神经母细胞瘤组织MYCN扩增水平与Ki-67LI等生物学指标的关系
神经母细胞瘤的染色体和遗传学标记物
神经母细胞瘤的染色体和遗传学标记物神经母细胞瘤的染色体和遗传学标记物与成人肿瘤相比，儿童癌症的基因组异常和突变要少得多。
低风险神经母细胞瘤通常具有完整的染色体获得，并且肿瘤细胞的染色体构成经常是超二倍体（接近三倍体或五倍体/六倍体）。
相反，高危神经母细胞瘤包含仅影响特定染色体一部分的节段性染色体异常。
神经母细胞瘤中最常见的与预后不良相关的染色体异常是MYCN基因的体细胞获得性扩增，1p和11q的半合子缺失（hemizygous deletions），以及17q的节段性获得。
此外，高危神经母细胞瘤还可以在染色体区域5p15.33显示基因组重排，该区域位于端粒酶逆转录酶基因(TERT)的近端，导致染色体改变、DNA甲基化和TERT表达增强。
利用神经母细胞瘤组织样本的外显子组和全基因组测序进行的基因组调查显示体细胞突变数很低(12～18，中位数15)，并且没有单一的基因突变事件可以解释所有神经母细胞瘤病例的发展。
间变性淋巴瘤激酶(ALK)是在7～10%的原发性神经母细胞瘤中发现的最常见的突变基因。
ALK突变也存在于几乎所有的家族性神经母细胞瘤病例中，其占神经母细胞瘤病例的1～2%。
在家族性神经母细胞瘤以及大约4%的高危自发性神经母细胞瘤病例中也报道了配对的类同源盒2B(PHOX2B)基因的胚系功能丧失突变。
此外，已报道在原发性神经母细胞瘤中存在转录调控因子ATRX(2.5%的失活突变)、肿瘤抑制基因p53(TP53；在原发瘤中为1～2%，在复发肿瘤中为10%)、ARID1A/1B(2～3%的失活突变)、PTPN11(2.9%的激活突变)、MYCN(1.7%的激活突变)、NRAS(0.83%的激活突变)和BRCA2的体细胞突变。
然而，这些突变中的几个对神经母细胞瘤发展的重要性和相关性尚未确定。
其他检测频率较低的突变通常发生在蛋白参与信号转导通路调控的基因中，例如在3～5%的原发性神经母细胞瘤中检测到MAPK信号级联中的遗传损伤，以及在28%的负责正确神经发生的基因中检测到突变，其中许多基因属于Rho基因家族。
脑胶质瘤组织中MCM5、Ki-67的表达及临床意义
（ ｈｎｄ ｄｃｌ ｏｌ ｅ ｈｎｄ １０３ １Ｃ ｅｇ ｕＭｅｉ ｌｇ ，Ｃｅｇ ｕ６ ０８ ， ａＣ ｅＯｂｅｔ ｅ Ｔ ｘｌｒ ｔｅ ｉ ｉｃｎｅｏ Ｍ ｎ ｉ ７ｉ ｅｄｖｌ ｍ ｎ ｄｐｏｒｓｉ ｉｍ ． ｂｔ ｃ ： ｊｃｉ ｏｅｐｏｅ ｈ ｇ ｆ ａｃ ＭＣ ５ ａｄＫ － ｔ ｅｅ ｐ ｅｔ ｒ ｅｓ ｎｏ ｇｏ ａ ｒ ｖ ｓ ｎｉ ｆ ６ ｎｈ ｏ ｎ ａ ｇ ｏ ｆｌ
Ｍｅｈ ｄ Ｆ ｒ － ｕ ｓｅ ｄｓ ｏ ￣ ｓｅｉ ｅｓ（ｕ ｒ ｒｕ ）ａｄ６ｎ ｒ ｌ ｒ ｎｔ ｓｅ ｎ ｒ ａ ｇｏｐ ｗ ｒ ｓｌ ｔ ， ｔｏ ｓ ｏｔ ｆ ｒｅｅｔ ｌ ｍ ｐｃｍ ｎ ｔ ｏ ｐ ｎ ｏ ａ ｓｕｓ（ ｏ ｌ ｒｕ ） ｅｅ ｅ ｃ ｄ ｙｏ ｒ ｅ ｉ ｍｏ ｇ ｍａ ｂ ｉ ｉ ｍ ｅｅ
山东医药 ２ １ 年第 ５ 卷第 ２ ０１ ｌ ７期
脑 胶 质 瘤 组 织 中 Ｍ Ｍ 、 ｉ ７的表 达 Ｃ ５ Ｋ一 ６ 及 临床意义
刘馨莲ｈ， 李淑蓉 殷 。 舞 孙 。 静 （ １成都医学院， 成都 ６０ ８ ； １０ ３２广西壮族 自治ＫＡ Ｒ Ｉ院） ．， ｔ
摘要 ： 目的 探讨微 小染 色体维持蛋 白５ Ｍ Ｍ ） 细胞增殖相关核蛋 白（ ｉ ７ 在脑胶 质瘤发生 、 （Ｃ ５ 、 Ｋ－ ） ６ 发展 中的意
义。方法
选择手术切除的脑胶质瘤组织 ４ 份 （ ４ 肿瘤组 ） 和正常脑组 织 ６ （ 份 正常组 ） 采用免疫组 化法检 测两组 ， 肿瘤 组 、 常组 Ｍ Ｍ 的 ｕ 分别 为 １．６± ．９ ０ Ｐ＜ ．５ Ｋ－ 正 Ｃ５ ２ ９ ８４ 、 ， ００ ； ｉ ７的 ｕ 分别 为 １．９ ６ ００ ±
Ｍ Ｍ 、ｉ７ 达情 况［ Ｃ ５ Ｋ－ 表 ６ 以标记指数 （ 表示 ］用 Ｓｅｒａ 等级相关分析法分析两指标 问及与肿瘤 组 临床 病理特 ｕ） ， ｐａ ｎ ｍ 征的相关性。结 果 ７０ 、， ００ 。Ｍ Ｍ 、 ｉ７阳性表达与脑胶质瘤恶性 程度 密切相关 ； Ｃ ５ Ｋ－ 表 达呈正 相关 ， 不同分 ．７０Ｐ＜ ．５ Ｃ ５Ｋ－ ６ Ｍ Ｍ 与 ｉ７ ６ 在
神经母细胞瘤组织MYCN扩增水平与Ki-67LI等生物学指标的关系
2 N-Myc拷贝数水平与NB临床病理因素的关系
2.1 N-Myc扩增水平在另外6组（包括患者性别、年 龄、肿瘤原发部位、是否接受化疗以及血清 NSE、24小时尿VMA水平）中的差异均无统计 学意义（P＞0.05）。
附图
N-Myc无异常，40×100 绿色信号代表N-Myc基因
N-Myc扩增 40x100 色信号代表N-Myc基因
＜18个月 13例， ≥18个月 17例 原发部位：肾上腺 23例，
非肾上腺 7例
研究对象
病理分型： NB： 分化型 8例，分化差型 7例，
未分化型 1例，不明确型 7例 . GNB: 7例 临床参照INSS系统分期： 1期 5例， 2期 4例， 3期 6例， 4期 11例， 4S期 4例
研究内容
3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系
表3. Ki-67 标记指数与肿瘤组织学类型之间的关系
P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于NB组的平均秩次是 18.13大于GNB组的平均秩次6.86，故NB组的Ki-67 LI明显大于GNB组。
3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系
N-Myc扩增与Ki-67 LI
N-Myc 扩增与Ki-67 LI和NB的临床病理因 素间分别有何关系？ N-Myc 扩增与Ki-67 LI 间有何关系？
研究对象
2008.9至2009.3 30例石蜡包埋组织标本 神经母细胞瘤（NB） 节细胞性神经母细胞瘤(GNB)
研究对象
性别：男：19例，女：11例； 年龄：2月～9岁6月
≥30%
(++)
统计学分析
SPSS 11.5软件 确切概率法。 秩和检验(Mann-Whitney U test，
医学遗传学习题(附答案)第13章 肿瘤遗传学
