孔石莼在干出胁迫下上调表达基因消减cDNA文库的构建及分析
叶面喷施丹参碳点缓解甘薯低磷胁迫的转录组与代谢组学分析
作物学报ACTA AGRONOMICA SINICA 2024, 50(2): 383-393 / ISSN 0496-3490; CN 11-1809/S; CODEN TSHPA9E-mail:***************DOI: 10.3724/SP.J.1006.2024.34063叶面喷施丹参碳点缓解甘薯低磷胁迫的转录组与代谢组学分析朱晓亚张强强赵鹏刘明王静靳容于永超唐忠厚*江苏徐淮地区徐州农业科学研究所 / 中国徐州国家土壤质量观测试验站, 江苏徐州 221131摘要: 为探究叶面喷施碳点(CDs)对低磷胁迫下甘薯幼苗生长发育的影响, 发掘CDs调控甘薯根系响应低磷胁迫的关键基因, 解析根系代谢产物与关键基因的协同变化, 探讨CDs缓解甘薯低磷胁迫的机制, 本研究以商薯19和徐薯32为研究对象, 设置低磷水平下(0.01 mmol L–1 KH2PO4)叶面喷施超纯水(CK1)、喷施丹参碳点(CDs)和正常磷水平下(1 mmol L–1 KH2PO4)喷施超纯水(CK2) 3个处理, 对不同处理甘薯根系进行转录组和代谢组学分析, 同时考查不同处理中甘薯叶、茎和根系生物量和磷含量的变化。
结果表明, 叶面喷施丹参CDs显著增加了低磷胁迫下甘薯幼苗叶、茎和根系的生物量, 提高了根系磷含量, 增强了甘薯幼苗的耐低磷性。
转录组分析结果显示, 磷酸盐吸收和转运基因(PHO1、PHT1-4)、根系构型调控基因(ZAT6、ZFP5、PLT5)和肌醇磷酸盐生物合成基因(VIP2)在缓解甘薯低磷胁迫中发挥着关键作用。
代谢组分析结果显示, CDs处理较CK1处理甘薯根系磷酸肌醇的表达量均显著降低。
这表明, 低磷胁迫下, 叶面喷施CDs通过诱导甘薯根系高亲和磷吸收转运系统、优化根系构型等以提高甘薯对磷素的吸收能力,同时通过调整植株体内的磷代谢过程来维持磷稳态。
但CDs介导下不同甘薯品种的低磷胁迫反应也存在差异。
海洋渔业2011年第33卷总目次
平， １ ：０ 等（ ） ２
养殖水温和酶反应温度对幼鱼酶活性 的影响
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …
区又君 ，罗 奇 ，李加 儿 ， （ ） ２ 等 １ ：８ 平 ， （ ） ３ 等 １ ：３
中华鲟 神经 内分 泌多肽 ７ ２基 因克 隆及组织特异性表达 …… …… …… …… ……… 刘 婷 ， Ｂ 章龙珍 ， 张
涛， ２ ：２ 等（ ） １ １
东黄海沙海 蜇与 口冠水母 分类关 系的辨 析 一 于核糖体 １ ｒ Ｎ 基 ８ＳＤ Ａ基 因序列 … … 刘 敏 ， 马凌波 ， 凌建忠， ２ ：３ 等（ ） １ １
４６ ７
海
Байду номын сангаас
洋
渔
业
２ １ 年 ０ １
海 洋 渔 业
２１ ０ １年第 ３ ３卷 总 目次
研 究 论 文
凡纳滨对虾引进群体和 ２个 养殖群体 遗传 变异的微 卫星分析 ………… …… …… … 马春艳 ， 马洪雨 ，马凌 波， １ ： 等（ ） １
条石鲷养殖群体线粒体控制区序列遗传变异分析 …………………………………… 孙
鹏， 李
杰 ，尹
飞， １ ： 等（ ） ９
转红色荧光蛋 白基 因唐鱼与非转基 因唐鱼肌 肉营养成分的分析和 比较 ………………………… 樊佳佳 ， 白俊 杰（ ） ｌ １ ：５
西伯利亚鲟 消化道形态学 和组织学 的初步研究 ……………………………………… 陈宁宁 ， 章龙珍 ，庄
卯形鲳 消化酶 活性 的研究 Ⅳ
…………………………………………………… …… ……… 沈长春 （ ）２ ８ ３ ：５
胁迫相关蛋白激酶基因OsSAPK2调控水稻抗白叶枯病反应
作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2015, 41(8): 1191 1200/ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9E-mail: xbzw@本研究由国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2014AA10A603), 比尔盖茨基金(OPP51587)和中国农业科学院科技创新工程资助。
*通讯作者(Corresponding authors): 石英尧, E-mail: shiyy123@, Tel: 0551-********; 周永力, E-mail: zhouylcaas@第一作者联系方式: E-mail: hudandan_ahau@, Tel: 185********Received(收稿日期): 2015-01-08; Accepted(接受日期): 2015-05-04; Published online(网络出版日期): 2015-06-03. URL: /kcms/detail/11.1809.S.20150603.0901.012.htmlDOI: 10.3724/SP.J.1006.2015.01191胁迫相关蛋白激酶基因OsSAPK2调控水稻抗白叶枯病反应胡丹丹1,2 张 帆2 黄立钰2 卓大龙1,2 张 帆2 周永力2,* 石英尧1,* 黎志康21安徽农业大学农学院, 安徽合肥 230036; 2中国农业科学院作物科学研究所, 北京 100081摘 要: 水稻蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK2, 又称胁迫相关蛋白激酶(stress-activated protein kinase genes in rice, OsSAPKs), 在调控水稻非生物胁迫信号传导中起着重要作用。
本研究对OsSAPK2的结构及其在水稻抗白叶枯病反应中的功能进行了初步研究。
结果表明OsSAPK2被定位于细胞核和细胞质内, 与OsSAPK1、OsSAPK3同属于Kulik’s II 组。
大型海藻孔石莼化学组分和生物活性研究新进展
