肾移植术后高脂血的症患者碱性成纤维细胞生长因子和受体mRN表达及辛伐他汀降脂治疗对其影响

肾移植术后高脂血症患者碱性成纤维细胞生长因子和受体mRNA表达及辛伐他汀降
脂治疗对其影响
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肾移植术后高脂血症患者碱性成纤维细胞
生长因子和受体mRNA表达及辛伐他汀
降脂治疗对其影响
王玉新王晓鸿李清芹陆元善邹和群徐琴君唐孝达
[中图分类号】R617[文献标识码】A[文章编号】1001-9057(2005)05-0322-03 [摘要】目的研究肾脏移植术后高脂血症患者外周血单个核细胞中碱性成纤维细胞生长
因子(bFGF)及其受体FGFR2mRNA表达水平及降脂治疗后的改变.方法肾移植术血脂正常
组,血脂增高组及正常对照组各30例,血脂增高组应用辛伐他汀20mg/d进行降脂治疗,于服药后
1.5,3个月复查血脂,同时应用逆转录一多聚合酶链反应方法检测外周血单个核细胞碱性成纤维
细胞生长因子及其受体mRNA表达.结果伴高脂血症的肾移植受者辛伐他汀降脂治疗1,5个月
血脂水及外周血单个核细胞中bFGF及其受体FGFR2mRNA显着高于血脂正常组及对照组,辛伐
他汀治疗1.5个月后血脂水平及bFGF,FGFR2mRNA表达水平显着下降,治疗3个月时进一步下
降.结论伴高脂血症的肾移植受者bFGF及其受体FGFR2mRNA表达水平上调,可能是高脂血
症引起动脉硬化,慢性移植肾病的机制之一.辛伐他汀降脂治疗可使碱性成纤维细胞生长因子及
其受体的表达下调.
[关键词】肾移植;高脂血症;碱性成纤维细胞生长因子;辛伐他汀TheexpressionofbFGFanditsreceptormRNAinperipheralbloodmononuclearcellsofkidn ey transplantpatientswithhyperlipidemiaandtheinfluenceoftreatmentwithsimvastatin矸ⅣlG
,l,Xiao/wng,Qingqin,etal,DepartmentofNephrology,SunYat-senUn~ers/ty,Zhuha/ 5190o0.China
[Abstract]Obj~tiveToinvestigatethemRNAexpressionsofbasicfibroblastgrowthfactor(b F-
GF)anditsreceptorFGFR2inperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)ofrenaltransplan trecipients
withhyperlipidemiaandtheeffectofsimvastatinonthem.MethodsSixtyrecipientsweresele ctedfrom
167renaltransplantrecipients,anddividedintohyperlipidemiagroup(,l=30)andnon-hyperl ipidemia
group(,l=30),Controlgroupconsistsof30healthyvolunteers,erecipientswithhyperlipidem iawere
treatedwithsimvastatinfor3months.Serumlipidlevelsweremeasuredinallrecipientsbefor eand6
monthsafterrenaltransplantation.Serumlipidintherecipientwithhyperlipidemiawasalsod eterminedaf-
ter1.5monthsand3monthsofsimvastatintreatment,ThemRNAofbFGFandFGFR2wasdet ectedwith
RT-PCR.ResultsSerumlipidandthemRNAexpressionofbFGFandFGFR2inrenaltranspla ntrecipi. entsweresignificantlyincreasedcomparedtohealthycontrols.whichweremoreevidentinh yperlipidemia
groupthaninnon-hyperlipidemiagroup.Serumlipidinhyperlipidemiagroupdecreasedsign ificantlyafter
treatmentwithsimvastafin,meanwhile.themRNAexpressionsofbFGFandFGFR2werere ducedsig~i.
candyatthe1.5thmonthand3rdmonthofsimvastatintreatment.themRNAexpressionofbF GFandFG
FR2reducedobviously.ConclusionsTheincreaseofthemRNAexpressionofbFGFandFGF R2inrenal transplantrecipientswithhyperlipidemiamightbeinvolvedinCANduetohyperlipidemia.S imvastatinmay beusedtoreducethemRNAexpressionofbFGFandFGFR2inrenalrecipientwithhyperlipid emia.
[Keywords]Kidneytransplantation;Hyperlipidemia;Basicfibroblastgrowthfactor(bF- GF);Simvastatin
肾移植术后60%以上的患者伴有高脂血症,是移
植后心血管并发症及慢性移植肾病(CAN)发生的重
作者单位:519000广东珠海,中山大学附属第五医院肾内科(王玉
新,王晓鸿,李清芹,邹和群);上海交通大学附属上海第一人民医院肾脏
内科(陆元善,徐琴君,唐孝达)
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论着?