第十二章肿瘤遗传学（一）选择题（A型选择题）1．以下哪个是对Ph染色体的正确描述：A．22q+ B．22q- C．9q+D．9q- E．der（22）t(9;22)(q34;q11)2．视网膜母细胞瘤（RB）的致病基因为：A．ras B．rb C．p21 D．MTS1 E．NM233．下列哪个基因为肿瘤转移抑制基因：A．ras B．rb C．p21 D．MTS1 E．NM234．下列哪种为慢性髓细胞白血病（CML）的标志染色体：A．13q14- B．5p- C．22q- D．t(8;14) E．17q+5．存在于正常细胞中，在适当环境下被激活可引起细胞恶性转化的基因是：A．癌基因 B．抑癌基因 C．原癌基因D．抗癌基因 E．隐性癌基因6．Knudson提出的“二次突变假说”中，非遗传性肿瘤的第一次突变发生在：A．精子 B．卵细胞 C．受精卵 D．体细胞 E．生殖母细胞7．慢性髓细胞性白血病属于______的肿瘤。
A. 多基因遗传B. 染色体畸变引起C. 遗传综合征D. 遗传易感性E. 单基因遗传8．Bloom综合征（BS）属于______。
A. 单基因遗传B. 多基因遗传C. 染色体畸变引起D. 遗传易感性E. 染色体不稳定综合征9．视网膜母细胞瘤属于______的肿瘤。
A. 单基因遗传B. 多基因遗传C. 染色体畸变引起D. 遗传易感性E. 染色体不稳定综合征10．共剂失调性毛细血管扩张症（AT）属于______。
A. 单基因遗传B. 多基因遗传C. 染色体不稳定综合征D. 遗传易感性E. 染色体畸变引起11．肾母细胞瘤属于______的肿瘤。
A. 染色体畸变引起B. 遗传易感性C. 染色体不稳定综合征D. 多基因遗传E. 单基因遗传12．着色性干皮病（XP）是一种罕见的、致死性AR遗传病，发病率为1/250000。
XP 属于______。
A. 多基因遗传B. 染色体不稳定综合征C. 遗传易感性D. 染色体畸变引起E. 单基因遗传13．家族性结肠息肉病属于______的肿瘤。
脑胶质瘤组织中MCMS、Ki-67的表达及临床意义
脑胶质瘤组织中MCMS、Ki-67的表达及临床意义刘馨莲;李淑蓉;殷舞;孙静【摘要】目的探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)、细胞增殖相关核蛋白(Ki-67)在脑胶质瘤发生、发展中的意义.方法选择手术切除的脑胶质瘤组织44份(肿瘤组)和正常脑组织6份(正常组),采用免疫组化法检测两组MCM5、Ki-07表达情况[以标记指数(LI)表示],用Spearman等级相关分析法分析两指标间及与肿瘤组临床病理特征的相关性.结果肿瘤组、正常组MCMS的LI分别为12.%±8.49、0,P<0.05; Ki-67的11分别为10.09±7.07、0,P<0.05.MCM5、Ki-67阳性表达与脑胶质瘤恶性程度密切相关;MCM5与Ki-67表达呈正相关,在不同分级肿瘤中MCMS表达均显著高于Ki-67.结论 MCM5、Ki-67高表达在脑胶质瘤发生、发展中起重要作用;MCMS反映肿瘤细胞的增殖状态更为灵敏.%Objective To explore the significance of MCM5 and Ki-67 in the development and progression of glioma.Methods Forty-four resected gliomas specimens ( tumor group) and 6 normal brain tissues ( normal group) were selected,and the expression of MCM5 and Ki-67 were assessed by immunohistochemistry staining [ the results were expressed as labeling index (LI) ]. The correlation between the two parameters and clinicopathological features in tumor group were ahalyzed using spearman rank correlation analysis. Results The LI for MCM5 in tumor group and normal group were 12.96 ±8.49 and 0 respectively (P ＜0.05 ); the LI for Ki-67 in tumor group and normal group was 10.09 ± 7.07 and 0 respectively (P ＜0.05). The positive expression of MCM5 and Ki-67 was closely related to glioma differentiation. MCM5 expression was significantly higher thanKi-67 expression in tumors with different grades, and the two indexes were positively associated with each other. Conclusions The high expression of MCM5 and Ki-67 play an important role in incidence and development of glioma; the MCM5 is more sensitive in reflecting the vegetative state of tumor cell.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2011(051)027【总页数】3页(P10-12)【关键词】脑胶质瘤;微小染色体维持蛋白5;细胞增殖相关核蛋白;免疫组织化学【作者】刘馨莲;李淑蓉;殷舞;孙静【作者单位】成都医学院,成都,610083;成都医学院,成都,610083;广西壮族自治区人民医院;成都医学院,成都,610083【正文语种】中文【中图分类】R739.41细胞增殖调控异常与肿瘤的发生密切相关，DNA复制起始调控在细胞增殖调控中占核心地位。
Ki-67标记指数与神经母细胞瘤预后关系研究进展
的抗体 ， 发现此抗体仅识别处于细胞增殖周期 的细 胞 核抗 原 ， Ｋ －７抗 原 。Ｇ ｒｅ 即 ｉ ６ ｅｄｓ随后 进 行 的研 究 表 明 Ｋ－ ｉ７抗 原 只 存 在 于 增 殖 细 胞 的 Ｇ１ Ｓ Ｇ 、 ６ 、、 ２ Ｍ
