土壤微生物测定方法

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土壤微生物量测定方法

土壤微生物量测定方法常规培养法是最早也是最常用的土壤微生物量测定方法之一、该方法是将土壤样品经过稀释后接种到含有特定培养基的培养皿中，经过一段时间的培养，根据培养皿上的菌落数量计算土壤中微生物的数量。

常用的培养基有营养琼脂培养基、土壤细菌培养基和土壤真菌培养基等。

常规培养法的优点是简单易行，可以同时测定不同类型微生物的数量，但该方法有一些局限性，如只能测定能够在培养基上生长的微生物，不能测定需异养条件才能生长的微生物，而且该方法容易低估土壤中微生物的真实数量。

生物量测定法是一种利用土壤微生物的生物学过程测定微生物量的方法。

该方法一般分为碳饥饿法和氮饥饿法两种。

碳饥饿法是将土壤样品暴露在低碳条件下（如0.01%葡萄糖溶液中）一段时间后，测定土壤中的微生物的生物量。

氮饥饿法是将土壤样品暴露在低氮条件下（如0.01%硝酸铵溶液中）一段时间后，测定土壤中的微生物的生物量。

这两种方法都是利用微生物的生物学特性，通过测定微生物对不同养分的响应来估计微生物的数量。

生物量测定法的优点是准确度较高，可以测定土壤中广泛类型的微生物，但该方法也有一些局限性，如需要较长的试验周期，测定过程中需要严格控制温度、湿度等环境条件，且操作较为繁琐。

生物学特征法是一种通过测定土壤微生物的生物学特征来评估微生物群体数量的方法。

该方法常用的特征包括土壤酶活性、呼吸作用速率、微生物生长速率和微生物群体的磷脂脂肪酸组成等。

这些特征的测定可以通过色谱、酶反应和分子生物学技术等手段进行。

生物学特征法的优点是操作简便，消耗土壤样品较少，时间短，结果可靠。

但该方法也有一些问题，如不同微生物对环境的响应不同，结果受环境因素影响较大。

综上所述，土壤微生物量的测定方法有常规培养法、生物量测定法和生物学特征法等。

不同的测定方法各有优缺点，使用时可以根据具体的研究目的和所需数据的准确度进行选择。

此外，单一的方法往往无法全面准确地评估土壤微生物量，因此常采用多种方法综合分析，以得到更准确的结果。

土壤微生物数量测定方法

土壤微生物数量测定方法土壤微生物是指生活在土壤中的微小生物，包括细菌、真菌、放线菌、古菌等。

土壤微生物在土壤的生物地球化学循环、有机质分解、养分转换和植物健康等过程中起着重要的作用。

因此，对土壤微生物数量的准确测定具有重要意义。

本文将介绍一些常用的土壤微生物数量测定方法。

1.瓶培法：将适量的土壤样品与适量的培养基混合，在37°C下培养约24小时，然后通过平板计数法或最凼稀释法进行测定。

2.膜过滤法：将土壤提取液通过特定孔径的膜过滤器滤过，然后将膜放置在培养基上进行细菌的生长，最后进行计数。

3.间接法：通过测定土壤样品的可培养细菌指标，如氧化还原酶、脱氢酶等的活性，从而推算出土壤中的细菌数量。

4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的细菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行细菌数量的测定。

1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的真菌，通过计数来估算真菌的数量。

2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使真菌生长形成菌落，最后进行计数。

3.膜过滤法：与细菌数量测定相似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行真菌的生长，最后进行计数。

4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的真菌基因，如18SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行真菌数量的测定。

1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的放线菌，通过计数来估算放线菌的数量。

2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使放线菌生长形成菌落，最后进行计数。

3.膜过滤法：与细菌和真菌数量测定类似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行放线菌的生长，最后进行计数。

4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的放线菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行放线菌数量的测定。

