植物化学保护试验指导

实验二十、植株生长量的测定
指示植物在药剂处理过的土壤中或混药的水溶液中培养一定时间后，测定植株的生长量，如禾本科植物可测量叶子长度，阔叶植物可测量叶面积；或将地上部分切下称其鲜重。

抑制光合作用的除草剂常用这类方法。

1、去胚乳小麦幼苗法
去胚乳小麦幼苗法也是上海植物生理研究所1964年建立的生测方法。

这是一个测定抑制光合作用除草剂的专一方法，与测定这类除草剂的其它生测方法（如番茄法、燕麦法）相比，它具有操作简便、测定周期短等优点。

选择饱满度一致的小麦，浸种2h后，排列在铺有湿滤纸或纱布的搪瓷盘内，在20℃左右进行发芽。

培养3-4天后苗高2-3cm，精选高度一致的幼苗，轻轻取出以免损伤根部，然后摘除胚乳，在水中漂洗后作为指示生物。

以直径4.5cm，高5.0cm的小玻璃杯作为测定容器，每杯放入不同浓度的药液3ml和稀释10倍的培养液6ml，每杯插入上述去胚乳小麦幼苗10株。

在温度21～26℃左右，光照下培养6～7天，测定小麦苗的株高，以株高抑制率来表示除草剂活性。

培养液配方如下：
硫酸铵3.2g 磷酸二氢铵2.25g 硫酸钙0.8g 氯化钾1.2g
硫酸镁1.2g 微量元素0.01g
其中微量元素组成为：
硫酸亚铁10g、硫酸铜3g、硫酸锰9g、硼酸7g 硫酸锌3g
将上述配方加入1L水中，使用时再稀释10倍。

2、番茄法
取20×120mm的试管，编号。

将供试药剂用培养液稀释成一系列梯度浓度溶液，每只试管加入10mm。

严格挑选生长健壮，大小高度一致的具2片真叶的番茄幼苗，将主根及子叶剪掉，称鲜重后插入试管，每管2～4株，在漫射光照射下，25℃左右培养2周，然后再取出称重。

培养期间应每天补加蒸发的水分。

以生长抑制率来评价活性，求出EC50，比较活性。

生长抑制率（％）
=
100
⨯
-
对照每株净增重量
处理每株净增重量
对照每株净增重量
番茄法适合于脲类及均三氮苯类光合作用抑制剂的生物测
定，方法灵敏，但培养周期较长，其间要每天补足水分，比较麻烦。

3、燕麦法
将土样烘干。

过lmm筛后。

加入除草剂，使土壤水分达到最大田间持水量的60％。

取200g土装人底部带孔的玻璃皿中，播种已催芽露白的燕麦种子10－12粒，出苗后，定8株苗，每天从底部灌水，保持原来的重量，于光照下培育14d后，测定植株地上部鲜重与干重，或幼龄叶片数及第2、3叶片的重量，计算IC50。

本法适于测定均三氮苯类除草剂如阿特拉津、西玛津以及取代脲类除草剂的活性，淋溶及持效期等。

前者灵敏度0.05-0.1ppm，后者为0.1-0.3ppm。

此外，也可测定幼苗的含水量、水提取物的导电性及中性水溶性物质重量及其占干重的百分数。

由于抑制光合作用除草剂引起植物蒸腾作用下降（气孔关闭引起的），而根系吸水不受影响，因此，在鲜重与干重明显下降之前，植物体内含水量反倒明显增加。

因此，可用幼苗含水量作为生测指标一
此类除草剂也使植株体内中性水溶性物质（碳水化合物）的含量在干鲜重下降前明显下降，因而可以测定中性水溶性物质（糖）的含量为生测指标，比测定干鲜重更为
灵敏。

4、叶鞘滴注法
Tarlor和Loader（1984）为了筛选有效的防治野燕麦的除草剂混剂，设计了一种快速，简便的除草剂生测方法——叶鞘滴注法。

当正常生长的燕麦长至1叶1心时，在第一叶张开的叶鞘里滴加10ul供试的一定浓度的除草剂。

24-48h后，切下2㎝长的一段，插入清水洋菜培养基。

再经24h（此时对照叶片伸长约11～13㎜）取出测量每一剂量处理的叶片延伸长
度，并评判除草剂活性。

5、萝卜子叶法
将萝卜籽插入整滤纸的培养血中，加适量水，加盖后在27℃培养箱中黑暗培养30h，从幼苗上切下子叶备用。

在盛有用磷酸盐缓冲液配制的不同浓度的除草剂（5－10 ml）溶液中放入10片大小均匀的子叶，加盖后在25－27℃
温室或生长箱中。

光照强度为2 000—3000LX的光照下连
续培养3d后。

称鲜重并测定叶绿素含量，计算IC50。

本法适于测定触杀性及影响氮代谢的除草剂。

6、再生苗侧重法。

将生长均匀一致的10株香附子块茎移植到盆钵中。

二周后生长正常时，分别用不同浓度的草甘磷处理香附子叶，
一周后剪除香附子茎叶（距上表1cm），再过一个月左右测
定再生苗的鲜重，这样可反映传导性除草剂对地下部分再
生能力的抑制程度。

