植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药残留检测技术研究

植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药残留检测技术研究
张云;陈俊玉;陈泽宇;张信仁
【摘要】A gel permeation chromatography (GPC)-liquid chromatography method was developed for the simultaneous determination of 3 kinds of o-amino benzoic diamide pesticide residues
(cyantraniliprole,flubendiamide and chlorantraniliprole) in vegetable oil.O-amino benzoic diamide pesticide residues in vegetable oil extracted with cyclohexane and ethyl acetate mixture solution was purified by gel permeation chromatography system;acetonitrile and 0.1 mol/L ammonium acetate aqueous solution (58∶42) was taken as mobile phase to determine by the DAD detector and quantify by external standard method.The results showed that by using this method to determine 3 kinds of o amino benzoic diamide pesticides,the limit of detection could achieved 0.1
mg/kg;the relative modular were better than 0.9998 for the standard curve concentration between 0.1 ～ 2 mg/L;the recoveries were between
70.1％～99.1％ for 0.1,0.2,1 mg/kg add level;the relatively standard deviations (RSDs) were between 3.0％～9.7％ with a good degree of precision.%建立了同时测定植物油中溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺3种邻氨基苯甲二酰胺类农药残留的凝胶渗透色谱(GPC)-液相色谱检测方法.植物油中残留的邻氨基苯甲二酰胺类农药,经环已烷-乙酸乙酯混合溶液提取后,用凝胶渗透色谱系统净化,以乙腈:0.1 mol/L的乙酸铵水溶液(58∶ 42)作为流动相,DAD检测器测定,外标法定量.测定结果表明:采用本方法检测植物油中3种邻氨基苯甲二酰胺类农药,方法检出限均能达到0.1 mg/kg,在标准曲线质量浓度0.1～2 mg/L之间线
性相关系数均大于0.999 8,在0.1、0.2、1mg/kg水平添加回收,回收率在
70.1％～99.1％范围之间,准确度较高;相对标准偏差范围在3.0％～9.7％之间,精密度较好.
【期刊名称】《中国粮油学报》
【年(卷),期】2017(032)008
【总页数】5页(P118-122)
【关键词】植物油;邻氨基苯甲二酰胺;凝胶渗透色谱;液相色谱
【作者】张云;陈俊玉;陈泽宇;张信仁
【作者单位】三明出入境检验检疫局,三明365000;东山出入境检验检疫局,漳州363401;三明出入境检验检疫局,三明365000;三明出入境检验检疫局,三明365000
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7
农药的广泛使用在防治病虫害的同时，对农产品的质量安全也造成了严重的危害。

近年来，植物油中农药残留现象越来越受关注。

植物油包括花生油、大豆油、菜籽油、芝麻油、葵花籽油和芥菜籽油等[1] ，是从植物的果实、种子、胚芽中得到的油脂。

部分残留在油料作物中的农药会伴随加工过程带入到植物油产品中。

溴氰虫酰胺(cyantraniliprole)、氟虫双酰胺(flubendiamide)和氯虫苯甲酰胺(chloranteraniliprole)是目前市面上常见的3种邻氨基苯甲二酰胺类农药。

该类杀虫剂是近几年Dupont公司从邻氨基苯甲二酰胺类化合物中筛选出来的两代广谱杀虫剂[2]，可有效防治鳞翅目、鞘翅目和半翅目等昆虫[3-4]。

该类农药具有很
好的市场潜力和广泛的应用前景[5-7]，已在美国、加拿大、韩国、日本等发达国
家登记使用。

基于安全考虑国际食品法典委员会(CAC)[8]、欧盟(EU)[9]、美国[10]和日本[11]等各国和国际组织已对其制定了限量标准。

我国也在2014年8月1号实施的GB 2763-2014[12]中规定了油料和油脂中的氯虫苯甲酰胺最大残留限量为0.3 mg/kg。

目前，国内外有关邻氨基苯甲二酰胺类农药残留检测报道，主要集中在原药[13]和动植物食品[14-15]中，鲜见植物油中同时测定溴氰虫酰胺、氟虫双
酰胺和氯虫苯甲酰胺等邻氨基苯甲二酰胺类农药残留的公开报道。

本研究采用凝胶渗透色谱系统结合高效液相色谱分析技术，建立植物油中3种邻氨基苯甲二酰胺
类农药残留分析和定量检测方法。

此方法适用于植物油中溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺的同时测定，并具有简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好的特点。

可满足国内外相关法规中溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺的检测要求。

1.1 仪器与试剂
Agilent1200高效液相色谱仪(配DAD检测器)、Autoclean凝胶渗透色谱仪：美
国LabTech公司。

菜籽油：市售。

乙腈、甲醇、乙酸胺为色谱纯，环已烷、乙酸乙酯为分析纯。

水：符合GB/T 6682—2008中一级水的规定。

溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺、氯虫苯甲
酰胺标准品，纯度均≥97%：Dr.Ehrenstorfer公司。

分别称取适量标准品用甲醇
配制成100 mg/L的标准储备液，该溶液在2～8 ℃环境中可保存3个月。

使用时根据需要以流动相配成标准工作液。

1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理
称取食用油样品2 g(精确至0.1 g)于10mL容量瓶中，加入环已烷-乙酸乙酯(1∶1，体积比)混合溶液定容至刻度，取样液2mL进样，用凝胶渗透色谱仪进行分离净化，收集9～15 min的组分，于氮吹仪中50 ℃条件下氮吹至干，用1 mL流动相漩涡
混匀溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜后，高效液相色谱测定。

