实验室:中国CDC 艾滋病确认中心实验室:省CDC 艾滋病确认实验室 艾滋病筛查中心实验室:地(市)级CDC 艾滋病筛查实验室 另外，在没有检测条件的偏远地区因工作需 要建立的现场检测点。
管理是关键 (组织结构、岗位责任) 硬件要规范（试剂、仪器、实验室环境） 人员要合格 (人员素质与培训 ) 操作按文件
（制度、操作指导、质量控制及质量记录）
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５．HIV检测实验室文件和文件管理要求
（1）建立标准操作程序文件(SOP) （2）建立实验原始记录表
（3）建立 HIV 抗体检测程序
0.105
0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105
1.43
1.90 1.35 2.00 1.52 1.71 1.81 1.52
18
19 20
0.221
0.210 0.150
0.105
0.105 0.105
2.10
2.00 1.43
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x 计算公式为： x = s 计算公式为：
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ELISA反应强度曲线
OD
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样品强度 20
（3）外部对照质控血清的保存
1 ）外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验 室一年使用 2）外部对照血清应该均一、无菌 3 ）外部对照血清标定后应该等量分装，每个分装的量 应足够一周使用 4）外部对照应该分类作好标记，使用不同颜色的标签 5）外部对照血清应该存放在－70 ℃，如无条件则存放 在非自动除霜的－20 ℃冰箱 6 ）外部对照血清一旦融解以后应该存放在 2 － 8 ℃， 一周后必须弃去，不能重新冻存。
次数
日期
21
22 23 24 25 26 27 28 29
7.4
7.7 7.8 7.11 7.12 7.15 7.16 7.18 7.19
质控血清 OD 0.160 0.190 0.200 0.228 0.139 0.221 0.150 0.170 0.225
Cut-off值
（一） 定义
质量保证是指从接收检验标本起，到实验室发出报 告止，为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的 全过程，包括采取各种行政和技术上的措施和方法。
为了提供足够的信任,表明实体能够满足质量要求.而在质量体系中实施, 并根据需要进行证实的,全部有计划和有系统的活动 (GB/T 6583 1994) 为确保实验室所报告的最终结果的正确性所采取的所有程序控制 (逆转 录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制 里尔.康斯坦丁)
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实验前质量控制
①采集标本前病人的准备； ②正确的标本采集方法； ③准确及时的运送标本； ④实验前正确地处理和保存标本。
实验中质量控制
①质控品的准备； ②试剂盒的评价； ③开展Levey-Jennings 质控图质控（或“即刻法”质控）。
实验后质量控制
①实验后准确填写检验结果； ②及时发出报告； ③正确地解释检验结果的临床意义。
（8）文件存档
原始记录包括实验原始记录表、打印数据、膜反应条带或其照片、检测记 录表、标本登记记录、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等重要记录 都应该妥善存档保存15年以上。推荐同时使用计算机保存各种文件和记录。内 含病人姓名的所有工作记录一定要保密，参见《规范》第8页。
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质量控制 (Quality Control, QC)
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（1） 外部对照质控血清的组成
理想的外部对照应该包括阳性对照、 弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。 在每次实验时应设置一个单一浓度水平 的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对 照的值以设定在该试剂盒 Cut-off 值的 2 －3倍为宜。
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（2）外部对照质控血清的来源和选择
（一） 定义
质量控制是指为确保实验工作正常进行而在每一次 实验过程中必须采取的各种措施。
为达到质量要求所采取的作业技术和活动. 1.质量控制包括作业和活动, 其目的在于监视过程,并排除质量环节中所有 阶段中导致不满意的原因,以取得经济效益. 2.质量控制和质量保证的某些活动是相互联系的. (GB/T 6583 1994) 在每一次实验过程中所必须采取的一切监测手段以确保实验工作的正常进行 (逆转录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制 里尔.康斯坦丁)
3．必须按照 SOP 中规定的要求进行操作
包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置、试剂、标本加样量、 孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等。
4．标本质量
在实验前必须检查所有待检标本的质量，如有脂血、溶血或污染的标本原则 上不能使用，必须重新采集标本。若无法重新采集标本，必须在室主管批准下使 用，在检测结果中应该注明该份标本的情况。
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质量管理 (Quality management,QM)
对确定和达到质量要求所需的职能和 活动的管理。是制定和实施质量方针的 一系列管理职能，通过质量体系来实现 质量管理。 实验室质量管理包括质量保证、质 量控制和质量评价。
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质量保证 (Quality Assurance, QA)
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基本要求
标准 1．试剂种类
必须使用经卫生部批准或注册，经过中国药品生物制品检定所批批检定合格 的国产或进口 HIV 抗体初筛和确认检测试剂。初筛用的 HIV 检测试剂必须是 HIV－1/2 混合型。在选用试剂时应优先选择经过临床评估质量优良的试剂盒。