地对肿瘤恶性度及预后进行评价。其具体方法 ： 在 标 准光 源光 学 显 微 镜 下 （ ０ ４ ０×） 用 血 液 学 细 胞 计 ， 数器计数 Ｋ－ ｉ ７染 色密集 区的 １０ ６ ００个 肿瘤细胞 中 的阳性细胞数 ， ｊ阳性细胞是指细胞核内出现棕黄
Ｋ ７标 记 指 数 与 神 经母 细胞 瘤 预后 关 系研 究进 展 ｉ ６
葛 莉 祝 秀丹 由于分 离实 体瘤 与 非 肿瘤 组 织 困难 ， 据 准确 性 较 数 差； 嗜银核仁组织区也不能 区分肿瘤组 织与周 围的 活性 细 胞 Ｊ 。相 比之 下 ， ｉ ７依 靠 免 疫 组 化 染 色 Ｋ－ ６ 技术 进 行测 定 ， 操作 简单 ， 疫产 物 清 晰 ， 免 阳性 细 胞
癌 、 腺癌 等 肿 瘤组 织 均 有 较 高 的表 达 率 ； ｉ ７可 乳 Ｋ． ６
和 阴性 细胞 有 明显 的 区分 ， 可 进 行 形 态 学 评 并 价 ＿ ； 且 自 １９ ４而 ９２年 能够 经 受 微 波 预处 理 的 Ｋ－７ ｉ ６ 抗体 （ Ｉ ．） 问世 以后 ， ｉ ７ Ｍ Ｂ１ ｊ ３ Ｋ－ 抗体被 引用于经 ６ 福尔马林浸泡的石蜡包埋切 片的研究 ， 而大大拓 从 宽了其在实体肿瘤研究 中的应用范 围。总之 ， 使用 Ｋ． 抗体标记肿瘤细胞增殖是 目前较 简单也较可 ｉ７ ６
分 数 ，。
２ Ｋ－７标 记 指数 与神 经母 细胞 瘤预后 关 系 的相 关 ｉ ６ 研 究 神经 母 细胞瘤 （ ｅｒｂａｔ ａ Ｎ 是 源 于神 经 ｎｕｏｌｓ ｍ ，Ｂ） ｏ
脑胶质瘤分子标志物IDH1、IDH2、p53基因突变和Ki-67蛋白表达与病理分级临床特征的关系
脑胶质瘤分子标志物IDH1、IDH2、p53基因突变和Ki-67蛋白表达与病理分级临床特征的关系孙怡;李惠;吴颐;李健;申龙树;王耀辉;王剑蓉;章宜芬【摘要】目的通过联合检测脑胶质瘤样本异柠檬酸脱氢酶1、2(IDH1、IDH2)基因突变/p53基因突变以及Ki-67蛋白表达情况,明确不同脑胶质瘤基因型特征,探讨其表达与胶质瘤病理分级和临床特征的相关性,为临床诊断与治疗提供分子病理学依据.方法采用直接测序法检测46例胶质瘤样本IDHl基因第132位密码子、IDH2基因第172位密码子突变及p53基因第5~8外显子突变,免疫组织化学方法检测样本Ki-67蛋白表达,分析分子标志物与样本临床特征和病理分级相关情况.结果共检出32.6%(15/46)的样本发生IDH1基因R132H突变,WHOⅡ~Ⅳ级样本中突变率分别为40.0%、58.3%、17.4%,IDH1基因突变与较低年龄(P=0.028)、肿瘤位置发生于额叶(P=0.002)、WHOⅡ~Ⅲ级组织学分级(P=0.047)、Ki-67蛋白低表达(P=0.034)显著相关;检出4例胶质母细胞瘤样本发生p53基因突变,突变位点位于第7、8外显子,并伴IDH1基因野生型;所有样本Ki-67均有阳性表达,在Ⅱ~Ⅳ级胶质瘤中Ki-67表达呈上升趋势,不同级别胶质瘤间Ki-67阳性表达程度有统计学差异(P<0.01),Ki-67低表达组IDH1突变率高于Ki-67高表达组,IDH1基因突变与Ki-67表达呈负相关.结论不同病理分型胶质瘤的IDH1基因突变比例存在差异,在WHOⅡ~Ⅲ级中最高,IDH1、Ki-67表达水平与胶质瘤分级密切相关,p53基因突变在原发性胶质母细胞瘤中更常见,IDH1、p53、Ki-67联合检测有利于胶质瘤的诊断分级和预后评估,具有一定的临床价值.%Objective To investigate the mutations of IDH1,IDH2,p53 gene,and Ki-67 protein expression in different grade of gliomas and identify the association with its clinical relevance. Methods The mutations of IDH1,IDH2 and p53 gene were detected bydirect DNA sequencing,and protein expression of Ki-67 was analyzed by immunohistochemistry. The correlations between gender,age,tumor site,differentiation degree and pathological type of patients were analyzed. Results R132H mutation of IDH1 gene was detected in 32.6% samples (14/46 cases),of which the proportion of WHO classification grade Ⅱ was 40.0%,and grade Ⅲ was 58.3%. IDH1 mutations were shown correlated with age,pathology level Ⅱ-Ⅲ,and Ki-67 low expression. p53 mutations were detected in 4 glioblastomas,with mutations located at exon 7,8. IDH1 gene mutation was negatively correlated with Ki-67 expression. Conclusions The proportion of IDH1 gene mutation in different pathological types of gliomas is different,which is the highest ingradeⅡ~Ⅲ. It is suggested that the subtypes should be listed independently by routine tests. Mutations in p53 gene are more common in primary glioblastomas and may be associated with adverse outcomes. The combined detection of DH1,p53 and Ki-67 is conducive to the diagnosis and prognosis of glioma.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)009【总页数】5页(P1455-1459)【关键词】胶质瘤;突变;IDH1;IDH2;p53;Ki-67【作者】孙怡;李惠;吴颐;李健;申龙树;王耀辉;王剑蓉;章宜芬【作者单位】南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院神经外科南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院神经外科南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029【正文语种】中文胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，其发病率约占原发性脑肿瘤的40%～50%左右，而且呈逐年上升趋势［1-2］。