2007年海洋湖沼通报Transactions of Oceanology and Limnology№3文章编号:100326482(2007)0320155205大型海藻孔石莼化学组分和生物活性研究新进展3康凯1,王长云1,王斌贵2,李国强1(1.海洋药物教育部重点实验室;中国海洋大学海洋药物研究所,青岛266003;2.中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室,青岛266071)摘要:孔石莼是一种大型绿藻,在食品、药物等领域具有广泛应用。
本文综述了近5年来孔石莼化学组分及其生物活性研究进展,并展望了其应用前景。
关键词:孔石莼;化学组分;生物活性;研究进展中图分类号:R282.77 文献标识码:A目前,人们对海藻的利用多集中在褐藻和红藻,对绿藻的利用还相当有限,其药用等价值尚未得到充分开发。
孔石莼(Ul v a pert usa Kjellm)属于绿藻门石莼属,俗称海菠菜、海白菜等,广泛分布于西太平洋沿海,是我国野生经济藻类中资源极为丰富的一种,在黄渤海产量最大[1]。
自古以来孔石莼在食用和药用方面就有广泛的应用。
《中华本草》记载孔石莼“主风秘不通,五嗝气,并小便不利,脐下结气”;“软坚散结,清热祛痰,利水解毒。
用于喉炎,颈淋巴结肿,水肿,疮疖及瘿瘤等。
”近年,对孔石莼的药用及其它生物活性研究取得了新的进展,本文对此进行了综述,并展望了其应用前景。
1 化学组分研究1.1蛋白质和氨基酸组成孔石莼的蛋白质含量较高,一般在17%～26%之间,因地域、季节变化略有差异[2]。
孔石莼蛋白质组成中,氨基酸含量丰富。
陶平等[3](2001年)采集大连海域海藻,样品经盐酸水解后用氨基酸自动分析仪进行测定。
结果表明,孔石莼含有8种人类必需氨基酸,并以天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)及精氨酸(Arg)的含量居多,其中多种氨基酸含量高于红藻和褐藻。
大型海藻孔石莼对海水中不同形态氮盐和磷酸盐的吸收研究
大型海藻孔石莼对海水中不同形态氮盐和磷酸盐的吸收研究作者：吕冬伟刘欢田鹏华徐榕雪来源：《山东农业科学》2019年第03期摘要：将定量孔石莼藻体添加到模拟养殖废水中，研究孔石莼在不同营养盐浓度梯度下，对水体中氮、磷营养盐的吸收情况。
结果表明，孔石莼对浓度越高的氮磷营养盐吸收率越快，但去除率越低;对铵态氮和磷酸盐的吸收效果明显，对硝态氮有所吸收，而对亚硝态氮的吸收不明显;对铵态氮吸收曲线分3个阶段分析后发现，其第一阶段符合一级动力学方程，第二阶段的吸收符合线性方程。
这说明孔石莼在不同浓度营养盐养殖废水中均具有很好的水体净化作用，对防治水体富营养化有较好的应用前景。
关键词：孔石莼;养殖废水;铵态氮;硝态氮;亚硝态氮;磷酸盐;氮磷吸收比值Study on Absorption of Different Forms of Nitrogen andPhosphate by Macroalgae Ulva pertusa in SeawaterLu Dongwei， Liu Huan， Tian Penghua， Xu RongxueAbstract The nitrogen and phosphate absorption of Ulva pertusa cultivated in the simulated piscatorialwastewater with different nutrient concentrations were studied in this paper. The experiment results showed thatthe higher the nitrogen and phosphate concentrations were ， the higher the uptake rates and the lower removalrates of Ulva pertu.sa were. The absorption effect of ammonia nitrogen and phosphate were obvious， and part ofnitrates nitrogen was absorbed， but the absorption of nitrite was not obvious. After dividing the ammonia nitro-gen absorption curve into three stages， it was found that the first stage curve accords with the first - order ki-netic equation and the second stage curve yielded a linear equation. The results showed that Ulva pertusa hadbetter effect on water purification， and showed better application prospect in preventing the eutrophication ofwater bodies.KeywordsUlva pertusa; Piscatorial wastewater; Ammonia nitrogen; Nitrate nitrogen; Nitritenitrogen;Phosphate; N/P absorption ratio孔石莼（Ulva pertusa）屬于绿藻门石莼属，广泛分布于西太平洋沿海，藻体鲜艳，味道鲜美，富含多种营养物质，并且生长快、质地薄可食用，还具有生物学和药用价值。
孔石莼脂溶性化学成分的分析
M arine S ciences/V ol.24,N o.5/20003孔石莼脂溶性化学成分的分析STU DIES O N THE L IPID COMPOSITIO N OF Ulva p ertusa吴志军熊慧萍李智恩徐祖洪(中国科学院海洋研究所青岛266071)关键词G C 2MS ,孔石莼,脂肪酸孔石莼(Ulva p ertusa K j ellm )是一种广泛分布于我国黄海、渤海的野生绿藻,其资源极为丰富。