要因¨,转化生长因子,成纤维细胞生长因子
(FGF)等生长因子的异常表达是移植后心血管并发症
及移植肾慢性失功重要机制,.FGF是一组由多种
细胞分泌,对多种细胞的增生,分化及功能具有强烈调
节作用的多肽,其中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)
2005年5月第22卷第5期JClinInternMed,May2005,V o1,22,No.5
及其受体FGFR2较为重要,bFGF及其受体FGFR2的
异常表达与动脉硬化及CAN的发生有重要关联.
我们用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)方法探讨伴
高脂血症的肾移植患者外周血单个核细胞(PBMC)中bFGF及其受体FGFR2mRNA表达水平及辛伐他汀治
疗对其的影响.
对象与方法
1.对象:肾移植患者107例,原发病为慢性肾小球
肾炎,移植前血清胆固醇,甘油三酯水平正常;术后采
用强的松+环胞素+霉酚酸酯抗排斥反应治疗;尿量,
尿常规正常,血肌酐<170mmol/L;根据移植后6—8
个月血脂水平分为两组:移植后血脂正常组3O例,年
龄(40±10)岁,其中男性16例,女性14例;血脂增高
组3O例(TC>5.85mmoVL或TG>1.70mmo~L),年龄(41±9)岁,其中男性17例,女性13例;血脂增高
组服用辛伐他汀20mg/a.对照组3O例,为健康体检
者,年龄(40±9)岁,男性15例,女性15例,无肝肾疾
病,糖尿病及心脑血管疾病.
2.方法
(1)bFGF及FGFR2mRNA表达水平的检测:应用
Primer3软件设计引物序列,由TAKARA公司合成.
引物序列及扩增产物长度如下:bFGF上游引物序列为
5'一ATGGTCCCTCTAACTGGGCT一3',下游引物序列为5'一GAAGcITI-I'ccAGcAAAGTGG一3',扩增产物长度为159bp;FGFR2上游引物序列为5'一AAGGGCAACTAC—CTGCAT一3',下游引物序列为5'一TCGATGTGCTT—TAGCCACTG一3',扩增产物长度为279bp;内参照B—actin上游引物序列为5'_TGGCACACACCTI'CTA—CAATGAGCTGCG一3',下游引物序列为5'一CGT—CATACTCCTI'GCTCCACATCTGC-3',扩增产物长度为838bp.
标本收集:于肾移植前1天及术后6—8个月抽取
枸橼酸钠抗凝血5ml用于分离PMNC及总RNA抽提. 高脂血症组于辛伐他汀治疗后1.5个月,3个月按上
述方法抽血并复查血脂.所有受试者抽血前1个月内
无感染性病史.
PMNC的分离采用Ficol细胞分离液(Sigma公
司)及梯度离心法获取,总RNA的抽提采用TriZol一
步法.试剂盒为Promega公司产品.
逆转录:取总RNA1txg,采用Gibco公司逆转录试
剂盒,按说明书进行操作,cDNA分装后一2O℃储存备用.
PCR扩增:10×buffer5l,2.5mmol/LMgCE4Ixl,
dNTP1,TaqDNA聚合酶1.5U,相应引物2,加水
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至5Ol;扩增程序为:95℃预变性3rain进入循环,94
℃变性30see,退火45see,72oc延伸1min,最后72℃
保温10min.退火温度分别为:bFGF为55oC,FGFR
58oC,B—actin退火温度同相应目标引物.
bFGF及FGFR2mRNA半定量分析:取扩增后目
标产物1Ol,p—actin2l,2.O%琼脂糖凝胶电泳4O分钟,紫外光下观察结果,选择Marker中2kb条带作参照,Synegenetool软件测产物条带的相对重量,计算目
标产物与B—actin的比值.
(2)血脂检测:对照组与病例组均为空腹血脂,病
例组分别于移植前,移植后6—8个月检测血脂水平.
血清总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)用酶法检测;
高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)用直接法测定;当血清TG<4mmol/,L时,低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)根
据Ffiedewald公式计算:LDLC:TC—HDLC—TG/2.2
(单位均为mmol/,L),TG>4.0mmol/L时,低密度
脂蛋白胆固醇用直接法测定.上述试剂均为Boe—
hringermannhein公司产品.
3.统计学处理:结果用±s表示,组间均数比较
采用方差分析或t检验.
结果
1.血脂增高组患者血清TC,TG,LDL—C水平均显
着高于对照组及血脂正常组组,对照组及血脂正常组
血清TC,TG,LDL—C水平比较差异无显着性.见表1.
2.血脂增高组患者辛伐他汀降脂治疗1.5个月,3
个月血脂的变化:治疗1.5个月,3个月TC,TG,LDL—C
呈递减趋势,且有显着性差异,HDL—C水平于治疗3
个月时显着增高.见表2.
3.各组间细胞生长因子及其受体mRNA表达水
平的比较及血脂增高组降脂治疗后的变化:血脂正常
组,血脂增高组肾移植受者移植后外周血bFGF,FG—
FR2mRNA表达水平均显着高于对照组;血脂增高组
降脂治疗后呈逐步下降趋势.见表3.