Ki-67在不同肿瘤中的表达及意义论文
Ki-67在不同肿瘤中的表达及意义【中图分类号】r739 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）08-0583-01肿瘤的发生、发展与细胞的异常增殖密不可分。
细胞增殖是一个被高度协调机制控制的基本生物过程，人体复杂的调控机制负责胚胎的正常发育、伤害和感染等的调控，一旦调控平衡被打破，就可能产生肿瘤[1]。
1983年gerdes从何杰金瘤细胞系ia28的粗核成分免疫鼠制备名为ki-67的抗体，发现此抗体仅认可处于细胞周期的增殖细胞核抗原，其表达在人增殖细胞的g1、s、g2、m期，但在g0期无此抗原表达，由此命名这种抗原为ki-67抗原。
ki-67抗原基因定位于第l0号染色体上，ki-67蛋白由分子量为358761d 和319508d的两条多肽链组成，并由两个缝接的9768bp和8686bp 的m-rna所编码。
最近的研究证明，ki-67抗原是核基质的一部分，具有非蛋白的特点，它的表达因细胞周期而异。
通过详细的细胞周期分析显示：它从g1后期开始出现，分布于核仁周围，s和g2期逐渐升高，分布于细胞核内，m期达高峰，呈网状结构包绕整个染色体，而不出现在g0期，在有丝分裂中，ki-67出现在所有增殖细胞的染色体，并在后期迅速减少，半衰期不到一个小时，故ki-67的表达与细胞周期严格相关[1]。
这说明ki-67可作为标记细胞的“生长指数”来衡量肿瘤细胞的生长速度，与恶性肿瘤的发展、转移和预后高度相关。
1 肺癌宋作庆[3]采用免疫组化方法(s-abc法和s-p法)检测70例nsclc和20例同期良性病变肺组织中ki-67的表达，ki-67的阳性表达率为85.7％，而正常肺组织中无表达，差异有统计学意义。
说明ki-67的表达与肺癌的发生关系密切，是恶性肿瘤的特征性表现。
国内外多数学者研究发现，腺癌中ki-67的表达低于其他组织类型，可能与腺癌细胞增殖速度较低有关[1]。
李英杰[4]等运用免疫组化方法检测ki-67的表达，发现肺癌分期越晚，ki-67表达越高。
临床常用免疫组化指标
常用免疫组化指标的意义Ki-67为细胞增殖的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA（增殖细胞核抗原）。
多数腺癌表达CEARb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤）基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。
P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高,预后约差。
野生型半衰期很短Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。
E-Ca E钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏,主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究.PS2 （雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。
CK18 低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。
CK19 分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达,而胆管为阳性反应Hep par 肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性.CK20 用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。
鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。
CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性.Villin 绒毛蛋白,正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管)。
Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低.乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。
因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源.其他villin免疫组化染色通常为阴性表达的肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。
mycn与mina调控神经母细胞瘤细胞增殖和成瘤及其相互作用的研究