通过上述方法测定土壤中微生物的数量，可以了解土壤微生物对土壤生态系统功能的影响，并为土壤质量评价和科学合理利用提供依据。

土壤微生物测定方法

土壤微生物测定方法
目前常用的土壤微生物测定方法主要包括直接计数法、培养法、DNA
分析法和生化方法等。

1.直接计数法：直接计数法是指通过显微镜观察和计数土壤中微生物
的数量。

这种方法简单直观，可以快速测定土壤中微生物的数量。

但是，
由于土壤微生物数量庞大，直接计数方法需要大量的样品和时间，且对操
作者的要求较高。

2.培养法：培养法是指通过将土壤样品接种在富含营养物质的培养基上，并在一定温度和湿度下培养一段时间，通过观察和计数可见的菌落来
测定土壤中微生物的数量和种类。

这种方法可以有效地测定土壤中常见的
细菌和真菌等，但是对于无法培养的微生物种类相对有限。

3.DNA分析法：DNA分析法是指通过提取土壤中微生物的DNA，并通
过PCR扩增和DNA测序等技术来测定土壤中微生物的种类和多样性。

这种
方法可以检测到所有存在的微生物，无论是否可以培养。

因此，DNA分析
法可以更全面地测定土壤中微生物的多样性和种类。

但是，这种方法对实
验条件和技术要求较高。

4.生化方法：生化方法是指通过测定土壤中微生物代谢产物的含量或
活性来测定土壤中微生物的数量。

例如，通过测定脲酶、葡萄糖酶、氧化
还原酶等土壤微生物常见的酶活性来评估微生物的活性和数量。

生化方法
可以快速测定土壤微生物的数量和活性，但是受土壤理化性质的影响较大。

总之，以上所述的方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方
法或多种方法相结合来测定土壤微生物的数量和多样性。

此外，测定方法
的选择还要考虑实验所需的样品数量、可行性和经济性等因素。

土壤微生物生物量的测定方法

土壤微生物生物量的测定方法1.直接计数法：直接计数法是通过显微镜观察土壤样品中微生物数量来测定土壤微生物生物量。

常用的直接计数法包括滴定法、薄层计数法和电镜计数法。

滴定法是将土壤样品溶解后，通过滴定法来计数微生物细胞的数量。

滴定法主要包括用荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）作为参比菌，将细菌与土壤样品混合，经一系列稀释后进行滴定。

