向培养基中接种土壤溶液的方法

向培养基中接种土壤溶液的方法
方法:常用的接种方法有斜面接种、平板接种、液体接种、试管深层固体培养基穿刺接种。

接种工具:常用的有接种针、接种环、接种钩、接种环、接种铲或锄头、涂玻璃棒等。

实验原理
土壤是微生物生命的大本营。

为了获得微生物的纯培养物，通常需要根据其对营养、pH、氧气和其他条件的不同要求，为其提供合适的培养条件，或者添加一些抑制剂以消除其他不需要的微生物，然后通过各种方法分离和纯化微生物，直到获得纯菌株。

仪器设备
样品：新鲜土壤。

其他:无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻璃棒、电子秤、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。

试剂：1万U/mL链霉素液、10％苯酚
培养基:灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1号培养基、马铃薯蔗糖培养基。

无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。

实验步骤
（一）实验程序1
制备土壤稀释液：
1、称取土壤5g，放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡
10min，即为稀释10－1的土壤悬液。

2、另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10－2、10－
3、10－
4、10－
5、10－6。

取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。

同法依次连续稀释至10－4、10－5 、10－6土壤稀释液。

吸取稀释液
取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、10－5、 10－6土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。

涂板
稀释液充分混合，用玻璃抹刀铺在培养机上，然后倒置在恒温箱中培养。

计算出每克土壤中细菌的数量。

即某个培养皿中真菌的菌落数乘以培养皿接种液的稀释倍数。

挑取单个菌落，进行划线分离。

（二）实验程序2
制平板
吸取稀释液
取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、10－5 、 10－6土壤稀释液0.1mL，加在空培养皿中。

混菌
轻轻水平旋转培养皿，使菌液和培养基充分混合铺开，放在平板上，凝固，然后倒置在恒温培养箱中培养。

计算每克土壤中放线菌的数量。

挑取单个菌落，进行划线分离。

（三）实验程序3
制成平板。

凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－1）在平板上划线。

1、连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。

完毕后，倒置于28～300C温室培养。

2、分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。

划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。

挑一个单菌落，接种在斜面培养基上。

如果不纯，就移植提纯，最后得到纯培养。