据《中国海洋药物辞典》记载,其具软坚散结、利水消肿、降压之功效。
在我国民间用于治疗甲状腺肿大、水肿、高血压等症。
在我国沿海地区,除了传统上的少量食用和民间药用外,仅有一些作为饲料和肥料。
关于孔石莼化学成分的研究,已有不少文献报道[1,2]。
为了进一步开发利用我国丰富的绿藻资源,作者对青岛产的孔石莼的化学成分和生物活性进行了较深入系统的研究,现报道G C 2MS 2DS 测定其脂溶性化学成分的结果。
1材料与方法1.1样品的采集及提取孔石莼于1999年3月采自青岛太平角,自来水清洗,除去泥砂和其他杂草;样品自然阴干,塑料袋封口室温下保存。
取孔石莼60g ,粉碎,用氯仿2甲醇(1∶1)加热回流抽提3次(每次200m l ),在60℃温度下减压旋转回收有机溶剂,得黑色油状物2g ,得率为3.33%。
所得样品用硫酸二甲酯进行甲基化处理。
1.2仪器及分析条件所用仪器为F inni g an 4510G C/MS 联用仪。
气相色谱条件:色谱柱为AC 25石英毛细管柱,柱长30m ,柱内径为0.25mm 。
载气为高纯氦气。
分流压30∶1,柱前压力为14Pa 气化室温度为250℃,柱温150～240℃,以3℃/m in 的速度程序升温。
质谱条件:质谱电离方式为EI ,电离电压为70eV ,发射电流0.25m A ,倍增器电压1300V ,离子源温度为220℃,扫描周期为1s 。
数据处理及质谱检索:甲基化样品经气相色谱质谱分析,所得各组分峰的质谱数据运用计算机谱库自动进行检索,并参照标准图谱进行核对,最后对色谱峰用面积归一化法进行计算,得出各组分的百分含收稿日期:2000201217;修回日期:2000203201EXPRESS Letters快报上都在台湾海峡等深线50～80m 海区。
影响辐射小鼠肝脏SOD及MDA活性的孔石莼多糖研究
影响辐射小鼠肝脏SOD及MDA活性的孔石莼多糖研究张宸阁;高雯欣;卢卫红【摘要】目的:了解不同相对分子量段孔石莼多糖对因辐射导致小鼠肝脏SOD及MDA活性含量改变的影响.方法:将通过膜分离纯化得到的三种不同相对分子量段的孔石莼多糖(≥100ku、30 ～ 100ku及≤30ku)分别给相应设置的三个实验组小鼠进行灌服,另设辐照对照组和空白对照组；辐照后制备各组动物的肝脏组织匀浆,对其SOD和MDA活性进行测定,并对其结果进行比较.结果:孔石莼多糖对辐射降低SOD活性及提高MDA活性均有一定的抑制作用,其中30 ～100ku和≤30ku 两种相对分子量的孔石莼多糖的抑制作用最为显著,具有显著性差异(P＜0.01).结论:相对分子量低的孔石莼多糖对辐射引起小鼠肝脏组织氧化损伤具有一定的抑制作用,由此推断相对较低的分子量段孔石莼多糖具有一定的抗辐射抗氧化作用.%Objective: To explore the role of the different molecular weight polysaccharide from Ulva pertusa and polysaceharide - iron complex on antagonizing the radiation - induced micronuclei formation of mice bone marrow cells. Methods:Three different molecular wei ght polysaccharides( ≧ 100kDa,30 ~ lOOkDa and ≤ 30kDa)from Ulva pertusa who was isolated by membrane injected mice by gastric perfusion. A positive and a negative groups were set as contrast groups. Preparation the slurry of liver organs after irradiation, the activity of SOD and MDA of the slurry were determined and compared. Results: The polysaccharide of Ulva pertusa could significantly decrease the SOD' activity and increase the MDA' activity after radiation. Furthermore, the polysaccharide form Ulva pertusa with relative molecular weight of 30 ~ 100ku and ≤ 30ku have significantlyinhibiting effects on the activity of SOD and MDA(P <0. 01). Conclusion: It is suggested that the polysaccharide form Ulva pertusa with low relative molecular weight have significantly inhibiting effects on the liver organs oxi-dative damage of mice after radiation, and the polysaccharide form Ulva pertusa with low relative molecular weight have some functions of resisting radiation and antioxidation.【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2012(029)001【总页数】4页(P111-114)【关键词】孔石莼;多糖;多糖铁;辐射;SOD;MDA【作者】张宸阁;高雯欣;卢卫红【作者单位】哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨150090;黑龙江省质量监督检测研究院,黑龙江哈尔滨150010;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨150090【正文语种】中文【中图分类】R285.5孔石莼(Ulva pertusa Kjellm)是一种石莼科石莼属的大型绿藻，俗称为海白菜、海菠菜、猪母菜、海葛茵等。
