不同提取方法对山楂总黄酮含量的影响

不同提取方法对山楂总黄酮含量的影响
骆晓沛;张守勤;张格;王梦雨;董雯
【摘要】考察了几种提取方法对山楂果总黄酮提取率的影响.同时,采用超高压提取法、超声波法、微波法、索氏提取法获得山楂提取液.超高压提取法山楂总黄酮提取率最高,为5.44%,其次是索式法,为5.12%;超声波法4.66%;微波法提取率最低,为3.76%.以50%乙醇为溶剂, 300MPa超高压提取3min,提取效率较高,且提取液杂质少, 超高压提取是一种较为理想的提取方法.
【期刊名称】《农机化研究》
【年(卷),期】2008(000)009
【总页数】3页(P145-146,149)
【关键词】山楂黄酮;超高压提取法;超声波法;微波法;索氏提取法
【作者】骆晓沛;张守勤;张格;王梦雨;董雯
【作者单位】吉林大学,生物与农业工程学院,长春,130022;吉林大学,生物与农业工程学院,长春,130022;吉林大学,生物与农业工程学院,长春,130022;吉林大学,生物与农业工程学院,长春,130022;吉林大学,生物与农业工程学院,长春,130022
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
0 引言
山楂是蔷薇科植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br.)或山楂
C.pinnatifida Bge.的成熟干燥果实，为传统中药材，能开胃消食、化滞消积、活
血化淤、收敛止痢。

山楂又是水果，生熟食用均可。

近年临床常以生山楂治疗高血脂、高血压、冠心病等，民间还用以食疗养生、保健益寿。

山楂果实中含有多种化学成分,其中黄酮是山楂中的一大类化合物, 是治疗心血管疾病和抗肿瘤的活性成分，能够降血压,降低胆固醇和血脂在血管壁上的沉积,增加皮下毛细血管的通透性,对心脑血管系统疾病有明显的疗效[1]。

山楂果总黄酮对正常细胞的生长无明显影响，
但对肿瘤细胞的生长却有显著抑制作用[2]。

作为盛产山楂的国家，我国山楂来源
尤为充足，成本低，因而充分利用山楂这一可再生的资源去开发生产新药，其前景广阔。

近年来,超高压技术应用于提取植物中的黄酮、苷类等生物活性物质研究已有报道[3-5],其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分等特点。

本文对超高压提取法、超
声波法、微波法、索氏提取法提取山楂果总黄酮的工艺条件进行了初步研究和比较，为今后进一步开发利用山楂资源提供了技术依据。

1 材料与方法
1.1 材料
DL700超高压等静压机(上海大隆机器厂)；紫外可见分光光度计27520型(上海精密科学仪器有限公司)；MA110电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)；JY922Ⅱ
型超声波细胞粉碎机(宁波新兴科器研究所)；微波炉(青海海尔微波制品有限公司)；循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。

山楂果片,购于吉林大药房；对照品芦丁,购于中国药品生物制品检定所。

其它试剂
均为分析纯。

1.2 方法
1) 紫外分光光度法测定黄酮含量。

标准溶液的配制：精密称取干燥至恒重的芦丁
标准品10mg,置50mL容量瓶中,加无水乙醇20mL,轻摇使充分溶解，定容，摇匀，
得0.2mg/mL芦丁标准液。

标准曲线的绘制[6]：精密吸取标准溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL和0mL分别置25mL容量瓶中,各加水至6mL；加入5%亚硝酸钠溶液1mL后摇匀,
静置6min；加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀，静置6min后；加入4%氢氧化钠溶
液10mL；摇匀后再加水定容,放置15min；立即用分光光度法在500nm波长处
测定吸光度(A)值。

以吸光度为纵坐标，浓度(C，m/V)为横坐标绘制曲线，计算标准曲线的回归方程为
C=0.083(A-0.022) r =0.9992
样品的测定：吸取样品液1mL至25 mL容量瓶中，步骤同上，在500nm波长处测定吸光度(A)值，计算出山楂果中黄酮的提取率Y(%)，则
Y=0.083(A-0.022)×V/V1×V2/m×100%
式中 A—吸光值；
V—测量时定容体积；
V1—检测时所取提取液体积；
V2—过滤后定容体积；
m—山楂果样品质量。