通过观察滴定液中菌落的数量，可以推算出原始土壤样品中微生物的生物量。

薄层计数法是将土壤样品制成薄层，然后在显微镜下进行计数。

这种方法可以直接观察微生物的形态特征，通过计算单位面积上微生物的数量来估算微生物生物量。

电镜计数法是利用电镜的高分辨率特性，观察土壤样品中微生物的形态和数量。

这种方法可以观察到更小的微生物和微生物的形态细节，但是操作复杂，成本较高。

2.间接测定法：间接测定法通过测定土壤中微生物活性代谢产物来估算微生物生物量。

常用的间接测定法包括ATP测定法、细胞膜脂肪酸测定法和氮素代谢产物测定法等。

ATP测定法是通过测定土壤中的三磷酸腺苷(ATP)含量来估算微生物生物量。

微生物的ATP含量与其生物量有一定的关系，因此可以通过测定ATP含量来间接估算土壤微生物生物量。

细胞膜脂肪酸测定法是通过测定土壤样品中微生物细胞膜中的脂肪酸含量来估算微生物生物量。

微生物细胞膜中的脂肪酸种类和含量与微生物群落的组成和数量有关，因此可以通过测定脂肪酸的含量来间接估算微生物生物量。

氮素代谢产物测定法是通过测定土壤样品中微生物氮素代谢产物的含量来估算微生物生物量。

微生物的氮素代谢活动与其生物量有关，因此可以通过测定氮素代谢产物的含量来间接估算微生物生物量。

3.分子生物学方法：分子生物学方法是利用PCR技术对土壤样品中微生物的DNA或RNA进行扩增和测定来估算微生物生物量。

常用的分子生物学方法包括引物扩增法、荧光原位杂交法和高通量测序法等。

引物扩增法是通过设计特定的引物对微生物的DNA或RNA进行扩增，并通过PCR反应的产物数量来估算微生物生物量。

土壤微生物分析方法

土壤微生物分析方法
一、引言
土壤是地球上肥沃的生活空间，也是物质循环的重要环节。

微生物在土壤中起着重要作用，它们参与着养分、水、氮的循环，帮助植物吸收养分和水，并发挥抗病虫、降解污染物等作用，是土壤生态系统中的重要组成部分。

随着科学技术的发展，目前的研究已经逐渐从单一微生物研究转变成研究其复杂而多样的群落，并且研究微生物群落的多样性和功能。

因此，准确研究土壤微生物以及其群落结构及功能，对于土壤环境的分析和调控有重要意义。

1、液体培养法
液体培养法是一种用于分析土壤微生物群落的常用方法，它的工作原理是在恒温的培养箱中，用有机物质和无机物质组成的培养基培养土壤中的微生物，并监测它们的生长。