过表达及敲除细胞系建立及所需材料详细
293T
NC shRNA1 2
3
4
5
X actin
72kd
293T
-
+
Flag-X
Flag-X actin
Step3: stable transfection and verification: 6-10days
1.利用浓度梯度法寻找最适筛选浓度：将待筛选细胞按照60%-80%左右融合度 种于六孔板中，设置筛选药物如下浓度：0，0.25, 0.5, 0.75, 1, 2µg/ml，加入 已贴壁细胞中，每24小时观察细胞活率，3-5天内细胞全部死亡的最低浓度为最 适浓度。 2.包装病毒步骤： （1）第一天种293T于六孔板中，每孔约60%-80%融合度； （2）利用gag-pol、vsv-g包装质粒，用Xtreme-gene9转入细胞中，37度细 胞培养箱培育，24小时后换液，48小时收病毒上清； （3）收病毒前一天种待感染细胞于六孔板中，每孔60%-80%融合度； （4）用0.45µm的滤头过滤病毒上清后，将病毒上清加入待感染细胞中，加入 polybrene使其终浓度为8µg/ml，1500g，22-27度，90min离心； （5）离心后加入2.5ml培液稀释polybrene，放入37度培养箱培养； （6）48小时后，加入最适浓度抗生素药筛5-7天，同时设置对照组参考。
2 ×SDS（甘油，DTT，Tris 6.8，SDS配置）；Bradford（康为）；溴酚蓝（ameresico）；电 泳液（甘氨酸、SDS、Tris配置10 × ，使用时稀释成1 × ）；转膜液（甘氨酸、Tris配置10 × ， 使用时稀释成1 × 并加入甲醇） marker（thermo）；antibody（abcam、CST、MBL、 Sigma）；SDS（sigma）PAGE、Tris6.8、8.8（生工）；APS、TEMED（ameresico）；0.22 及0.45µmPVDF膜（minipore）
孔石莼多糖对糖尿病小鼠抗氧化能力的影响
孔石莼多糖对糖尿病小鼠抗氧化能力的影响林龙;叶继丹;高洁【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2013(032)003【摘要】目的:研究孔石莼多糖抗氧化活性.方法:采用传统的水提醇沉法提取孔石莼多糖,以四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠为模型,分为孔石莼多糖低、高剂量组、阳性对照组、模型组及正常组.分别以不同剂量孔石莼多糖(250mg/kg、1000rng/kg)、二甲双胍(1000mg/kg)和蒸馏水灌胃,28d后测定小鼠肝脏和肾脏组织中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量.结果:高剂量孔石莼多糖能显著提高糖尿病小鼠肝脏和肾脏组织中SOD、GSH-Px和CAT的活性,降低MDA含量.结论:孔石莼多糖具有显著的抗氧化作用.【总页数】3页(P91-93)【作者】林龙;叶继丹;高洁【作者单位】集美大学水产学院,厦门市饲料检测与安全评价重点实验室,福建厦门361021;集美大学水产学院,厦门市饲料检测与安全评价重点实验室,福建厦门361021;集美大学水产学院,厦门市饲料检测与安全评价重点实验室,福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】R587.1【相关文献】1.山药多糖对I型糖尿病小鼠血糖和抗氧化能力的影响 [J], 邢文会;侯金丽;韩鸿鹏;吴崇珍;张丽琴2.茯苓多糖对2型糖尿病小鼠肾组织抗氧化能力及Bax、Bcl-2蛋白表达影响 [J], 黄聪亮;郑佳俐;李凤林;宫敬利3.番石榴多糖对糖尿病小鼠的血糖及抗氧化能力的影响 [J], 吴建中;欧仕益;陈静;郭开平;欧亦群4.泰山四叶参多糖对糖尿病小鼠血糖和抗氧化能力的影响 [J], 薛子成;王德才;李聚仓5.孔石莼多糖锌对Ⅰ型糖尿病小鼠糖脂代谢及体内抗氧化的干预作用 [J], 汤陈鹏;吕峰;刘伊娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
响应面优化孔石莼多糖提取工艺及其饮料的制备
主要从事海洋资源开发与功能性食品研究。
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第2期
1
1.1
1.2
45
丛懿洁：
响应面优化孔石莼多糖提取工艺及其饮料的制备
萄糖 溶 液 ，质 量 浓 度 为 100 mg/L。 分 别 吸 取 0.1、
材料与方法
0.2、0.3、0.4、0.5 mL 葡萄糖标准溶液，加水补足至
1.0 mL，加 0.5 mL 苯酚、2.5 mL 浓硫酸，反应 10 min
原料
孔石莼，
2021 年 10 月采自威海海边。
后在 490 nm 下测定吸光度。以横坐标为葡萄糖质
化学试剂
φ（乙醇）=95%，淄博鑫荣化工科技有限公司；
苯
酚，南京宁康化工有限公司；浓硫酸，杭州傲鹰化工
有限公司；纤维素酶（1.8×10 IU/g），日本天野酶制
果，选取以孔石莼多糖提取液、柠檬酸、白砂糖的
取一定量的孔石莼粉末（60 目筛），加入适量蒸
添加量为自变量，饮料的感官评分为因变量，设计
率、超声温度下提取一定时间。随后进行沸水水浴
3）产品感官评价。选择 20 名熟悉产品指标的
馏水和纤维素酶，调节酶的最适 pH，在一定超声功
3
L（3
）的正交试验确定饮料产品的最佳配方。
时，观测料液比对多糖提取率的影响（图 2）。结果
表明，在一定范围内，随料液比逐渐增加，孔石莼多
妹等[22]采用超声辅助酶法提取福建沿海地区的石莼
中的功能性寡糖，研究纤维素酶使用量对寡糖提取
率的影响，
发现随着纤维素酶使用量的增加，
提取率
先提高后呈平稳状态，
裂片石莼水提物清除ABTS和DPPH自由基的光谱学研究_钟钰