2) 山楂果实预处理。

将山楂果片置于70℃真空干燥箱中恒温干燥24h,取出后粉碎成40目粉末,置于干燥器内保存备用。

3) 超高压提取。

精密称取山楂果粉末1g, 加入50%乙醇40mL, 混匀，浸泡2h，300MPa超高压处理3min，减压抽滤，得到样品液。

4) 微波提取。

精密称取山楂果粉末1g,加入50%乙醇20mL, 混匀后放入微波炉(功率为800W)，微波照射4min, 减压抽滤，得样品液。

5) 超声提取。

精密称取山楂果粉末1g,加入60%乙醇20mL , 混匀，超声45min，减压抽滤，得到样品液。

6) 索氏提取。

精密称取山楂果粉末1g，加入60%乙醇60mL，提取3h，减压抽滤，得样品液。

2 结果与讨论
2.1 不同提取方法最优工艺条件的研究
在单因素试验的基础上，选择乙醇浓度、料液比、压力及保压时间为影响山楂果黄酮类化合物提取效果的因素，选用L9(34)正交表对山楂果总黄酮的常温超高压法
提取工艺进行研究[7]。

超高压提取最优工艺参数为：提取溶剂为50%乙醇，料液比为1：40，浸泡时间2h，提取压力300MPa，提取时间为3min；黄酮提取率
为5.44%。

在考察了乙醇浓度、料液比、提取时间3个单因素的基础上，采用正交试验优化,
分别进行试验，研究了超声波法为、微波法、索氏提取法提取山楂果总黄酮的最佳工艺条件[8]。

微波提取最优工艺参数为：乙醇浓度50%, 微波作用时间4min, 料
液比为1：20；超声提取最优工艺参数为：乙醇浓度60%, 超声波作用时间
45min, 料液比为1：20；索氏提取最优工艺参数为：乙醇浓度60%，料液比为1：60，提取时间3h。

2.2 不同提取方法对山楂果总黄酮提取率的影响
超高压提取法、超声波法、微波法、索氏提取法提取山楂果总黄酮的结果,如表1
所示。

表1 不同提取方法对总黄酮提取的影响Tab.1 Effects of different extraction methods on yield提取方法提取时间/min 黄酮提取率/% 索式法 180
5.12 微波法 4 3.76 超声波法 45 4.66超高压法 3 5.44
从试验结果可以看出，采用不同方法提取山楂黄酮，其提取率差异很大。

其中，超高压提取法山楂总黄酮提取率最高，为5.44%；其次是索式法提取，为5.12%；
超声波法为4.66%；微波法提取率最低，为3.76%。

试验过程还发现，不同方法
提取所得提取液差异也很大，微波法和超声波法得到的提取液十分混浊，说明其提取液中可能含有大量糖、蛋白质等杂质，索式法提取液稍有混浊，而超高压提取液呈淡红色，十分澄清。

这些特性说明了超高压提取法具有选择性提取的特性，同时也表明，采用超高压提取山楂黄酮，有利于山楂黄酮的进一步分离纯化。

就提取时间而言，超高压法提取时间最短，仅需3min，而提取率仅次于超高压法的索式提取却需3h，耗能较大。

3 结论
与常规提取方法和近年来出现的新型提取技术相比，常温超高压提取技术有下述特点：常温超高压提取技术可以使用多种溶剂，包括水、不同浓度的醇和其它有机溶剂。

可以按照中药材的性质和提取的目标成分选择最合适的提取溶剂，从不同的中药材中提取不同性质(如生物碱、黄酮、皂甙、多糖、挥发油)的有效成分。

超高压提取具有选择性,超高压提取的提取液中杂质含量较低，因而超高压提取液的分离纯化非常简单。

这样一来，不但可以大量减少分离纯化药品的消耗，而且缩短了分离纯化时间和占用的设备，还易于得到高纯度的单一成分。

纯度提高带来的经济效益是十分巨大的。

超高压提取时间短，提取率高。

超高压提取只使用电能，而不需要锅炉等热源，因此无灰尘、炉渣等废物、废气排放，无污染，环保节能,适于大规模生产。

索氏提取虽然效率略高,但耗时、费力。

因此, 超高压提取是一种较为理想的提取方法。

参考文献:
【相关文献】
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[7] 陈瑞战,张守勤,王长征.常温超高压提取人参总皂苷[J].化工学报，2005(5)：911-914.
[8] 赵春艳，张泽生，刘海俊.微波提取山楂果中原花青素工艺的研究[J].食品研究与开发，2005，
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Abstract ID:1003-188X(2008)09-0145-EA。