培养基的组成成分可以根据需要变化，以考察特定微生物的生长情况及功能。

液体培养法可以清楚的显示不同类型的微生物群落的数量和组成，为分析其功能及其影响环境的作用提供重要的参考依据。

2、分子生物学技术
分子生物学技术包括核酸提取、PCR扩增、PCR测序等技术，主要用于检测土壤中的微生物群落结构，研究其适应性、多样性、抗药性等方面的知识。

土壤微生物测定取样方法

土壤微生物测定取样方法
确定土壤微生物的测定取样方法需要考虑以下几个步骤：
1. 确定取样点：根据研究目的和土壤类型选择取样点。

通常应选择代表性地带土壤、若干个深度（如0-10厘米，10-20厘米，20-30厘米等）的土壤样品。

2. 准备工具：取样时需要准备洁净的工具和容器，如无菌铲子、无菌采样袋或无菌容器等，以避免样品受到外界微生物的污染。

3. 取样方法：将土壤取样器或无菌铲子插入土壤中，以尽量保持样品的代表性。

每次采样之前都应彻底清洗工具，以防止交叉污染。

4. 样品处理：将采样的土壤样品放入无菌容器中，并尽快送至实验室进行分析。

如果不能立即送达实验室，样品应存储在低温环境中，以减缓微生物代谢。

在实验室中，测定土壤微生物的方法可以包括土壤微生物生物量、多样性和功能等方面的分析。

需要注意的是，不同类型的土壤微生物所需的取样方法和处理方式可能有所不同，具体的步骤和要求应根据具体研究的需求和方法的要求进行调整。

土壤微生物生物量的测定方法汇总

土壤微生物生物量的测定方法汇总操作步骤：1.准备工作：采集土壤样品，并将土壤样品分为适量的小样品。

2.氯仿熏蒸：将一定量的小样品放入氯仿熏蒸瓶中，然后加入适量的氯仿，并快速将瓶口封紧。

3.震荡：用震荡器对氯仿与土壤样品进行充分的混合震荡，使氯仿充分与土壤样品接触。

4.放置：将瓶子放置在室温下静置一段时间，一般为24小时，使土壤样品中的微生物充分溶解到氯仿中。

5.分液：将上清液和沉淀物分离。

上清液中含有溶解在氯仿中的微生物细胞，沉淀物中含有没有溶解的土壤颗粒和其他杂质。

6.校验：对上清液进行校验，可以采用PFLA（没有悬浮杂质时的上清液）或PFLA-Na2CO3（有悬浮杂质时的上清液）校验液。

7.测定：将校验液填入比色皿中，使用分光光度计对比色皿中的液体进行测定，并记录吸光度值。

原理：氯仿熏蒸法通过将土壤样品与氯仿混合，可以将土壤中的微生物细胞全部溶解到氯仿中。

通过将溶解在氯仿中的微生物细胞与校验液比色，在分光光度计上测定吸光度值，从而确定土壤中微生物的生物量。

氯仿熏蒸法的优点：1.操作简单，不需要复杂的设备和技术支持。

2.适用于各种类型的土壤，包括砂土、壤土、黏土等。

3.测定结果可靠，具有较高的重复性和准确性。

氯仿熏蒸法的缺点：1.只能测定细菌和放线菌等氧气需氧微生物，不能测定厌氧微生物的生物量。

2.氯仿对环境和人体有一定的毒性和危险性，操作时需要注意安全。

总结：氯仿熏蒸法是一种常用的测定土壤微生物生物量的方法。

通过将土壤样品与氯仿混合，将微生物细胞溶解到氯仿中，然后通过比色法测定吸光度值，从而确定土壤中微生物的生物量。

氯仿熏蒸法操作简单，适用于各种类型的土壤，且结果可靠。

但需要注意操作时的安全性。

除了氯仿熏蒸法外，还有其他一些方法也可用于测定土壤微生物生物量，如酚酸法、磷酸化氧化法等，可以根据实际需求选择合适的方法进行测定。

土壤微生物学特征的测定

土壤微生物学特征的测定一土壤微生物量碳、氮的测定将新鲜的土壤样品含水量调节至田间含水量的30%~50%，25℃下密封预培养7~10d,以保持土壤均匀和不同的地方所得结果的可比性。

然后迅速测定土壤微生物量碳氮，或在低温4℃下保存。

采用氯仿熏蒸-K2SO4提取法测定土壤微生物量碳氮，即称取预处理的湿润土壤每份20.0g（烘干基重）放入50ml烧杯中，将其置于底部有少量NaOH、少量水（约200ml）和去乙醇氯仿的真空干燥器中，抽真空后保持氯仿沸腾3-5min；然后，将干燥器移置在黑暗条件下25℃熏蒸土壤24h，再次抽真空完全去除土壤中的氯仿。

将熏蒸好的土壤转移到200ml提取瓶中，加入约80ml0.5mol/LK2SO4提取液（土水比为1∶4），振荡30min后过滤，得土壤提取液每份土样重复3次。

同时做未熏蒸空白和试剂空白。

土壤微生物量碳：用重铬酸钾氧化法测定吸取10ml土壤提取液于150ml消化管中，加入0.2mol/LKCrO和浓硫酸各5.0ml，再加入少量沸石，混匀，于175℃磷酸浴中煮沸10min。

冷却后全部移入150ml三角瓶中，使总体积约80ml，加入2滴邻啡罗啉指示剂，用0.05mol/LfeSO滴定至砖红色。

土壤微生物量碳（Bc）=Ec/Kc，Ec表示未熏蒸与熏蒸对照土壤的浸取有机碳的差值，Kc未转换系数，取值0.38。

土壤微生物量氮：用凯氏定氮法测定取20ml土壤提取液于250ml消化管中，加入0.19mol/LcuSO溶液0.4ml、浓硫酸6.7ml 消化至澄清，冷却后进行定氮。

土壤微生物量氮（Bn）=En/Kn，En为熏蒸与未熏蒸对照土壤矿质态氮的差值，Kn为转换系数，取值0.45。

二土壤酶活性的测定土壤过氧化氢酶活性用高锰酸钾滴定法、脲酶活性用靛酚蓝比色法测定。

过氧化氢酶活性以20min后每克土消耗。

0.02mol/L高锰酸钾毫升数表示，脲酶活性一24h后每百克土NH3-N的毫克数表示。

土壤微生物量测定方法

土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳(氯仿熏蒸－K2SO4提取—碳分析仪器法）1、试剂(1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v)加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。

得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分.纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。

（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L—1］：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳,从而影响滴定终点判断和测定的准确度。

配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱,可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d.待碳酸钠沉降后，取56 ml 50％氢氧化钠上清液（约19 mol L—1)，用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。

（3)硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0。

5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾,用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L,盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h 即可。