Dissertation for Master’s Degree of Southwest University Transcriptional factor MYCN sustains cell proliferation and tumorigenicity by MINA inneuroblastomaMajor Cell BiologyField tumor biologySupervisor Prof. Hongjuan CuiCandidate Wen LiuChongqing • ChinaMay, 2017目录目录摘要 (I)Abstract (III)文献综述 (1)1.1 MYC基因概述 (1)1.1.1 MYC基因的发现及功能 (1)1.1.2 MYCN基因概述 (1)1.1.3 MYCN基因在神经母细胞瘤中的功能 (2)1.2 MINA基因概述 (2)1.2.1MINA基因的发现及其结构 (2)1.2.2 MINA与肿瘤的发生发展 (3)第二章引言 (5)2.1 研究背景与目的意义 (5)2.2 主要研究内容 (5)2.3 技术路线 (6)第三章MYCN和MINA在神经母细胞瘤细胞中的含量分析 (7)3.1 材料和试剂仪器 (7)3.1.1 实验材料 (7)3.1.2 实验仪器 (7)3.1.3 实验试剂 (7)3.1.4 溶液配制 (8)3.2 实验方法 (10)3.2.1 临床预后数据分析 (10)3.2.2 细胞培养 (10)3.2.3 总蛋白提取 (12)3.2.4 Western Blot检测目的蛋白 (12)3.3 结果与分析 (13)3.3.1 MYCN和MINA与神经母细胞瘤预后密切相关 (13)3.3.2 MYCN与MINA在神经母细胞瘤细胞系的表达 (15)3.4 讨论与小结 (15)3.4.1讨论 (15)3.4.2 小结 (16)第四章MINA干涉和过表达载体的构建 (17)4.1 材料和试剂仪器 (17)4.1.1 实验材料 (17)4.1.2 实验仪器 (18)4.1.3 实验试剂 (18)4.1.4 溶液配制 (19)4.2 实验方法 (19)4.2.1基因组提取 (19)4.2.2 MINA全长目的片段扩增 (20)4.2.3目的片段回收 (20)4.2.4 干涉载体构建 (20)4.2.5 载体酶切 (21)4.2.6 连接与转化 (21)4.2.7 筛选阳性克隆 (22)4.2.8 慢病毒转染、感染 (22)4.2.9 定量PCR (23)4.3 结果与分析 (25)MINA干涉检测 (25)4.4 讨论与小结 (26)4.4.1 讨论 (26)4.4.2小结 (26)第五章MYCN与MINA对神经母细胞瘤细胞生长、增殖的影响 (27)5.1 材料和试剂仪器 (27)5.1.1 实验材料 (27)5.1.2 实验仪器 (27)5.1.3 实验试剂 (28)5.1.4 溶液配制 (29)5.2 实验方法 (32)5.2.1 细胞培养 (32)5.2.2慢病毒转染、感染 (33)5.2.3 MTT方法测定细胞增殖 (33)5.2.4 BrdU标记荧光染色 (34)5.2.5 软琼脂克隆形成实验 (35)5.3 结果分析与分析 (35)5.3.1 在BE(2)-C细胞中干涉MYCN抑制细胞增殖 (35)5.3.2 在BE(2)-C细胞中干涉MINA抑制细胞增殖 (37)5.3.3 在干涉MYCN的BE(2)-C细胞中过表达MINA促进细胞增殖 (39)5.3.4 在SHEP1中过表达MYCN促进细胞增殖 (41)5.3.5过表达MYCN的SHEP1中干涉MINA抑制细胞生长增殖 (42)5.3.6 MYCN与MINA表达相关 (43)5.4 讨论与小结 (44)第六章MYCN结合在MINA启动子区域 (47)6.1材料和试剂仪器 (47)6.1.1 实验材料 (47)6.1.2 实验仪器 (47)6.1.3 实验试剂 (48)6.1.4 溶液配制 (48)6.2 实验方法 (50)6.2.1 细胞培养 (50)6.2.2慢病毒转染、感染 (51)6.2.3实时荧光定量PCR (51)6.2.4染色质免疫共沉淀（ChIP）检测MYCN和MINA的结合 (54)6.3 结果与分析 (56)6.3.1超声破碎检测 (56)6.3.2 MYCN结合在MINA的启动子上 (56)6.4讨论与小结 (58)第七章全文总结 (59)参考文献 (61)缩略词表 (69)硕士在读期间发表的文章及参研课题情况 (71)致谢 (73)MYCN与MINA调控神经母细胞瘤细胞增殖和成瘤及其相互作用的研究细胞生物学硕士研究生：刘文指导教师：崔红娟教授摘要神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB) 来源于交感神经系统，是一种常见的小儿颅外实体外周神经系统恶性肿瘤，占儿童肿瘤发生率的8%～10%以及儿童癌症死亡的15%。
MYCN与神经母细胞瘤相关性研究进展
MYCN与神经母细胞瘤相关性研究进展临床小儿外科杂志２０１４年８月第１３卷第４期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｅｄｉａｔｒｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，Ａｕｇｕｓｔ２０１４，Ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．４183;３３８183;183;综述183;ＭＹＣＮ与神经母细胞瘤相关性研究进展邢莉莉综述吴晔明审校神经母细胞瘤是起源于神经嵴细胞的恶性肿瘤，发病率居儿童恶性肿瘤第四位，仅次于白血病、脑瘤、淋巴瘤。
ＭＹＣＮ是ＭＹＣ家族成员，参与多种传特性相同的子细胞，使细胞数目增加的过程。
有机体对细胞增殖过程具有非常精确的调节能力，使细胞增殖适应机体的生长发育要求。
而肿瘤本质是生理和病理过程，包括细胞生长和凋亡、新生血管形成和肿瘤浸润与转移等，ＭＹＣＮ在肿瘤的发生发展过程中所起的作用正日益受到重视。
本文对ＭＹＣＮ与神经母细胞瘤的关系作一综述。
一、ＭＹＣＮ基因ＭＹＣＮ基因在正常人体以单倍体状态位于２号染色体短臂远端（２ｐ２３～２４），由被２个内显子分隔开的３个外显子组成。
表达蛋白Ｎｍｙｃ约６２～６４ＫＤａ，位于细胞核，半衰期约３０～５０ｍｉｎ。
ＭＹＣＮ蛋白是螺旋—环—螺旋亮氨酸拉链（ｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘ／ｌｅｕｃｉｎｅＺｉｐｐｅｒ，ＨＬＨ／ＬＺ）结构的蛋白，与ＭＡＸ形成复杂的异二聚体，与ＣＡＣＧＴＧ（Ｅ盒ＭＹＣ位点）序列有高亲和力，而与许多非经典ＤＮＡ序列亲和力很低［１］。
除神经母细胞瘤外，ＭＹＣＮ还过表达于其他胚胎或神经内分泌起源的肿瘤，如视网膜母细胞瘤、Ｗｌｉｍｓ′肿瘤、横纹肌肉瘤、成神经管细胞瘤、胶质母细胞瘤、小细胞肺癌［２－５］。
与ＭＹＣ家族的其他蛋白一样，ＭＹＣＮ也是一种转录因子，可调控多个目的基因的表达，从而调控细胞多种功能，如细胞增殖、细胞生长、蛋白合成、细胞代谢、细胞侵袭转移、凋亡及分化［６］。
约２５％～３０％的神经母细胞瘤患儿ＭＹＣＮ基因有扩增，多系晚期患儿，治疗效果差，预后多不良，多数病例扩增倍数越高，预后越差［７］。
神经母细胞瘤评价标准
神经母细胞瘤评价标准
神经母细胞瘤的评价标准可以从以下几个方面进行综合考量：
1.肿瘤大小：根据肿瘤的直径、体积、生长速度等进行评价，一般来说，肿瘤体积越大，恶性程度越高，预后越差。