裂⽚⽯莼⽔提物清除ABTS和DPPH⾃由基的光谱学研究_钟钰第32卷第4期⽣态科学 32(4): 447-452 2013年7⽉Ecological Science July. 2013 钟钰，陈填烽，郑⽂杰, 杨宇峰. 裂⽚⽯莼⽔提物清除ABTS和DPPH⾃由基的光谱学研究[J]. ⽣态科学, 2013, 32(4): 447-452. ZHONG Yu, CHEN Tian-feng, ZHENG Wen-jie, YANG Yu-feng. Spectrometric investigation of DPPH and ABTS free radical-scavenging of Ulva lacyuca L. aqueous extracts[J]. Ecological Science, 2013, 32(4): 447-452.裂⽚⽯莼⽔提物清除ABTS和DPPH⾃由基的光谱学研究钟钰1,3，陈填烽2，郑⽂杰2, 杨宇峰1,3*1. 暨南⼤学⽔⽣⽣物中⼼, ⼴州5106322. 暨南⼤学化学系，⼴州5106323. ⽔体富营养化与⾚潮防治⼴东省教育厅重点实验室，⼴州510632【摘要】研究了⼤型海藻裂⽚⽯莼和富硒裂⽚⽯莼⽔提物清除 2,2’-连氮基-双-(3-⼄基苯并⼆氢噻唑啉-6-磺酸)（ABTS）及1,1-⼆苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）⾃由基能⼒及其光谱学特征。
分光光度计法测定，⽔提物 ABTS ⾃由基体系测定波长为734 nm,体系稳定时间为 6 min；DPPH ⾃由基体系测定波长为 515 nm，体系稳定时间为 30 min。
结果表明，裂⽚⽯莼⽔提物具有良好的抗氧化活性，能有效、快速地抑制溶液中 ABTS 和 DPPH ⾃由基。
在优化选择的反应体系中，裂⽚⽯莼、富硒裂⽚⽯莼和标准抗氧化剂 VC 对 ABTS ⾃由基的半数抑制浓度（IC50）分别为 76.40 µg/ml、54.11 µg/ml 和 60.69 µg/ml，说明富硒裂⽚⽯莼⽔提取的总抗氧化活性明显优于 VC，富硒培养可以显著提⾼裂⽚⽯莼的抗氧化活性。
孔石莼多糖对小鼠免疫功能的影响
广西菲牛蛭中提取的抗凝活性成分与马尼拉菲牛蛭中提取的水蛭素P6,P18[5]有多大的同源性。
从广西菲牛蛭消化液中分离提取菲牛蛭素,从根本上解决了水蛭素类产品因来源少而限制其在临床使用的问题,如果研制新型高效水蛭素溶栓剂用于治疗脑血栓病人,将大大减少心脑疾病的死亡率,降低致残率,提高长寿率,造福人类,产生较大的社会效益。
参考文献:[1] S teiner V ,K necht R ,Bornsen K O.Primary structure andfunction ofnovel o 2glycosylaced hirudins from the leech H irudinaria manillensis [J ].Biochemistry ,1992,31(8):229422299.[2] M arkwardt F.H irudin as an inhibitor of thrombin [J ].M ethods Enzy 2m ol ,1970,69(5):9242932.[3] Laemmli U K.C 2leavage of structural proteins during the assembly ofthe head of bacteriophage T 4[J ].Nature ,1970,227(3):6802685.[4] Brad ford M.A rapid and sensitive method for the quantitation of micro 2gram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding [J ].Analyt Biochem ,1976,72(2):2482254.[5] E lectricwala A ,Sawyer R T ,Jones C P ,et al.Is olation of thrombin in 2hibitor from the leech H irudinaria manillensis[J ].Blood 2C oagul 2Fibri 2nolysis ,1991,2(1):83289.孔石莼多糖对小鼠免疫功能的影响卞 俊1,储智勇2,鲍蕾蕾1,成 熙1,梁小锋1,刘先降1,周 翔1(1.中国人民解放军第411医院药学专科中心,上海200434;2.中国人民解放军海军医学研究所,上海200433) 摘 要:目的观察孔石莼多糖对小鼠免疫功能的影响。
孔石莼水相提取物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用研究
孔石莼水相提取物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用研究焉翠蔚;常宝;李晶;田友昊【期刊名称】《中国海洋大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(045)001【摘要】孔石莼新鲜藻体经低温干燥、乙醇浸提、旋转蒸发得到浸提物,再依次用乙酸乙酯、乙醚萃取,得到孔石莼水相提取物.在25℃,pH=7.5的K2 HPO4-KH2 PO4缓冲体系中,研究孔石莼水相提取物对黄嘌呤氧化酶活力的抑制作用.结果表明,孔石莼水相提取物对黄嘌呤氧化酶有明显的抑制作用,其IC50为0.58 mg/mL.进一步动力学分析表明,孔石莼水相提取物对黄嘌呤氧化酶为反竞争性可逆抑制作用,抑制常数KIS为0.40 mg/mL.联合抑制作用研究发现,孔石莼水相提取物和别嘌呤醇为弱协同作用.【总页数】5页(P30-34)【作者】焉翠蔚;常宝;李晶;田友昊【作者单位】中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003;中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003;中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003;中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003【正文语种】中文【中图分类】Q533【相关文献】1.