(4）六偏磷酸钠溶液［ρ（Na）= 5 g 100 ml—1，pH 2.0］：称取50。

0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2。

0，用高纯度去离子水定容至1 L.要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制;由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。

（5)过硫酸钾溶液［ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20。

0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。

值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。

（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸(85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。

土壤微生物测定方法

土壤微生物测定土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。

土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。

测定指标：1、土壤微生物量(Mierobia lBiomass，MB)能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。

它与土壤有机质含量密切相关。

目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO2，根据释放出的CO2:的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。

因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。

此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。

受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。

熏蒸提取-容量分析法操作步骤：（1）土壤前处理和熏蒸（2）提取将熏蒸土壤无损地转移到200mL聚乙烯塑料瓶中，加入100mL0.5mol·L-1 K2SO4（图水比为1:4；w：v），振荡30min（300rev·min-1），用中速定量滤纸过滤于125mL塑料瓶中。

熏蒸开始的同时，另称取等量的3份土壤于200mL聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol·L-1 K2SO4提取；另作3个无土壤空白。

提取液应立即分析。

（3）测定吸取10mL上述土壤提取液于150mL消化管（24mmх295mm）中，准确加入10mL0.018 mol·L-1K2Cr2O7—12 mol·L-1H2SO4溶液，加入2~3玻璃珠或瓷片，混匀后置于175±1℃磷酸浴中煮沸10min（放入消化管前，磷酸浴温度应调至179℃，放入后温度恰好为175℃）。

土壤微生物测定方法

土壤微生物测定土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。

土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N 、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。

测定指标：1、土壤微生物量(MierobialBiomass ，MB)能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um 3的生物总量。

它与土壤有机质含量密切相关。

目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO 2，根据释放出的CO 2:的量和微生物体矿化率常数Kc 可计算出该土样微生物中的碳量。

因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。

此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。

受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。

熏蒸提取-容量分析法操作步骤：（1）土壤前处理和熏蒸（2）提取将熏蒸土壤无损地转移到200mL 聚乙烯塑料瓶中，加入100mL0.5mol ·L -1K 2SO 4（图水比为1:4；w ：v ），振荡30min （300rev ·min -1），用中速定量滤纸过滤于125mL 塑料瓶中。

熏蒸开始的同时，另称取等量的3份土壤于200mL 聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol ·L -1K 2SO 4提取；另作3个无土壤空白。

提取液应立即分析。

（3）测定吸取10mL 上述土壤提取液于150mL 消化管（24mm х295mm ）中，准确加入10mL0.018mol ·L -1K 2Cr 2O 7—12mol ·L -1H 2SO 4溶液，加入2~3玻璃珠或瓷片，混匀后置于175±1℃磷酸浴中煮沸10min （放入消化管前，磷酸浴温度应调至179℃，放入后温度恰好为175℃）。