表1对照组及肾移植患者移植前后血脂水平比较
(mmol/L,孟_-4-s)
注:与对照组比较,'P<0.O1;与移植前比较,P<0.O1
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324?志2005年5月第22卷第5魍JClinInternMed~May2005pV ol,22,No.5 表2血脂增高组辛伐他汀治疗前后血脂水平的比较
(mmol/L,±s)
项目
§疗前7.30±1.893.60±1.521.38±O.593.O0±1.41
治疗1.5个月5.60±1.29''2.58±1.20''1.31±O.6o2.71±1.19'
治疗3个月4.64±1.011.84±O.96?2.16±O.962.33±O.98" 注:与治疗前比较,'P<0.05,一P<0.O1;与治疗1.5个月比较,P<0.05,nap<0.01
表3对照组及肾移植患者外周血BFGF~I及BFGF~R3
表达水平及辛伐他汀治疗后的变化(±s)
注:与对照组比较,'P<O.O1;与血脂正常组比较,P<0.05;与治疗前比较,P<0.05;与治疗1.5个月比较,P<O.05
讨论
移植肾活检发现CAN的肾组织中存在单核/巨噬
细胞,泡沫细胞,活化的T细胞等多种细胞浸润,且
MHClI类抗原核PDGF—B受体过度表达,这些改变与
动脉粥样硬化性血管病变有许多共同之处J.有研
究发现,血总胆固醇,甘油三酯水平升高与程度与
CAN患者血管内膜增生,肾间质纤维化程度呈显着正
相关,术后高脂血症的肾移植受者,2年后CAN的发
生率显着增高,血甘油三酯与总胆固醇水平的增高均
为CAN的独立危险因素.上述研究及其它研究均
证实,高脂血症不仅是心血管疾病的独立危险因素,也
是移植肾幔性损伤及CAN发生的独立危险因素.
本组资料结果显示,肾移植患者bFGF及其受体
mRNA表达水平均显着高于对照组,其中伴高脂血症
的肾移植患者bFGF,FGFR的mRNA表达水平显着
高于血脂正常者,降脂治疗后显着降低.提示血脂水
平与bFGF和其相应受体mRNA的表达水平有关.其
机制可能是高脂血症导致泡沫细胞形成增多沉积于血
管壁,造成血管内膜损伤,产生趋化因子,促使单核细
胞,淋巴细胞积聚于损伤部位,血管平滑肌细胞迁移至
内皮下,并产生TGFI5,bFGF等各种生长因子'.
bFGF及其受体FGFR可抑制细胞外基质金属蛋白酶的合成,细胞外基质降解减少并沉积于血管内膜,有利于血管平滑肌细胞嵌人血管内膜,从而导致移植肾的
血管损害及CAN的发生,还可促进血管内皮细胞及平滑肌细胞的增殖,导致动脉内膜增厚及动脉粥样硬化
斑块新生毛细血管的形成,促进动脉硬化的发生,阻断FGFR,的作用则可减慢CAN及动脉硬化病变的进展].本组资料结果表明,bFGF及其受体FGFR
mRNA表达水平上调可能是高脂血症导致肾移植后CAN及心血管病变发生率增高的重要机制之一,下调bFGF及其受体FGFR2的表达可能有助于防治肾移植后CAN及心血管并发症的发生.因此,有必要对肾移
植后高脂血症患者bFGF及其受体FGFR在CAN及心血管病变发生中的作用做进一步的研究.辛伐他汀
治疗可显着下调外周血bFGF及其受体FGFRmRNA 表达水平,此作用除与血脂水平下降有关外,还可能有其它机制.辛伐他汀是3一羟基3一甲基戊二酰辅酶A 还原酶抑制剂,除降低血脂外,还可抑制淋巴细胞,单
核细胞及NK细胞的增殖与活性,临床上普遍用来治
疗高胆固醇血症.最新的研究证实辛伐他汀不仅可以
改善血管内皮细胞的功能,防治动脉硬化,还可诱导肾小球系膜细胞的凋亡,对肾小球硬化的防治具有一定
的作用].本组资料结果表明,辛伐他汀对肾脏移植
后的高脂血症的治疗具有较好的临床效果,有助于防
止移植肾脏的失功.
肾移植患者高脂血症可导致与动脉硬化,移植肾
慢性失功有关的bFGF及其受体mRNA表达水平上调.可能是高脂血症引起动脉硬化,移植肾慢性失功的机制之一;辛伐他汀治疗可使bFGF及其受体FGFR
mRNA表达下调,有必要进一步研究辛伐他汀对肾移
植后CAN及心血管病变发生的影响,为肾移植后CAN
及心血管病变防治提供新的有效方法.
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(收稿日期:2004-09-02)
(本文编辑:杨泽平)。