桉叶提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的分离纯化及其动力学研究 [J], 刘又豪;赵力超;卢嘉欣;钟依琳;陈洪璋;曹庸2.买麻藤提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性实验研究 [J], 杨琴芳;袁红宇;钱雅璐3.银杏叶提取物降尿酸及对黄嘌呤氧化酶抑制作用研究 [J], 程虹毓;朱继孝4.高良姜不同提取物降尿酸及对黄嘌呤氧化酶抑制作用的实验研究 [J], 薛雪梅;徐鑫;尹超;胡隽;王伦;邹荣;许汉林5.水芹提取物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用 [J], 袁丽;张耀雷;王婷婷;李娉;罗明珠;呼永河因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
干旱胁迫下耐旱稻中旱3号全长cDNA文库的构建
分子植物育种，2007，第5卷，第3期，第367-370页Molecular Plant Breeding, 2007, Vol.5, No.3, 367-370研究报告Research Report干旱胁迫下耐旱稻中旱3号全长cDNA文库的构建刘运华1,2刘灶长1*周立国1,2余舜武1刘鸿艳1罗利军1*1 上海市农业生物基因中心, 上海, 201106;2 华中农业大学植物科学院, 武汉, 430070* 通讯作者, lzc@; lijun@摘要干旱胁迫导致很多基因的表达发生变化。
以干旱胁迫下的耐旱稻品种中旱3号为材料，我们用SMART技术(RNA转录5'末端模板转换技术)成功构建一个高质量的干旱胁迫诱导的节水抗旱稻中旱3号全长cDNA文库。
体外包装后感染大肠杆菌XL1-Blue宿主菌，未扩展文库的滴度为1.94×106 pfu/mL，重组率为85.15%。
扩展后文库的滴度为 1.45×1011 pfu/mL。
将λ噬菌体臂转入pTriplEx2质粒，从中随机挑选100个克隆，PCR扩增检测插入片段长度，结果显示文库插入片段在500~2 000 bp之间。
关键词水稻, SMART技术, 干旱胁迫, 全长cDNA文库, 抗旱相关基因Construction of Full Length cDNA Library from Drought-tolerant Rice cv. Zhonghan No. 3 Cultivated under Drought StressLiu Yunhua1,2Liu Zaochang1*Zhou Liguo1,2Yu Sunwu1 Liu Hongyan1Luo Lijun1*1 Shanghai Agrobiological Gene Center, Shanghai, 201106;2 College of Plant Science, Huazhong Agricultural University, Wuhan, 430070* Corresponding authors, lzc@; lijun@Abstract Drought stress affects plant physiological process by causing altered gene expression. A high quality full-length cDNA library of drought-stressed rice cv. Zhonghan 3 was constructed with SMART (switching mecha-nism at 5' end of the RNA transcript) technique. The λ phage packaging reaction and library amplifi cation in E.coli strain XL1-Blue were performed. The titer of unamplifi ed library was 1.94×106 pfu/mL and the recombinant rate was 85.15%. The amplifi ed library obtained a 1.45×1011 pfu/mL recombinants. Finally the λTriplEx2 clone was transformed to pTriplEx2 plasmid and 100 clones were picked randomly from the library for screening size of cDNA inserts through PCR. Results indicated that most of the inserts were between 500 and 2 000 bp. Keywords Rice (Oryza sativa L.), SMART technique, Drought stress, Full-length cDNA library, Drought-toler-ance related genes农业生产的发展往往同城市发展共同竞争着优良而且有限的土地资源。
孔石莼凝集素蛋白基因的克隆与表达
凝 集素 （ ｅｔ ） Ｌ ｃ ｎ 是一 类 非免 疫 起源 、 酶 的 、 ｉ 非 可
ｐ ｒ ｓ （ ｎ ａ ｋ ａ ｃｓ ｉｎ ｎ ｍｂ ｒ ｅｔ ａ Ｇｅ Ｂ ｎ ｃ ｅｓｏ ｕ ｅ ： ｕ
Ａ ４ ３ ６ ） ａｐ ｉｏ ｒ ｒ ｗ ｒ ｅｉ ｅ ｎ ｓｄｔ ｃ ｎ ，ａｄｓｑｅ ｃ ｈ ｅｔ ｒｔｎｇｎ ｉ Ｃ ｃ— Ｙ ３ ９ ０ ， ａｒ ｆ ｉ ｓ ｅｅｄ ｓ ｎ ｄａｄｕ ｅ ｏ ｌ ｅ ｎ ｅｕｎ ｅｔｅｌｃｎｐｏ ｉ ｅｅｗｔ Ｐ Ｒ ｔ ｈ ｐ ｍｅ ｇ ｏ ｉ ｅ ｈ ｅ
