抗原抗体反应的类型专家讲座

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３.有机溶剂沉淀法 ４.水溶性非离子型聚合物沉淀法 惯用聚合物为聚乙 二醇（Polyethyleneglycol，PEG）及硫酸葡聚糖。 水溶性聚合物沉淀蛋白质机制仍不十分清楚，大致 机制有以下解释: ①聚合物与蛋白质形成共沉淀物； ②聚合物与蛋白质之间发生水重分配； ③聚合物与蛋白质形成复合物。
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（4）酶处理法: 溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等，在一定条件下
能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下， PH8.0可对革兰阳性菌细胞壁溶菌作用，该法适合 用于各种微生物。酶破坏细胞含有作用条件温和、 内含物成份不易受到破坏、细胞壁损坏程度能够控 制等特点。
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（二）超速离心分离法 超速离心分离法最惯用于分离亚细胞成份及大
分子蛋白质, 它是深入纯化第一次过筛。 （三）选择性沉淀法
选择性沉淀法是采取各种沉淀剂或利用一些条 件促使抗原成份沉淀方法。 １.核酸去除法 ２.盐析沉淀法
（1）抗原粗筛 （2）提取丙种球蛋白 （3）抗原浓缩
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2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原制备 制备抗原细胞包含正常细胞、传代细胞或病理
细胞（如肿瘤细胞）。细胞抗原普通分为三个组分: 膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）和细胞 核与核膜抗原。三种抗原制备均需将细胞破碎，其 方法有以下几个。
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（5）表面活性剂处理法: 在适当温度、pH及低离子强度条件下，表面活
性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜溶解或渗透性改变。 惯用表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS阴离子 型）、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚山梨酯 （非阳离子型）、苯扎溴胺等。该方法惯用于破碎 细菌，且作用比较温和。在提取核酸时惯用此方法 破碎细胞。
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细菌鞭毛抗原需用有动力菌株, 菌液用0.3％－ 0.5％甲醛处理, 而菌体抗标准需要100℃加温2－ 2.5h去掉鞭毛抗原后应用。毒素抗标准需要在杀菌 后再加 0.5％－l％氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗原 除用破碎法加工粗提外, 大多要加以适当纯化。有些
细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈浑浊 状或乳浊状, 多采取静脉内免疫法, 较少加佐剂作皮 内注射。
（1）重复冻融法: 将细胞或整块组织置－20℃冰箱 内冻结，然后置室温融化，如此重复2次，大部分 组织细胞及细胞内颗粒可冻融破碎。
（2）超声破碎法: 惯用于处理微生物和组织细胞。 （3）自溶法: 利用组织和微生物本身酶系统，在一 定pH和温度下，使其细胞裂解。自溶温度，对动物 组织细胞常选0－4℃，而对待微生物常选室温（22 －25℃）。自溶时常需加入少许防腐剂，如甲苯或 氯仿等，因NaN3抑制酶活力，则不宜使用。
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（四）凝胶过滤 凝胶过滤又名分子筛层析, 凝胶是含有三维空间
多孔网状结构物质, 经过处理平衡后, 装入层析柱内 成为分子筛支撑物。 （五）离子交换层析
离子交换层析是利用一些带电离子基团凝胶或 纤维素, 吸附交换带有相反电荷蛋白质抗原。
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抗原抗体反应的类型专家讲座源自第5页二、可溶性抗原制备和纯化
（一）组织和细胞粗抗原制备 １.组织细胞抗原制备 所用组织必须是新鲜
或低温保留。器官或组织材料取得后应马上去除表 面包膜或结缔组织以及一些大血管。脏器应用生理 盐水灌注，去除血管内残留血液及有形成份，再用 含0.5ｇ／LNaN3生理盐水洗去血迹及污染物。将洗 净组织剪成小块，然后进行粉碎。粉碎方法有两类: ①高速组织捣碎机法②研磨法
一、颗粒性抗原制备
颗粒性抗原包含人和各种动物细胞抗原以及各 种细菌抗原和寄生虫体抗原。血细胞抗原制备比较 简单, 惯用细胞抗原为绵羊红细胞, 采取该细胞制备 溶血素, 直接取新鲜绵羊红细胞, 以无菌生理盐水洗 涤3次（每次离心r／min 10min）, 最终配成106／ ml浓度细胞悬液, 即可应用。细菌抗原多用液体或固 体纯培养物, 经集菌后处理。
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第三章 免疫原和抗血清制备
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抗原和抗体是免疫学检测两个主要原因；也是 整个免疫反应基本条件。
第一节 免疫原制备
免疫原是诱导机体产生抗体和致敏淋巴细胞, 并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反 应物质。
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