土壤微生物数量的测定方法

土壤微生物数量的测定方法土壤微生物数量的测定方法是指用来确定土壤中微生物的数量的一系列方法。

微生物在土壤中的数量是影响土壤肥力、健康状态以及生物多样性的主要因素，所以对土壤微生物数量的测定十分重要。

目前，有几种常用的测定土壤微生物数量的方法，包括计数法、分子生物学方法和非分子生物学方法。

一、计数法计数法是目前最常用的测定土壤微生物数量的方法。

该方法通过对样本中的细胞进行数目和形态的观察，来获得关于微生物数量的信息，然后通过计算微生物数量来估计土壤微生物总数。

1. 总体计数法总体计数法是使用显微镜观察和计数样品中的微生物，把检测到的微生物总数乘以一定的系数，就可以估算出土壤中的总微生物数量。

该方法是实时性强，耗时少，易于操作，但是由于细胞大小不一，活性差异大，难以检测到的微生物会影响准确性，因此不能精确测定土壤中的微生物数量。

2. 半定量计数法半定量计数法是通过将土壤样品进行细胞悬液制备，然后用显微镜观察和计数，来估算土壤中的微生物总数。

该方法也是实时性强，耗时少，易于操作，但是由于细胞大小不一，活性差异大，难以检测到的微生物会影响准确性，因此也不能精确测定土壤中的微生物数量。

二、分子生物学方法分子生物学方法是指使用基于DNA或RNA的技术来测定土壤中的微生物数量的方法。

目前，常用的分子生物学方法有PCR方法、qPCR方法、FISH方法、DGGE方法和pyrosequencing方法。

1. PCR方法 PCR方法是使用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术来检测土壤中的微生物数量的方法。

PCR方法可以快速检测出土壤中的微生物，但它不能检测出细菌的种类。

2. qPCR方法 qPCR方法是使用定量聚合酶链反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR）技术来检测土壤中的微生物数量的方法。

qPCR技术可以检测出微生物的种类，并且可以准确测定土壤中的微生物数量。

土壤微生物生物量的测定方法

土壤微生物生物量的测定方法土壤微生物生物量是衡量土壤生态系统功能的重要指标之一、测定土壤微生物生物量可以帮助我们了解土壤生态系统的活跃度和健康状况，进而指导土壤环境修复以及农田生产管理。

氯仿熏蒸法是一种常用的测定土壤微生物生物量的方法，本文将对该方法进行详细介绍。

首先，介绍氯仿熏蒸法的原理。

氯仿是一种广谱杀菌剂，可以破坏土壤中的微生物细胞膜，使微生物失去活性。

在测定土壤微生物生物量时，将土壤样品放置在含有适量氯仿的密闭容器中，通过熏蒸的方式杀灭土壤中的活性微生物。

熏蒸时间通常为24小时。

然后，通过测定氯仿熏蒸前后土壤中可溶性氮的浓度差异，计算出土壤微生物生物量。

其次，介绍氯仿熏蒸法的操作步骤。

首先，将采集到的土壤样品通过筛网筛选除去杂质。

然后，将土壤样品平均分配到已预先称量好的量筒中。

每个量筒中的土壤样品重量应保持一致。

为了保证测定的准确性，通常会设置重复样品。

接下来，在密闭容器的底部放置氟化钾和含有适量氯仿的吸附剂。

然后，将装有土壤样品的量筒设置在容器的顶部，将密闭容器封闭并在室内温度下进行熏蒸。

熏蒸时间通常为24小时。

熏蒸结束后，取出含有氯仿的吸附剂，并将土壤样品离心以去除残余的溶液。

最后，用适量的蒸馏水冲洗残留在土壤样品中的溶解态氮，并测定冲洗液中溶解态氮的浓度。

最后，介绍氯仿熏蒸法的数据分析和结果解释。

首先，通过测定熏蒸前后土壤样品中可溶性氮的浓度差异，计算出土壤微生物生物量。

常用的计算公式为：其中，溶液体积为冲洗液的体积，土壤样品质量即为放置在量筒中土壤样品的质量。

通过计算，可以得出土壤微生物生物量的结果。

根据测定结果，我们能够了解土壤微生物的数量和活性程度。

较高的土壤微生物生物量通常表示土壤中的微生物丰富多样且活跃，土壤生态系统功能较好。

而较低的土壤微生物生物量则提示土壤中微生物数量和活性较低，土壤生态系统功能受到一定程度的抑制。

因此，通过氯仿熏蒸法测定土壤微生物生物量，可以为土壤环境修复和农田生产管理提供科学依据。

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。

因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。

本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。

一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。

这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。

2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。

有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。

3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。

这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。

4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。

该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。

1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。

这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。

2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。

比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。

3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。

荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。

4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。

比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。

5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。

电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。

总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。

每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)汇总

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）1.1 基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂1）无乙醇氯仿（CHCL3）；2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。

（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）1.4 操作步骤1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）1.4.2 熏蒸称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。