2．必须使用在有效期内且保存条件符合要求的诊断试剂
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质量保证
质量保证是确保实验结果质量的基本 条件，其实施程度直接影响试验结果和最 后报告的每个参数。质量保证取决于良好 的质量控制程序，并经良好的质量评价程 序加以鉴定。因此，要求所有的实验室工 作人员有责任时刻注意解决影响实验结果 的每个环节上可能出现的问题。
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质量保证
（6）建立HIV 阳性标本的保存记录
记录中填写阳性标本血清/血浆的储存量、标本储存温度、标本储存起始时间以 及标本保管人姓名。所有经确认的阳性标本，包括实验室留存的标本，应送省 级 HIV 抗体确认中心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得擅自处理。
（7）建立实验室安全措施
参见《规范》附件一，第9页。
Σx ── N ∑( xn - x )2 ───────
s =
n－1
cv 计算公式为： s cv = ── x 100 % x
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通过上表，计算S/CO值的均值（x），标准差（s）和变异系数（cv）
x =1.72 s =0.29 cv =16.9% 根据以上数据绘制室内质控框架图, 开始质量控制
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（4）外部对照质控血清的使用 原则上每一次实验必须使用外部 对照质控血清，建立质控图，以便 监控实验操作的一致性和结果的准 确性。同时可以了解各批试剂盒之 间的误差(批间差异)。
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质控图(1)
X-2S
X-S
X
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X+S
X+2S
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建立质控图参数
对HIV抗体检测(ELISA)外部对照质控血清的评 价采用多次测定的OD值的均值上下各两个标准差的 范围，即外部对照OD值的95％可信限为 x 2s。 各个外部对照的标定即确定外部对照的均值和可信 限，可用几个统计学参数如均值( x )、标准差(s) 以及变异系数(cv)来确定可信限。 ① 算术平均值( x )代表一组OD值数的平均值。 ② 标准差(s) ③ 变异系数(cv)
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艾滋病检测工作管理办法
建筑条件和设备条件 国家艾滋病参比实验室（略） 艾滋病确认中心和确认实验室（略） ■艾滋病筛查中心实验室和筛查实验室 有独立实验用房或专用检测台，分为清洁 区和污染区。 配备筛查试验所需设备，包括酶标仪、洗 板机、移液器、普通冰箱、离心机；消毒与污 物处理设备；安全防护用品；有条件的还应配 备实验室恒温设备。筛查中心实验室应配备低 温冰箱。
5．标本使用
冰冻的标本待全部融化后必须充分摇匀。
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质控血清
1．内部对照质控血清 内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供 的一套阴性和阳性对照 2．外部对照质控血清 外部对照质控血清是各级实验室为了监控每次检测 的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套 阴性和阳性对照血清。设立外部对照还可以提示标本处于 临界值状态时的检验操作情况。
1）通过向有关机构购买获得
2）通过实验室制备获得 ( 比较经济的方法 )
① 混合试剂盒内部对照血清，等量分装。 ② 混合HIV抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟离心15分钟，用 0.2m 生物滤膜过滤除菌后再进行56 ℃30分钟加热灭活处理。弱 阳性对照可以通过使用HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体 强阳性血清并经标定后得到。弱阳性对照的OD值以2－3倍于 Cut-off为宜。
（4）填写检测结果表 （5）建立标本的登记记录
实验室收到标本后，有关参数应该及时登记在标本的登记记录 中，包括受检者的姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、 送检单位、人群类别、检验结果( 包括初筛、复检、确证 )、 送检日期、报告日期、备注 ( 必要时记录通信地址 )。 ppt课件
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５．HIV检测实验室文件和文件管理要求
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范例：参考郑怀竞主编《免疫学检验室间质评与室内质控》，1997年出版。
次数 1 质控血清 OD 0.180 Cut-off值 OD 0.105 S/CO值 1.71
2
3 4 5 6 7 8 9
90
0.200 0.228 0.137 0.221 0.150 0.170 0.180
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HIV抗体初筛检测的必要条件
►经省级卫生行政部门批准的艾滋病初筛实验室
►严格执行卫生部《全国艾滋病检测工作规范》 ( 1997 ) 和中国CDC《全国艾滋病检测技术规 范》 (2003年5月)
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艾滋病检测工作管理办法
艾滋病筛查实验室的审批
1、在人员条件和实验室硬件均符合《全国艾滋病检测 工作规范》要求的前提下，拟申请艾滋病筛查实验室 的单位，须填写艾滋病筛查实验室申请表，一式三份， 报当地卫生行政部门签署意见后，交省疾病预防控制 中心确认实验室。 2、省CDC组织专家3人进行现场考核与验收，如符合申 报条件则会形成意见报省级卫生行政部门。 3、经省级卫生行政部门批准后方可成为艾滋病初筛实 验室。
0.105
0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105 0.105
1.81
1.90 1.81 1.09 2.10 1.43 1.62 2.14
10
11 12 13 14 15 16 17
0.150
0.200 0.142 0.210 0.221 0.180 0.190 0.160