实验循环免疫复合物测定.PEG法测定CIC

注意事项




1.不同浓度的PEG可沉淀不同分子量的免疫复合物。 2% PEG可沉淀较大CIC，4% PEG则沉淀较小CIC， 但浓度＞5%时 PEG选择性CIC的特性即消失，可导致 假阳性结果。故一般选择 3%-4% 浓度 2.温度变化对结果影响较大。4℃时CIC沉淀最佳， 室温每升高1℃，A值下降0.2。 3.低密度脂蛋白、高g球蛋白血症或脂肪含量过高 均可使浊度增加，故应空腹采血。 4.样本陈旧或反复冻融可影响检测结果，故待检血清 要新鲜，防止污染及聚合IgG形成。通常4℃冰箱保存 不能超过3天，-20℃保存时间可适当延长。
主要试剂与器材
1、待检血清。 2、0.1mol/L pH8.4硼酸缓冲液(BBS)、 3、4.1% PEG标准溶液。 4、分光光度计、离心机、微量加样器、 试管、吸管等。

操作方法
1. 待检血清用BBS作1∶3稀释 (血清0.4ml加入BBS缓冲液0.8ml)。
2. 试剂及加入量(ml) 测定管 对照管 1：3稀释血清 0.2 0.2 41g/L PEG 2.0 -pH8.4 BBS-2.0 -2.0 3. 充分混匀，放4℃冰箱1h，取出，放室温 10min，以BBS调零，495nm波长比色。 4. 计算 待测血清浊度值= （测定管A-对照管A值）×100
记录实验结果


A测定= A对照= 血清浊度值= 正常血清CIC的参考值： A值=4.3±2.0 (X±SD）； 0.043±0.02(X±SDC检测的临床意义
1.CIC检测一般无特异性诊断意义，但对免疫性疾病 的病情监测，疗效，有一定价值 2. CIC增高：见于某些自身免疫性疾病： 如SLE、类风湿、结节性多动脉炎、小儿肾炎、 急性链球菌感染后肾炎、慢性乙肝以及肿瘤患者， 血清中可检出循环免疫复合物。 3.中等大小的可溶性免疫复合物在血管中沉积是引起 Ⅲ型超敏反应主要因素，有助于判断Ⅲ型超敏反应 的发生，发展，预防对细胞，组织的损伤。
美丽的海医校园
临床免疫学实验指导
海南医学院 检验学院
吴荣泉
实验八、循环免疫复合物测定（CIC）
相应的抗原抗体在体内结合形成免疫复合物，与其他 免疫活性物质结合后沉积在血管壁，可导致血管、 组织、器官的损伤，引起多种免疫性疾病。
CIC的检测方法：
按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学 特性的改变而设计。 ①PEG比浊法;沉淀比浊，比较常用 ②ELISA法; ③细胞法——Raji细胞法;（伯基特淋巴瘤细胞） ④抗人球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验
实验原理—PEG比浊法

聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG ）沉淀法
PEG是一种不带电荷、直链大分子结构的多糖， 有强脱水作用，不同浓度的聚乙二醇(PEG)能选择 性地沉淀不同的蛋白质。利用终浓度为3-5%的PEG,可 选择性的沉淀CIC。用分光光度计测定其吸光度A值， 可反映CIC的相对含量。
实验报告与复习题
1.报告实验结果，并与参考值比较分析
2.简述PEG法检测CIC的实验原理 3.简述CIC 检测的临床意义