也可用玉米做试材，将玉米将播种在统一型号盆钵中，当
幼苗3叶期时喷施草甘磷，24小时后剪去叶片，一周后测
定再生苗的鲜重，比较不同处理间的再生力。

7、茎叶浸渍法：
该法适用于茎叶处理剂的筛选和测定。

方法是取一个底部带孔的啤酒杯，装满潮湿细土（肥沃土壤较好）后压实，再用塑料薄膜包住整个杯上并用橡皮筋扎紧，以防止倒置浸药时杯中土壤散落。

其后在薄膜上沿杯边缘戳若干孔穴。

每穴播入2-3粒供试植物种子并用土覆盖好，然后从底部渗入水保持土壤湿润。

供试植物长至2-3叶期时进行间苗，每穴保苗1株苗。

待植物长至需要大小时，进行浸药处理。

浸药时间各处理之间力求一致。

药剂处理数天后可揭去薄膜。

实验二十二杀菌剂保护作用和治疗作
用的测定
本试验法是属于第二大类的试验方法，是用病菌寄主植物
的叶片或果实来测定，比孢子萌发试验法、抑制菌圈法、
生长速率法等更接近田间实际情况。

保护作用的测定原理是先在供试叶片或果实上喷供试药
液，自然干燥后，在叶片或果实上接供试菌保湿培养一定
时间检查结果。

治疗作用的测定原理是先在供试叶片或果实上接供试菌保
湿培养24小时让病菌侵入进去但还没有表现出症状。

然后
喷洒供试药液，药液干燥后保湿培养一定时间检查结果。

[供试菌种]：香蕉炭疽病菌（纯培养7天）
[供试药剂]：75%百菌清WP：1000；100ppm
50%多菌灵WP：1000；100ppm
[实验材料]：束针镊子三角板
烧怀量筒移液管
蜡笔棉花保湿箱
吸耳球小玻管φ5mm。

[供试作物]：香蕉果实（成熟度适中）
[操作方法]：
l、香蕉的准备：从田间采摘大小老嫩一致的香蕉果实，用清水洗净凉干备用，可以使用乙烯利催熟。

2、供试菌饼的制备：用φ5mm的灭菌小玻管打菌饼，菌饼要完整无缺且不拖尾巴。

3、药液的配制：
4、保护作用的测定：每支香蕉刺分上中下3个点（深浅一致，等距离），用束针刺伤香蕉的表皮，然后用镊子夹棉花球沾取不同浓度药液均匀涂抹在香蕉上，对照涂清水，自然凉干后，在刺伤部位接菌饼，（菌丝一面朝下，棉花保湿），每处理接种3条香蕉，处理好后的香蕉四周放湿棉花条，再放入保湿箱中保湿培养3-7天检查结果。

5、治疗作用的测定：每支香蕉分上中下3个点（深浅一致，等距离），用束针刺伤香蕉的表皮，然后在刺伤部位接供试菌饼（菌丝一面朝下），四周放湿棉花条并放入保湿箱中保湿培养24小时后，取出凉干，用镊子夹棉花球沾取不同浓度药液均匀地涂在香蕉上，对照涂清水，待药液干后，再放在保湿箱中保湿培养3-7天，待对照全部发病即可检查结果。

[结果检查]：
l、视察各种点发病情况，求发病率或量病斑直径大小（十字交叉量仅平均值）再按分级标准计算发病严重度，根据发病率或病情指数求防治效果。

发病率（%）=
100
⨯
接种点
发病点数
病情指数=
100
) (
⨯
⨯
⨯
∑
最高级值
接种点数
该病级值
病级斑点数
防治效果（%）
=
100
)
(
)
(
)
(
⨯
-
发病率
对照组病指
发病率
处理病指
发病率
对照组病指
病斑分级标准：
0级：病斑直径为0
1级：病斑直径在5mm以下
2级；病斑直径在5～15mm以下8级：病斑直径在15～25mm
4级：病历直径在25～35mm
5级：病斑直径在35mm以上
2、观察每个处理的药害情况，药害程度可用下列符号来示：
无药害（-）
药害轻（+）
药害中等（++）
药害严重（+++）
根据病情和药害情况，最后综合分析各种药剂的保护和治疗作用的效果。