脱钙骨切片镀银法

脱钙骨切片镀银法
脱钙骨切片镀银法
一、脱钙骨切片制作
1．脱钙：新鲜骨10%福尔马林或4%多聚甲醛固定，5%硝酸或10~15%EDTA液脱钙
或以硝酸脱钙兼固定液处理：
硝酸5%，甲醛10%，水80%，甘油5%
2 蒸馏水洗去多余的酸液
3 5%硫酸钠水溶液中和
4 自来水浸泡或冲洗充分
5 脱水、透明或脱水兼透明：
脱水、透明：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→无水酒精→无水酒精-二甲苯→二甲苯
脱水兼透明：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→正丁醇（1-Butanol）2~4次
6 浸蜡
60~65℃：浸蜡2次，软蜡（48～52℃）30分钟，硬蜡（58～62℃）45~60分钟
7 包埋、切片、展片、烘干
切片厚度10微米左右（8~20微米）
二、镀银法（硝酸银染色法）
方法：
⑴切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至水。

⑵蒸馏水洗5~10分钟。

⑶入1%硝酸银（Silver nitrate）水溶液10~30分钟（暴露于阳光下）。

用普通灯光约需1~2小时，紫外线灯需5分钟。

⑷蒸馏水洗30~60秒。

⑸入5%硫代硫酸钠（sodium hyposulfite）水溶液处理3分钟。

⑹蒸馏水充分洗涤。

可用Cajal还原液或10%甲醛液还原。

⑺用1%中性红（Neutral red）、沙黄（Safranine）水溶液或van Gieson液复染，蒸馏水略洗。

⑻入95%酒精分色及无水酒精脱水
⑼二甲苯透明，中性树胶封片。

结果：
骨基质（骨质）质棕黑色，细胞核红色。