水飞蓟素抑制肝癌细胞系mhcc97侵袭及迁移
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和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测 ＭＭＰ￣９、ＶＥＧＦ、Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎ、ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ 和 Ａｋｔ ｍＲＮＡ 及蛋白的表达ꎮ 结果 和对照组相比ꎬ水飞
蓟素抑制细胞增殖( Ｐ<０ ０５) ꎬ显著降低细胞侵袭、迁移和黏附能力 ( Ｐ< ０ ０５) ꎮ 水飞蓟素处理组 ＭＭＰ￣９、ＶＥＧＦ、
ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒꎻ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌｓꎻ ｓｉｌｙｍａｒｉｎꎻ ｉｎｖａｓｉｏｎꎻ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
水 飞 蓟 素 ( ｓｉｌｙｍａｒｉｎꎬ ＳＭ) 为 菊 科 植 物 水 飞 蓟
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｏｎ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓꎬ ａｎｄ ｔｏ ｅｘ￣
ｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ. Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ. Ｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ
收稿日期:２０１８￣ １２￣ １８ 修回日期:２０１９￣ ０５￣ ２０
∗
通信作者( ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ) :６３５１８１６０３＠ ｑｑ.ｃｏｍ
用ꎬ其可以抑制结肠癌、前列腺癌、乳腺癌和皮肤癌
胞侵袭与转移的研究尚未见报道ꎬ本实验拟观察 ＳＭ
对人肝癌 ＭＨＣＣ９７ 细胞系侵袭、 迁移和黏附能力的
２０１９ 年 １２ 月
基础医学与临床
第 ３９ 卷 第 １２ 期
Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１９
Ｖｏｌ.３９ Ｎｏ.１２
研究论文
文章编号: １ ０ ０ １ ￣ ６３ ２ ５ ( ２ ０ １ ９ ) １ ２ ￣ １７ ４ １ ￣ ０５
水飞蓟素抑制肝癌细胞系 ＭＨＣＣ９７ 侵袭及迁移
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ( ＲＴ￣ＰＣＲ) ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ. Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ
ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌꎬ ｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｏｎ. Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ
中图分类号:Ｒ３１ 文献标志码:Ａ
Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＨＣＣ９７
ＺＨＡＮＧ Ｊｉａｎ １ ꎬ ＭＡ Ｈａｉ １ ꎬ ＹＡＮＧ Ｌｉｕ ２∗
(１ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙꎻ ２ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎꎬ Ｎａｎｃｈｏｎｇ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌꎬ Ｎａｎｃｈｏｎｇ ６３７０００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
损伤等疾病 [１] ꎮ 近年研究发现ꎬＳＭ 具有抗肿瘤作
合物ꎬ具有抗脂质过氧化ꎬ清除细胞内自由基ꎬ维持
等肿瘤细胞增殖及转移 [２] ꎮ 目前ꎬＳＭ 抑制肝癌细
( ｓｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉａｎｕｍ ) 的果实经提取制备的脂素类化
细胞膜稳定性和促进肝细胞再生等功效ꎬ有较强的
肝脏保护作用ꎬ通常被用来治疗肝纤维化ꎬ代谢性肝
１７４２
基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
影响ꎬ并初步探讨其可能涉及的分子机制ꎮ
２０１９ ３９(１２)
９６ 孔板中加入 ２００ μＬꎬ２ × １０ ５ 个 / ｍＬ 的细胞悬液ꎬ
１ 材料与方法
处理组和对照组各设 ５ 个复孔ꎮ 培养 ２ ｈ 后用 ＰＢＳ
１ １ 材料
ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙꎬ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｓｓａｙ ａｎｄ
ｃｅｌｌ￣ｍａｔｒｉｘ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｓｓａｙ. Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＭＰ９ꎬ ＶＥＧＦꎬ Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎꎬ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ ａｎｄ Ａｋｔ ｗｅｒｅ
光度值大小表示细胞￣基质黏附能力大小ꎮ
洗去未黏附的细胞ꎬＭＴＴ 法测定各孔吸光度值ꎬ吸
人肝癌 ＭＨＣＣ９７ 细胞系( 中科院上海细胞所) ꎻ
ＭＭＰ￣９ꎬ ＶＥＧＦꎬ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ ａｎｄ ｐ￣Ａｋｔ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｒｅｄｕｃｅｄꎬ ｂｕｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌｓꎬ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｏｎꎬ ｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬ
张 健１ ꎬ 马 海１ ꎬ 杨 柳２∗
( 南充市中心医院 １ 普外一科ꎻ ２ 呼吸内科ꎬ 四川 南充 ６３７０００)
摘要:目的 探讨水 飞 蓟 素 ( ＳＭ) 对 人 肝 癌 细 胞 系 ＭＨＣＣ９７ 侵 袭 和 转 移 能 力 的 影 响 及 可 能 涉 及 的 分 子 机 制ꎮ
方法 ＭＴＴ法检测细胞增殖ꎻＴｒａｎｓｗｅｌｌ、划痕实验和细胞￣基质黏附实验分别检测细胞侵袭、迁移及黏附能力ꎻＲＴ￣ＰＣＲ
ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ 和 Ａｋｔ 的 ｍＲＮＡ 及蛋白表达量降低( Ｐ< ０ ０５) ꎬ而 Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎ 的 ｍＲＮＡ 及蛋白表达量增高( Ｐ< ０ ０５) ꎮ
结论 水飞蓟素可抑制 ＭＨＣＣ９７ 细胞增殖ꎬ并且降低细胞侵袭、迁移和黏附能力ꎮ
关键词: 肝癌ꎻＭＨＣＣ９７ 细胞ꎻ水飞蓟素ꎻ侵袭ꎻ迁移
蓟素抑制细胞增殖( Ｐ<０ ０５) ꎬ显著降低细胞侵袭、迁移和黏附能力 ( Ｐ< ０ ０５) ꎮ 水飞蓟素处理组 ＭＭＰ￣９、ＶＥＧＦ、
ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒꎻ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌｓꎻ ｓｉｌｙｍａｒｉｎꎻ ｉｎｖａｓｉｏｎꎻ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
水 飞 蓟 素 ( ｓｉｌｙｍａｒｉｎꎬ ＳＭ) 为 菊 科 植 物 水 飞 蓟
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｏｎ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓꎬ ａｎｄ ｔｏ ｅｘ￣
ｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ. Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ. Ｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ
收稿日期:２０１８￣ １２￣ １８ 修回日期:２０１９￣ ０５￣ ２０
∗
通信作者( ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ) :６３５１８１６０３＠ ｑｑ.ｃｏｍ
用ꎬ其可以抑制结肠癌、前列腺癌、乳腺癌和皮肤癌
胞侵袭与转移的研究尚未见报道ꎬ本实验拟观察 ＳＭ
对人肝癌 ＭＨＣＣ９７ 细胞系侵袭、 迁移和黏附能力的
２０１９ 年 １２ 月
基础医学与临床
第 ３９ 卷 第 １２ 期
Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１９
Ｖｏｌ.３９ Ｎｏ.１２
研究论文
文章编号: １ ０ ０ １ ￣ ６３ ２ ５ ( ２ ０ １ ９ ) １ ２ ￣ １７ ４ １ ￣ ０５
水飞蓟素抑制肝癌细胞系 ＭＨＣＣ９７ 侵袭及迁移
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ( ＲＴ￣ＰＣＲ) ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ. Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ
ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌꎬ ｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｏｎ. Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ
中图分类号:Ｒ３１ 文献标志码:Ａ
Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＨＣＣ９７
ＺＨＡＮＧ Ｊｉａｎ １ ꎬ ＭＡ Ｈａｉ １ ꎬ ＹＡＮＧ Ｌｉｕ ２∗
(１ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙꎻ ２ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎꎬ Ｎａｎｃｈｏｎｇ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌꎬ Ｎａｎｃｈｏｎｇ ６３７０００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
损伤等疾病 [１] ꎮ 近年研究发现ꎬＳＭ 具有抗肿瘤作
合物ꎬ具有抗脂质过氧化ꎬ清除细胞内自由基ꎬ维持
等肿瘤细胞增殖及转移 [２] ꎮ 目前ꎬＳＭ 抑制肝癌细
( ｓｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉａｎｕｍ ) 的果实经提取制备的脂素类化
细胞膜稳定性和促进肝细胞再生等功效ꎬ有较强的
肝脏保护作用ꎬ通常被用来治疗肝纤维化ꎬ代谢性肝
１７４２
基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
影响ꎬ并初步探讨其可能涉及的分子机制ꎮ
２０１９ ３９(１２)
９６ 孔板中加入 ２００ μＬꎬ２ × １０ ５ 个 / ｍＬ 的细胞悬液ꎬ
１ 材料与方法
处理组和对照组各设 ５ 个复孔ꎮ 培养 ２ ｈ 后用 ＰＢＳ
１ １ 材料
ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙꎬ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｓｓａｙ ａｎｄ
ｃｅｌｌ￣ｍａｔｒｉｘ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｓｓａｙ. Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＭＰ９ꎬ ＶＥＧＦꎬ Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎꎬ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ ａｎｄ Ａｋｔ ｗｅｒｅ
光度值大小表示细胞￣基质黏附能力大小ꎮ
洗去未黏附的细胞ꎬＭＴＴ 法测定各孔吸光度值ꎬ吸
人肝癌 ＭＨＣＣ９７ 细胞系( 中科院上海细胞所) ꎻ
ＭＭＰ￣９ꎬ ＶＥＧＦꎬ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ ａｎｄ ｐ￣Ａｋｔ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｒｅｄｕｃｅｄꎬ ｂｕｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＭＨＣＣ９７ ｃｅｌｌｓꎬ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｏｎꎬ ｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬ
张 健１ ꎬ 马 海１ ꎬ 杨 柳２∗
( 南充市中心医院 １ 普外一科ꎻ ２ 呼吸内科ꎬ 四川 南充 ６３７０００)
摘要:目的 探讨水 飞 蓟 素 ( ＳＭ) 对 人 肝 癌 细 胞 系 ＭＨＣＣ９７ 侵 袭 和 转 移 能 力 的 影 响 及 可 能 涉 及 的 分 子 机 制ꎮ
方法 ＭＴＴ法检测细胞增殖ꎻＴｒａｎｓｗｅｌｌ、划痕实验和细胞￣基质黏附实验分别检测细胞侵袭、迁移及黏附能力ꎻＲＴ￣ＰＣＲ
ｉｎｔｅｇｒｉｎ β１ 和 Ａｋｔ 的 ｍＲＮＡ 及蛋白表达量降低( Ｐ< ０ ０５) ꎬ而 Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎ 的 ｍＲＮＡ 及蛋白表达量增高( Ｐ< ０ ０５) ꎮ
结论 水飞蓟素可抑制 ＭＨＣＣ９７ 细胞增殖ꎬ并且降低细胞侵袭、迁移和黏附能力ꎮ
关键词: 肝癌ꎻＭＨＣＣ９７ 细胞ꎻ水飞蓟素ꎻ侵袭ꎻ迁移