高粱不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异
高粱组织培养技术研究进展
高粱组织培养技术研究进展
彭祥;张德春
【摘要】高粱是全球第五大谷类作物,是食品、饲料和加工业的原料,也是一种潜在的能源作物,具有重要的应用价值.然而,通过基因工程技术对高粱进行遗传改良却十分困难,其主要原因是缺乏高效的组织培养体系.结合近年来的研究,从基因型、外植体、培养基、植物激素等影响高粱组织培养的主要因素进行综述,重点讨论了促进高粱再生的策略,并提出解决高粱组培再生困难的两大研究方向:一是深入研究植物再生的遗传及表观遗传机制;二是根据各基因型的代谢特点,进一步优化培养条件,旨为建立高效的高粱组织培养体系提供参考.
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】2018(034)010
【总页数】8页(P41-48)
【关键词】植物组织培养;基因型;外植体;培养基;植物激素
【作者】彭祥;张德春
【作者单位】三峡大学生物技术研究中心,宜昌 443002;三峡大学生物技术研究中心,宜昌 443002;湖北省三峡特色植物繁育工程技术研究中心,宜昌 443002
【正文语种】中文
高粱(Sorghum bicolor L. Moench)是继小麦、水稻、玉米和大麦之后的全球第五大谷类作物,具有极强光合作用效率和抗逆能力,耐高温、耐旱、耐涝、耐盐
碱、耐贫瘠、耐干热风,素有“作物中的骆驼”之称[1]。高粱产品用途广泛,经济价值高,是食品、饲料和加工业的重要原料[1]。在干旱和半干旱地区,尤其是非洲和亚洲某些地区,高粱是主要的粮食作物,为全世界超过30个国家约5亿人口提供膳食来源[2]。近年来,能源危机和环境问题日益突出,生物质能以其独特的优点在解决能源和环境矛盾中受到世界各国的高度重视[3]。高粱尤其是甜高粱,其秸秆中含有大量的可溶性糖分,可直接用于发酵生产燃料乙醇,秸秆中大量的纤维素是生产纤维素乙醇的重要原料[1]。因此,甜高粱是目前公认的最有应用前景的再生能源作物之一[4]。但现有高粱品种存在不少缺陷:其一,易感染病虫害[5-6];其二,营养价值、产量及其他相关农艺性状有待改良。植物基因工程育种是现代生物技术的重要组成部分,其在水稻[7]、棉花[8]、大豆[9]等作物中的应用已有广泛的报道,并取得良好的效果。这为高粱的种质资源改良提供了一条思路。在植物基因工程育种中,植物组织培养技术起着重要的基础作用。高效的植物组培再生体系是成功进行遗传转化的先决条件[10]。然而,大量的研究表明,高粱通过组织培养再生比较困难,这是制约高粱遗传转化的一个技术瓶颈。
不同胚性愈伤率小麦胚发育过程生化和显微结构特征研究
不同胚性愈伤率小麦胚发育过程生化和显微结构特征研
究
1. 引言
1.1 背景介绍
小麦(Triticum aestivum L.)作为世界上最重要的粮食作物之一,在全球粮食生产中起着重要作用。小麦的胚性在种子发芽和幼苗生长
阶段起着关键作用,影响着作物的产量和品质。不同胚性的小麦品种
在胚胎发育过程中显示出明显的差异,这种差异可能会影响到植物的
生长发育和抗逆性。对不同胚性小麦的胚发育过程进行深入研究,可
以为改良小麦品种、提高产量和品质提供重要的理论依据。
目前,关于不同胚性对小麦胚发育过程的影响的研究还比较有限,因此需要进一步深入探讨。通过对不同胚性小麦品种的生化和显微结
构特征进行研究,可以揭示胚发育过程中的关键事件并探讨其机制。
这将有助于了解不同胚性对小麦生长发育的影响,为育种和生产实践
提供更准确的指导。本研究旨在通过对不同胚性小麦品种胚发育过程
中生化和显微结构特征的研究,深入探讨不同胚性对小麦生长发育的
影响,并为未来的研究提供新的思路和方向。
1.2 研究目的
本研究的目的是探究不同胚性对小麦胚发育过程的影响,深入分
析不同类型的小麦胚在生化和显微结构特征上的差异。通过对比分析
不同胚性小麦胚的生长发育过程中细胞分裂情况和关键事件,揭示不同类型小麦胚的发育特点和规律。还将探讨不同胚性对小麦胚发育的影响机制,探究生化和显微结构特征之间的关联性,为进一步研究小麦胚发育提供理论和实验基础。通过本研究,可以深化对小麦胚发育过程的认识,为小麦生长发育及产量提高提供科学依据和技术支持。【2000字】
2. 正文
11.3愈伤组织的诱导、形成及分化04