将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。

盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。

关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

1.4.2 抽真空处理熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。

同时，另称等量的3份土壤，置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。

土壤微生物测定方案

释度，分别接种 1 ml 稀释液与制作好的液体培养基中，根据需要做 3~4 次重复，适温培养。
2 三大类土壤微生物培养基的分离
三大类土壤微生物的分离采用稀释平板涂抹法，每个菌种要求做 3 个稀释度，每个稀释度做
3-4 次重复，选取细菌和放线菌的菌落在 20~-200 之间的培养皿、真菌的菌落在 10-~100 的培养皿计数，并计算三次重复的平均值。每克干土中微生物数量计算式：
③根据各类微生物在土壤中的数量多少选择适当稀释度的悬液接种。本实验选择细菌的稀释度为 10-~10-5，放线菌为 10~-10-4，真菌为 10-1~-10-3。 -3-2
④土壤悬液的接种方法：在无菌培养皿中倒入 15~20 ml 选择性培养基，待凝固后，用 0.2 ml无菌移液枪吸取0.2 ml各稀释度的土壤悬液，然后立即用涂抹棒将悬液均匀的涂抹于培养基表面。用同一支吸管接种时，从高稀释度开始，依次接种到低稀释度。
0.5g、NaCl 0.5g、琼脂 18g、3%重铬酸钾溶液 3.3ml、蒸馏水 1000ml、pH 值 7.2~-7.4
3，真菌：马丁氏培养基（虎红琼脂）：蛋白胨 5g、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g、葡萄糖 10g、琼脂 18.5g、孟加拉红 0.033g、氯霉素 0.1g、蒸馏水 1000ml
所有培养基需在湿热灭菌锅中 121°C 灭菌 20-~30 min。
②将上面的土壤悬液用无菌移液管吸取 5 ml 到 45 ml 稀释液中，即为 10-2稀释度，依次按 10倍法稀释，制成 10-1~-~10-6稀释度。（注意：每次吸取悬液时，在稀释液中反复吸入和吹出 3-~5 次，减少因管壁吸附而造成的误差，并使悬液进一步分散，每个稀释度需要更换无菌吸管吸取悬液。）

土壤微生物量测定方法

方法:（1）土壤培养称取风干土（高砂土）9克于培养皿，加入1克煤灰（80目），混合均匀。

加入1ml新鲜土壤的浸提液作为接种菌液，再加入蒸馏水10ml，在28度恒温条件下7天。

(2)氯仿熏蒸将25ml无乙醇氯仿和培养的样品放入抽气皿，连上抽气机，抽真空使氯仿沸腾5min，关紧活塞，关闭抽气机。

置于黑暗中24小时后取出氯仿，反复抽真空3～5次（每次5min）,排除氯仿。

同时做不熏蒸的处理（但同时进行暗培养）。

（3）浸提将上述经过氯仿熏蒸与未经过氯仿熏蒸的样品转移【注】到塑料瓶中，加入0.5mol/L K2SO4 Xml,在25度、200rpm 的水平恒温振荡机上振荡30min离心过滤，上TOC仪测定。

【注】为确定样液比，转移前称整个培养皿重(W1)，转移后再称重(W2)，二者之差再减去原来加入的样重（W3），即为转移时样品中的水分重量。

样液比＝W3/（W1-W2-W3+VK2SO4）样重W3＝煤灰重＋土重W1(g)W2(g)水分重量（g)VK2SO4(ml)W3(g) 样液比TOC结果（ppm)全＋熏蒸41.531.05 5.454050.1100128.2厌＋熏蒸54.0139.15 4.8640100.2229129.6好＋熏蒸45.1134.940.1735100.284332.9全47.7242.470.253550.14188.366厌52.2736.09 6.1835100.242820.56好42.3532.36-0.0135100.285831.34样品有机C含量(ppm)Ec(ppm)微生物碳Bc(ppm)全＋熏蒸1165.31106.42456.1厌＋熏蒸581.4496.71102.7好＋熏蒸115.7 6.113.4全59.0厌84.7好109.7。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）1.1 基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。

关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。