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第 ｌ ７卷第 ６期
一种菰cDNA文库的构建方法[发明专利]
![一种菰cDNA文库的构建方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1028542089eb172ded63b7ef.png)
专利名称：一种菰cDNA文库的构建方法专利类型：发明专利
发明人：臧剑,彭琼
申请号：CN201611239068.0
申请日：20161228
公开号：CN106636069A
公开日：
20170510
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及分子生物学领域，具体公开了一种菰cDNA文库的构建方法。
本发明提供了一种菰cDNA文库的构建方法，以菰的幼嫩叶片作为试验材料，由RNA提取，cDNA第一链合成，LD PCR，蛋白酶K消化，cDNA文库均一化，两次PCR放大，扩增产物纯化，Sfi I消化，酶切cDNA纯化，cDNA与PUC19载体连接，质粒的转化，以及克隆鉴定等12个步骤完成；该方法构建文库便捷，文库容量大，重组率高，完整性好，均一化后高丰度基因明显降低，为功能基因的验证奠定了基础。
本发明构建的菰cDNA文库库容量大，达到了3.6×10pfu·mL，插入片段平均长度为1000bp，重组率为97.9％，均一化全长cDNA文库能有效富集低丰度表达基因，降低冗余率。
该文库适用于目的基因的筛选，以及后续的基因、蛋白互作分析。
申请人：广东菰稻农业有限公司
地址：410125 湖南省长沙市芙蓉区远大二路892号省农科院实验大楼
国籍：CN
代理机构：北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：王文君
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、 条斑紫菜 (P orphyra yezoensis )
[ 11]
[ 8- 9 ]
、 龙须菜 ( Gracilariop sis lem aneif orm is )
[ 13 ]
[ 10 ]
、 海带 ( La m inaria
japonica )
、 坛紫菜
[ 12]
和三角褐指藻 (Phaeodactylum tricornutu m)
regu la tio n and sig na l transduct io n . 60 sequences w ith unknown functions o r no comparative results accounted for 43 . 80 % o f tota l non - redundant sequences. T he com parison si m ilarity values were distributed betw een 20 % and 60 % and the sequences had h ig her si m ilarity w ith the a m ino ac id sequences o f a lg ae and h ig her plants w hose genom e sequenc ing had been com pleted . N o cont ig s but w ho le sin g letons represen ted in the p red icted EST fragm ents w ith the sam e func tion. It w as show n tha t th e codon usage in the th ird codon posit io n show ed no sign ificant d ifference ( P > 0. 05) in U. p ertu sa and the GC frequency o f codon usage w as 50. 66% of the to ta . l T he stop codon usage preferred TGA espec ia lly. R eal ti m e fluo rescence quan titative PCR dem onstra ted tha t the relative expression abundance o f partia l genes w as iso lated from the lib rary up regula ted a t m RNA leve . l T he expression o f these d ifferen t genes constituted a com p lex regu lato ry ne t w ork , and w ould prov ide w id e range entry po ints to dem onstrate the m echan ism o f stress tole rance fo r U. pertu sa em ersed in in tertidal zone. K ey words : Ulva p ertusa; Intert id al zone ; Em ersed state ; Suppressio n subtractiv e hybridization ( SS H ); cDNA lib rary 潮间带作为海洋生态系统的重要组成部分 , 在海洋潮汐节律性交替的过程中环境变化十分剧烈。 低潮干出是潮间带大型海藻必须忍耐的一种非生物胁迫 , 这种胁迫并不是某一单一环境条件的作用 , 而 是盐度、 温度、 离子浓度、 光照强度、 渗透压等众多影响因素共同构成的复杂胁迫体系。潮间带海藻在漫 长的进化历史过程中 , 逐步适应了这种胁迫环境的变化节奏 , 产生了一系列可以抵御上述不良环境的生 理和分子机制。孔石莼 (Ulva pertusa ) 是潮间带植被生态分布中占据着优势地位的海藻 , 广泛生长在太 平洋沿岸海域的中、 低潮带的岩石和石沼上, 具有食用、 药用和工业生产等多种应用价值