1.2.2 凝胶渗透色谱条件
净化柱：S-X3 Bio-Beads(粒径38～75 μm，填料22 g)；流动相：环已烷-乙酸
乙酯(1∶1，体积比)；等度洗脱；流速：5 mL/min；净化程序：0～9 min弃去洗脱液，9～16 min收集洗脱液。

1.2.3 色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-P柱，150 mm×4.6 mm(i.d.)，5 μm，或其它等效色谱柱；柱温：40 ℃；进样量：50 μL；流速：1.0 mL/min；检测器：DAD 检测器，波长：240 nm；流动相：乙腈∶0.1mol/L的乙酸铵水溶液=58∶42。

1.2.4 定量测定
用混合标准工作溶液对样品溶液进行外标法定量，样品溶液中待测物的响应值应与相应浓度的对照标准物质响应值相当。

2.1 净化条件的选择与优化
在植物油中检测农药残留，高含量的油脂成分是最大的基体干扰要素，必须采用有效的前处理方法，否则不但回收率不高，而且会对分析仪器造成严重污染，降低使用寿命[16]。

常见的针对植物油中农药残留检测方法主要有浸泡振荡、液-液分配、超声提取等传统方法[17]，但该方法存在回收率低，净化不彻底等问题；也有报道采用固相萃取法[18]进行净化，固相萃取柱可以去除植物油基质，有机酸等杂质，但存在选择性不高，处理过程较为繁琐等缺点。

凝胶渗透色谱能将分子量较大的甘油三酯基质与目标农药组分有效分离开来，净化效果良好，且省去了大量的人工操作，近年来得到广泛推广使用[19]。

植物油中农药残留检测不同净化方法对比见表1。

利用凝胶渗透色谱法对植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药进行净化。

为确定最佳的样品收集时间，从6 min起，以1 min为步长，每分钟收集1管洗脱液，共收集
15管，收集液于氮吹仪中50 ℃条件下氮吹至干，流动相溶解后过滤，液相色谱
测定。

结果表明，前3管未检出，后5管也均未检出，检测结果见图1。

因此，
确定收集时间为9～15 min。

2.2 色谱条件的优化
乙腈和甲醇是检测农药残留最常用的2种有机系流动相。

亢晓冬等[13]曾采用(甲
醇+水)作为氯虫苯甲酰胺的流动相，也有报道采用(乙腈+水+磷酸)作为流动相[20]。

为了获取目标物较好的保留、分离和响应效果，本试验对比了(甲醇+水)、(乙腈+水+磷酸)以及(乙腈+水)作为流动相的效果，发现采用乙腈为有机系流动相时分离效果较好，灵敏度较高，且柱压较低。

对比了乙腈为有机系流动相时，加酸与不加酸条件下的信号大小，结果基本一致，但添加一定浓度的乙酸铵，峰型较好，标准样品谱图见图2。

2.3 方法的线性相关性和测定低限
准确配制邻氨基苯甲二酰胺类系列标准溶液，质量浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、2 mg/L。

按照1.2中的仪器条件进样分析后，以峰面积y对质量浓度x绘制工作
曲线。

线性相关系数R均大于等于0.999 8，在0.1～2mg/L范围内呈良好的线性关系，结果见表2。

根据信噪比S/N≥10为定量限(limit of quantitation, LOQ)和S/N≥3为检出限(limit of detection, LOD)的参考规定，结合样品处理过程中的稀释倍数，计算各组分的方法检出限分别为0.008、0.027、0.016 mg/kg，定量限
分别为0.03、0.09和0.06 mg/kg。

2.4 方法的准确度和精密度试验
以不含溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺的植物油样品为本底，分别添加系列浓度的待测药物标准溶液，进行回收率试验，重复测定6次，计算平均回收率
和相对标准偏差。

结果见表3。

方法回收率在70.1%～99.1%之间，同一目标物的平均回收率随着添加浓度的增加而逐渐提高；相对标准偏差在3.0～9.7之间，在
高的添加水平上，相对标准偏差更小，结果重复性更好。

2.5 实际样品测定
应用本研究所建立的方法对市场上购买的10批菜籽油样品进行检测，结果在一批样品中检出氯虫苯甲酰胺，检出值为0.41 mg/kg，超过GB 2763中规定的最大
残留限量0.3 mg/kg。

由图3可见，在目标物质出峰前后没有杂质峰干扰。

本研究将GPC净化技术和液相色谱检测技术相结合测定植物油中溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺等3种邻氨基苯甲二酰胺类农药残留。

各化合物测定低
限均可达到0.1mg/kg；在质量浓度0.1～2mg/L之间线性关系良好，相关系数R 均大于0.999 8；对于0.1、0.2、1 mg/kg 3个水平添加回收，回收率在
70.1%～99.1%之间，相对标准偏差在3.0%～9.7%之间。

该方法快速简便、灵敏度高、净化效果好，显著地缩短了检测时间，可应用于植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药的快速分析。

【相关文献】
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