2.病理学特征：根据肿瘤的细胞学特征、组织学类型、分化程度等进行评价，分化程度越低，恶性程度越高，预后越差。
3.生物学行为：根据肿瘤的侵袭性、转移性、复发率等进行评价，生物学行为越恶劣，预后越差。
4.患者年龄和性别：一般来说，患者年龄越小，恶性程度越高，预后越差；男性患者较女性患者预后稍差。
5.ALK基因状态：ALK基因阳性患者的预后较阴性患者要差。
神经母细胞瘤是一种高度恶性的肿瘤，多发生于儿童和婴儿，其恶性程度和预后因个体差异而异，因此需要根据患者的具体情况进行综合评价，以制定合适的治疗方案和判断预后情况。
神经母细胞瘤N-myc基因检测
神经母细胞瘤N-myc基因检测、血管形成观察及影响因素的研究Expression of N-myc Gene and Angiogenensis in Neuroblastoma and the Affection Factors博士研究生董岿然导师高解春教授肖现民教授导师小组成员杨毅教授陈莲副教授目录中文摘要---------------------------------------------------------------------1 英文摘要---------------------------------------------------------------------7 前言--------------------------------------------------------------------13第一部分神经母细胞瘤N-myc基因的原位杂交检测与临床意义材料与方法--------------------------------------------------------------------16 结果--------------------------------------------------------------------18 讨论--------------------------------------------------------------------22第二部分神经母细胞瘤血管形成的组织病理观察及VEGF、flt-1 的表达材料与方法--------------------------------------------------------------------24 结果--------------------------------------------------------------------26 讨论--------------------------------------------------------------------32 第三部分神经母细胞瘤血管形成兔角膜模型建立与血管形成抑制实验材料与方法--------------------------------------------------------------------36 结果--------------------------------------------------------------------39 讨论--------------------------------------------------------------------49 结论--------------------------------------------------------------------53 参考文献--------------------------------------------------------------------54 研究生期间完成论文--------------------------------------------------------61 致谢--------------------------------------------------------------------62综述一--------------------------------------------------------------------63 综述二--------------------------------------------------------------------66 附页--------------------------------------------------------------------69神经母细胞瘤N-myc基因检测、血管形成观察及影响因素的研究摘要本文观察在神经母细胞瘤中N-myc基因、肿瘤血管形成的作用，探讨神经母细胞瘤抗血管形成治疗的可行性和可能的机理。
神经母细胞瘤裸鼠原位荷瘤细胞系与转移瘤细胞系生物学异质性分析
神经母细胞瘤裸鼠原位荷瘤细胞系与转移瘤细胞系生物学异质性分析李富江;鹿洪亭;董蒨【摘要】目的利用本实验室建立的神经母细胞瘤体外细胞系,建立神经母细胞瘤荷瘤鼠原位荷瘤与转移瘤模型,并用原位荷瘤及转移瘤分别建立细胞系,比较原位荷瘤及转移瘤的差异,从而验证神经母细胞瘤的肿瘤异质性. 方法利用本实验室建立的神经母细胞瘤细胞系,制备单细胞悬液,通过Typlan细胞计数法,调整细胞浓度为1～9 × 107/mL.接种于裸鼠皮下,建立荷瘤鼠原位荷瘤与转移癯模型,并用原位荷瘤及转移瘤分别建立细胞系,通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,比较两种细胞系的差异.结果在原位荷瘤及转移瘤细胞株中,转移瘤细胞株在增殖能力、克隆形成能力及肿瘤细胞成瘤能力方面均明显高于原位荷瘤细胞株. 结论裸鼠原位荷瘤及转移瘤两株细胞具有明显差异,证明神经母细胞瘤肿瘤具有异质性,这种异质性可能是神经母细胞瘤转移的重要原因.【期刊名称】《临床小儿外科杂志》【年(卷),期】2015(014)006【总页数】5页(P496-500)【关键词】神经母细胞瘤;生物学;小鼠;动物实验【作者】李富江;鹿洪亭;董蒨【作者单位】青岛大学附属医院小儿外科,山东省青岛市,266003;青岛大学附属医院小儿外科,山东省青岛市,266003;青岛大学附属医院小儿外科,山东省青岛市,266003【正文语种】中文侵袭和转移是恶性肿瘤最重要的特征之一，它是一个多阶段复杂的过程，受许多特殊基因的调控，它们或被激活，或被抑制，相互协同或拮抗，最终影响肿瘤细胞的生物学特性。
已有许多文献报道同一肿瘤组织中不同肿瘤细胞的侵袭性、转移能力有差别，即肿瘤细胞存在异质性。
肿瘤细胞的异质性是恶性肿瘤的重要特征之一。