Construction and analysis of subtractive cDNA library of up -regulated genes from Ulva pertusa under em ersed stress
L I Shi guo , YANG F an , WU Q ia n -qian , QI AO Kun , TONG Shao -m ing, HOU H e - sheng
Abstract : The subtractive cDNA library of up -regu la ted genes from Ulva p ertu sa under em ersed stress w as constructed by suppression subtract iv e hybridization ( SS H ) techno logy . 150 EST fragm ents of up - regu lated genes w ere isolated after sequenc ing the positive clones , in w hich 21 fragm ents w ere redundant ( RS) and other 137 fragm ents w ere non - redundant sequences ( NRS). PCR ana ly sis in dicated that the le ngth of the EST in serts w ere in the range of 100 to 900 bp . The lo ngest w as 833 bp , and the shortest w as 106 bp and the average length was 364 bp . B ased on the functional si m ilarity w ith hom o lo gous genes in a lg ae and higher plants , the EST fragm ents could be d iv ided in to several funct io ns: ce ll grow th and develop m en , t prote in
[ 6] [ 2- 4]
。 Person 等
[ 5]
构建了在
模拟干出条件下 ( 高温 及干旱脱 水 ) 2 种 墨角藻 ( Fucus serratu s 和 Fucus vesiculosus ) 差 异表达基 因的 于 1996 年以 mRNA
差别显示技术为基础建立起来的筛选未知差异表达基因的新技术, 具有效率高、 假阳性率低、 敏感程度 高等优点, 能够分 离出丰度 较低的基 因。利用 此技术 , 科研工 作者分别 构建了 杜氏盐藻 ( Dunaliella s调表达的 EST 片段 , 其中 21 条为冗 余序列 ( RS) , 137 条非冗余序列 ( NRS) 。片段中最长 833 bp, 最短 106 bp , 平均长度 364 bp 。 参与比对的 EST 片段 按照其注释 功能可分类为 : 细胞生长与发育、 蛋白合成与分解、 代谢过程、 胁迫应答、 光合作用与光诱导、 转录调节、 信 号转 导等相关基因。未知功 能和 无对 比结 果序 列共 60 条 , 占非 冗余 序列 的 43. 80% 。比 对相 似度 主 要分 布在 20% ~ 60% 之间 , 主要与已经完成基因组测序 的藻类或高等植物的氨基酸序列具有较高的相似性。孔石莼对 密码子第三位碱基的使 用偏好无显著差别 ( P > 0. 05), G C 使用 总频率为 50 . 66% , 而对终止 密码子则 明显偏 好 TGA。实时荧光定量结果表明 , 部分分离 的基因 在干出 胁迫状 态下表达 量上调。 这些不 同功能基 因的表 达构成了复杂的调控网 络 , 能够为揭示孔石莼抵御潮间带不良环境的分子机 制提供多方面的切入点。 关键词 : 孔石莼 ; 潮间带 ; 干码 : A
第 2期
李世国等 : 孔石莼thesis and degradation , m etabo lism,
stress response , photosynthesis and pho toinduction ,
transcr ip tion
文章编号 :
1004- 2490( 2011) 02- 0172- 09
孔石莼在吴倩倩, 乔 坤, 佟少明, 侯和胜
116029) ( 辽宁师范大 学生命科学学院 , 辽宁省植物生物技术重点实验室 , 大连 摘
要 : 利用抑制消减杂交技术 构建了潮间带绿藻孔石莼 ( Ulva p ertusa )在 干出胁迫状 态下上调 表达基因的
1 材料与方法
1 . 1 孔石莼采集与胁迫处理 孔石莼于大潮时采集自大连付家庄海域的礁石上, 取个体完整并淹没于海水中的藻体 , 盛于采集箱 中立即运回实验室。采集地点海水表面温度 5 10 d: 光照强度 100 m o l/m
2
1
, 盐度 35 1 。在下述条件的光照培养箱中预培养
s 、 温度 5
等不同海藻特异表达基因的消减, 分离得到了大量在海藻中差异表达的基因并对这些基因的序列特点及功能进行了初步的分析 , 进 一步证明了 SS H 技术在海藻研究领域的有效性。 实验选用孔石莼为材料, 在室内进行干出胁迫处理 , 利用 SS H 技术分离胁迫诱的分离与功能鉴定能够为阐释 潮间带海藻耐受不良环境胁迫的调控网络和分子机制提供一定的理论依据。
[ 1]
, 是海岸带
生态系统的重要海藻物种 , 对于涨潮时的海水淹没和退潮时的干出状态具有很强的适应性。对于羊栖 菜 ( Sargassum fusif orm e) 、 石莼 (Ulva lactuca) 、 坛紫菜 (P orphyra haita nensis) 等一些典型的经济海藻在干 出状态下藻体的生长发育、 光合作用等生因。 抑制消减杂交 ( Suppression subtractive hybrid izat io n , SS H ) 是由 D iatchenko 等