IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选

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ＹＵＡＮＱ，ＨＵＡＮＧＬｉ，ＧＵＯＸｉ — Ｙｕａｎ，ＹＥｙ一Ｃｈｕｎ，ＮＩＡＮＳｉ — ｊｉ．ＴｈｅＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｌｕｚｈｏｕ
菌体展示技术分别筛选抗ＩＬ－４和抗ＩＬ．１３人源单链抗体（ｓｅＦｖ）。结果：扩增的ＩＬ－４ｃＤＮＡ大小为２８０ｂｐ，表达的融合蛋白大
小为２７ｋＤ左右。扩增的ＩＬ一１３ｃＤＮＡ大小为２５２ｂｐ，表达的融合蛋白大小为２５ｋＤ左右。分别以生物素化的ＩＬ－４和ＩＬ一１３蛋白为％的ｓｃＦｖｓ与ＩＬ－４有结合特性．有约２７％的ｓｃＦｖｓ与ＩＬ一１３有结合特性。筛选了４株分别与ＩＬ－４和ＩＬ一１３结合能力强的单链抗体进行了Ｗｅｓｔｅｎｒｂｌｏｔ鉴定和测序。结论：
ｄｉｓｐｌａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｍＲＮＡｏｆＰＢＭＣｆｒｏｍｈｅａｌｔｈｙｖｏｌｕｎｔｅｅｒｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｃＤＮＡｏｆＩＬ－４ａｎｄＩＬ一１３ｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙＲＴ— ＰＣＲ．ａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩＬ－４ａｎｄＩＬ一１３ｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ．ＴｈｅｓｃＦｖｓａｇａｉｎｓｔＩＬ－４ａｎｄＩＬ一１３ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍａｎ０ｎ — ｉｍ— ｍｕｎｅｈｕｍａｎｓｃＦｖｓｌｉｂｒａｒｙｂｙｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｗｉｔｈｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎＩＬ４ａｎｄＩＬ１３ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｓｉｚｅｏｆｃＤＮＡｏｆａｍｐｌｉｉｆｅｄＩＬ＿４ｗａｓ２８０ｂｐ，ａｎｄｔｈａｔｏｆｅｘｐｒｅｓｓｅｄｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｂｏｕｔ２７ｋＤ．ＴｈｅｓｉｚｅｏｆｃＤＮＡｏｆａｍｐｌｉｉｆｅｄＩＬ一１３ｗａｓ２５２ｂｐ，ａｎｄｔｈａｔｏｆｅｘｐｒｅｓｓｅｄｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｂｏｕｔ２５ｋＤ．ＴｈｅｈｕｍａｎｓｃＦｖｓｌｉｂｒａｒｙｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄｆｏｒｔｈｒｅｅｒｏｕｎｄｓｂｙｉｒｂｏｓｏｍｅｄｉｓｐｌａｙ．ａｎｄａｂｏｕｔ３７％ｓｃＦｖｓｈａｓｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｉｔｈＩＬ＿４ａｎｄａｂｏｕｔ２７％ｓｃＦｖｓｈａｓｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｉｔｈＩＬ一１３．ＦｏｕｒｓｃＦｖｓｗｉｔｈｇｏｏｄｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｉｔｈＩＬ＿４ｏｒＩＬ一１３ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｓｃＦｖｓａｇａｉｎｓｔＩＬ－４ａｎｄａｇａｉｎｓｔＩＬ．１３ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－４８４Ｘ．２０１３．０６．０１９
ＩＬ－４、ＩＬ－１３蛋白表达及抗ＩＬ．４、ＩＬ．１３人源单链抗体的筛选
成功筛选到抗ＩＬ＿４和抗ＩＬ一１３人源性单链抗体。
［关键词］ＩＬ－４；ＩＬ一１３；人源单链抗体；筛选
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆⅡ ＿４ａｎｄＩＬ一１３ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｓｃＦｖｓａｇａｉｓｔｎＩＬ＿４ｎｄａＩＬ－１３
ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｃｈｉｎａ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＬ－４ａｎｄＩＬ一１３ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｓｃＦｖｓａｇａｉｎｓｔＩＬ－４ａｎｄＩＬ一１３ｂｙｐｈａｇｅ
袁青黄黎
中国图书分类号
郭夕源叶迎春
Ｒ３９２．１１
年四季② （泸州医学院基础医学院，泸州６４６０００）
Ａ文章编号１０００．．４８４Ｘ（２０１３）０６－０６４４
文献标识码
［摘
要］目的：表达ＩＬ－４和ＩＬ一１３单链抗体。方法：采用ＲＴ —
ＰＣＲ从健康志愿者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）ｍＲＮＡ中扩增ＩＬ－４和ＩＬ．１３ｃＤＮＡ；构建硫氧还蛋白融合表达载体，转化大肠杆菌ＢＬ２１，ＩＰＴＧ诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的ＩＬ４和ＩＬ