研究肿瘤细胞异质性及其所导致的肿瘤细胞生物学行为的改变，对了解肿瘤细胞的生物学特性及其和转移之间的关系有重要意义。
本研究建立神经母细胞瘤荷瘤鼠原位荷瘤与转移瘤模型，并用原位荷瘤及转移瘤分别建立细胞系，发现两株细胞系存在异质性，运用细胞生物学的手段，检测两种细胞株的体外增殖能力、细胞周期、克隆形成能力及肿瘤细胞成瘤能力的差异，并对其异质性在分子基础上进行初步探讨。
不同起源神经母细胞瘤N-myc基因扩增情况研究
不同起源神经母细胞瘤N-myc基因扩增情况研究
徐涛;石军;牛玉林
【期刊名称】《广州医药》
【年(卷),期】2015(046)003
【摘要】目的了解不同类型神经母细胞瘤的生物学特性.方法在本研究中,对新诊断神经母细胞瘤患者的生物学特点(N-myc基因扩增)与临床特点进行了比较.结果共49例神经母细胞瘤,起源于腹膜后35例,其他14例.两个组呈现出不同的N-myc基因扩增情况(P＜0.05).结论不同临床类型的神经母细胞瘤存在有不同的生物学特性发布情况.
【总页数】3页(P16-18)
【作者】徐涛;石军;牛玉林
【作者单位】广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科广州510180;广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科广州510180;广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科广州510180
【正文语种】中文
【相关文献】
1.神经母细胞瘤N-myc与Mdm2-p53通路的研究进展 [J], 辛琪;郝良纯
2.神经母细胞瘤中N-myc的作用机制研究进展 [J], 赖祥萍;赖天霞;廖伟
3.荧光原位杂交与免疫组化检测结直肠癌组织HER-2基因扩增或蛋白表达情况的研究 [J], 王玉环;孙振柱;张恒明;孔艳青
4.猪繁殖与呼吸综合征病毒不同基因扩增效果的比较研究 [J], 史开志;汪德生;王开
功;周碧君;李永明;文明
5.不同MYCN基因扩增状态腹部神经母细胞瘤CT表现 [J], 王浩入;陈欣;何玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
差示PCR等方法诊断神经母细胞瘤的N—myc扩增
差示PCR等方法诊断神经母细胞瘤的N—myc扩增
杨朝晖
【期刊名称】《国外医学：儿科学分册》
【年(卷),期】1995(022)003
【摘要】最近对神经母细胞瘤的Ｎ－ｍｙｃ癌基因扩增研究较深入。
Ｎｍｙｃ扩增对ＮＢ的发生、预后有着很重要作用。
常规使用的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂文分析法较为复杂，随着分析生物学的发展，差示聚合酶链反应成为分析基因扩增的手段之一。
【总页数】5页(P136-140)
【作者】杨朝晖
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R730.269
【相关文献】
1.引物差示PCR法快速检测乙型肝炎病毒前C区点突变 [J], 罗湘蓉;付烈振;杨华芬;王蓓
2.应用PCR检测HL—60细胞诱导分化前后c—myc癌基因的扩增 [J], 张婕;王芸庆
3.不同起源神经母细胞瘤N-myc基因扩增情况研究 [J], 徐涛;石军;牛玉林
4.差异竞争性PCR定量扩增胃癌及转移灶癌基因HER2和C-myc [J], 时军;杨书文;陈道达;熊叔陶;崔建涛;吕有勇
5.三、用差示聚合酶链式反应检测骨髓转移的神经母细胞瘤N-myc扩增 [J], 张锦华;杨朝晖;张学
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伴MYCN扩增的婴儿神经母细胞瘤临床特征及预后分析
伴MYCN扩增的婴儿神经母细胞瘤临床特征及预后分析贺思豆;张诗晗;岳志霞;黄程;王希思;苏雁;王焕民;马晓莉【期刊名称】《中国小儿血液与肿瘤杂志》【年(卷),期】2022(27)5【摘要】目的总结伴MYCN扩增的婴儿神经母细胞瘤(NB)临床特征及预后分析。
方法回顾性分析2010年1月1日—2021年12月31日在我院诊断并规律治疗的年龄≤12个月,同时伴有MYCN扩增的13例婴儿NB的临床资料,总结临床特征及评估预后,并以13例MYCN无扩增的婴儿NB做对照,随访截止2022年4月30日。
结果(1)MYCN基因扩增的婴儿NB占同期本单位收治婴儿NB总数的5.5%(13/235),中位诊断年龄9(4~12)个月,中位随访时间28个月(13天~130个月)。
(2)13例MYCN基因扩增的婴儿NB均为高危,IV期11例,III期1例;12例肿瘤原发部位为腹膜后/肾上腺,1例为纵膈;12例发生肿瘤转移,其中10例远处骨转移、9例骨髓转移、7例肝脏转移;11例接受手术治疗,其中3例化疗前行手术治疗,8例化疗后行手术治疗,2例仅化疗,平均化疗9.6个疗程;6例放疗,中位放疗剂量为20.1Gy;3例行自体造血干细胞移植治疗;11例手术治疗患儿中,6例瘤灶完整切除,4例部分切除,1例不详;5例无事件生存,8例事件发生的中位时间为17(0.2~88)个月,6例出现肿瘤复发或进展,其中5例化疗结束后复发,复发中位时间5(2~58)个月,1例在化疗中疾病进展,13例中7例死亡。
(3)单因素分析显示LDH、NSE水平显著增高的MYCN扩增NB婴儿预后不良(P<0.05);MYCN扩增组与MYCN无扩增组的预计5年无事件生存率(EFS)分别为21%和100%,具有显著性差异(P=0.0004),预计5年总生存率(OS)分别为33%和100%,具有显著差异(P=0.002);MYCN扩增组发生骨转移、骨髓转移、肝转移及LDH≥1500的比例显著较高(P<0.05)。
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N-Myc扩增与Ki-67 LI
N-Myc 扩增与Ki-67 LI和NB的临床病理因 素间分别有何关系？ N-Myc 扩增与Ki-67 LI 间有何关系？
研究对象
2008.9至2009.3 30例石蜡包埋组织标本 神经母细胞瘤（NB） 节细胞性神经母细胞瘤(GNB)
研究对象
性别：男：19例，女：11例； 年龄：2月～9岁6月
3、4期
17.65%（3/17）
病理诊断: NB 均为男性，就诊时年龄均＞18个月 3例为进展期，2例为早期分化差型
1 FISH检测N-Myc拷贝数的结果
表1.5例扩增病例的临床资料
2 N-Myc拷贝数水平与临床病理因素的关系
表2.
病例数
Pa ：N-Myc扩增组和N-Myc无异常组之间的P值 ; Pb : N-Myc获得组和N-Myc无异常组之间的P值 ; Pc : N-Myc增多组（获得组+扩增组）与无异常组之间的P值。
3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系
表3. Ki-67 标记指数与肿瘤组织学类型之间的关系
P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于NB组的平均秩次是 18.13大于GNB组的平均秩次6.86，故NB组的Ki-67 LI明显大于GNB组。
3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系
＜18个月 13例， ≥18个月 17例 原发部位：肾上腺 23例，
非肾上腺 7例
研究对象
病理分型： NB： 分化型 8例，分化差型 7例，
未分化型 1例，不明确型 7例 . GNB: 7例 临床参照INSS系统分期： 1期 5例， 2期 4例， 3期 6例， 4期 11例， 4S期 4例
研究内容
2 N-Myc拷贝数水平与NB临床病理因素的关系
2.1 N-Myc扩增水平在另外6组（包括患者性别、年 龄、肿瘤原发部位、是否接受化疗以及血清 NSE、24小时尿VMA水平）中的差异均无统计 学意义（P＞0.05）。
附图
N-Myc无异常，40×100 绿色信号代表N-Myc基因
N-Myc扩增 40x100 绿色信号代表N-Myc基因
结论
1 N-Myc基因拷贝数增多在NB中较GNB中多见，在进展
期（3、4期）NB中较早期（1、2、4S期）NB中多见。
2
Ki-67 LI在NB中明显高于GNB，在NB分化差型中的表 达明显高于分化型；化疗影响Ki-67的表达。
3 Ki-67 LI在N-Myc基因扩增组明显高于非扩增组。
N-Myc基因拷贝数水平与Ki-67 LI两者结合
≥30%
(++)
统计学分析
SPSS 11.5软件 确切概率法。 秩和检验(Mann-Whitney U test，
Kruskal–Wallis test)。 P＜0.05认为有统计学意义。
1 FISH检测N-Myc拷贝数的结果
1.1 5例出现扩增（拷贝数≥10个），扩增率为16.67%
扩增率
1、2、4S期 15.38%（2/13） P＞0.05
Ki-67 LI （+） 10x10
Ki-67 LI （++） 10x10
Ki-67 LI >50% 10x10
4 MYCN扩增水平与Ki-67 LI 之间的关系
总之，N-Myc扩增与Ki-67 LI在NB分期、分 型中的意义并不是完全一致的。
N-Myc扩增率仅为20-25%，而 Ki-67 LI 容易 受化疗的影响，因此，两者结合分析肿瘤的侵袭 行为和恶性程度会更加合理。
实验方法
N-Myc基因的检测：FISH
探针：位点特异性 N-myc/CEP2双色探针
N-Myc基因 获得：拷贝数4～9个； 扩增：拷贝数≥10个。
实验方法
Ki-67 LI: 免疫组化二步法
抗体:鼠抗人Ki-67抗原免疫组化单克隆抗体
阳性细胞是指细胞核内出现棕黄色颗粒
<10%
（－）
10%～30% ( + )
表4. Ki-67 LI与NB病理类型之间的关系
P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于未分化+分化差型组的平均秩次是 5.88，大于组分化型组的平均秩次11.13，故Ki-67在未分化型和分化差型中的表达明 显高于分化型
3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系
表5. Ki-67 LI与化疗的关系
P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于化疗组的平均秩次是8.93，小于未化 疗组的平均秩次16，故化疗组Ki-67表达低于未接受化疗组。
3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系
Ki-67 LI 在年龄、性别、肿瘤的分期各组中的 差异无统计学意义
附图
Ki-67 （－） 4x10
神经母细胞瘤(NB)
儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤 具有自然消退和快速进展两种截然不 同的生物学特点
N-Myc基因
N-Myc基因扩增主要发生于进展期NB 中，与肿瘤的侵袭行为和不良预后密 切相关 为NB危险度的评估、治疗方案的选择、 预后的判断提供分子学依据
Ki-67抗原
是一种具有代表性的细胞增殖标记， Ki-67 LI定量地反映肿瘤的增殖情况。 Ki-67标记指数( Labeling Index, LI)： 指肿瘤细胞中Ki-67阳性细胞所占的百分比。
4
分析、评估NB的侵袭行为和恶性度更加作为NB的常 规检查。
感谢聆听 敬请指导