78.2
出愈率 initiating rate
重复2 replicate
2 %
重复3 replicate
3 %
平均 avera
ge %
96.8
92.1
94.4
89.5
89.7
90.1
89.5
87.5
87.4
88.2
86.4
86.8
76.9
78.8
78.8
F值 F value
F=28.67**
4、培养基类型
依培养基配方中含盐量多少可将目前培养基分为4类:
**含盐量较大的培养基,如Murashige and Skoog于1962年设计的MS培
养基以及改良的MS培养基,这类培养基含较高浓度的硝酸盐、铵盐和 钾盐,微量元素非常全,此外LS(Linsmaier and Skoog, 1965)、 BL(Brown and Lawrence, 1968)、ER(Eriksson, 1965)培养基也属于这 类培养基。 **硝酸钾含量较高的培养基,如B5(Gamborg等,1968)、N6(朱至清 等,1975)、SH(Schenk 和 Hildebrandt,1972),这类培养基的 盐浓度也很高,其中NH+4和PO-34是由NH4H2PO4提供。 **含盐量中等的培养基,如H(Bourgin 和 Nitsch,1979)培养基,这类 培养基中大量元素为MS的1/2,微量元素种类减少,但含量增加,维生 素种类比MS的多,在Nitsch培养基中生物素提高了10倍。 **低盐浓度的培养基,如White培养基(1943),WS(Wolter和Skoog, 1966)和HE培养基(Heller,1953)。
植物组织培养具体原理
➢ 体细胞胚胎发生具有普遍性,目前已在200多种被 子植物上观察到体胚发生过程。
植物组织培养具体原理
合子胚的 发生过程
植物组织培养具体原理
植物组织培养具体原理
双子叶植物胚胎发生: 合子-原胚-球形胚-心型胚-鱼雷胚-子叶胚
单子叶植物胚胎发生: 合子-原胚-球形胚-盾型胚-子叶胚
体细胞胚胎发生与合子胚发生阶段类似,但体胚形成由体 细胞(或小孢子等性细胞)形成。
植物组织培养具体原理
器官水平的再分化:由分化出的不同组织形 成各种器官,如芽、茎、叶、根等。 根据起源不同,分为两种类型:
– 直接器官发生(器官wk.baidu.com):直接从外植体的细胞形 成器官原基,然后发育成器官。
– 间接器官发生(器官发生型):先形成愈伤组织, 再由愈伤组织产生不同的器官原基,后形成不同器 官。
细胞水平的再分化:愈伤组织生长、不 断分裂,分化出不同的细胞类群。主要 有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、石 细胞、纤维细胞等。
楸树不同类型胚性和非胚性愈伤组织的细胞学观察
部 分移 到 营养钵 中在大 棚 内继续 培育 。
1 2 愈 伤 组 织诱 导 .
以茎段 为外 植体 , 种到 N 6 B . gL+ 接 6+ - A30m / N A0 0 m / A .5 gL的 愈 伤诱 导培 养基 中 培养 l 4天 , 转 入N 6+T Z02mgL+ N A00 m / D . / A .1 g L的愈伤 分化 培 养基 继代 培养 。
Mo p ooia a d ctlg a o srain o h i eetcl si aa a b n e f E i .E G r h lg l n yoo i l bev t n tedf rn al n C tl u g i N Yn P N c c o u p R g
1 3 扫描 电镜 样品 制备 与观 察 .
用茎尖进行增殖 , 但是利用茎尖培养进行快繁 , 其繁
殖 系数 的提 高空 间终 究有 限 , 因此 急需 探讨 提 高繁殖 系数 的有效 方法 。许 多植 物 材料 , 通过 愈伤 组织 培养
能够获得大量的不定芽或不定胚 , 从而大大提高 了繁 殖效率。但相对而言, 楸树 的愈伤组织培养却 比较困
Frta to ’ d rs:Frs ySa o f a n i , a n 10 6 hn is uh r Sa d es oet tt no migCt N mi 2 0 3 ,C ia r i N y g
第五章愈伤组织培养
2)其他植物生长物质的作用 细胞分裂素有利于胚状体的形成 0.1μg·L-1 玉米素促进胡萝卜体细胞胚发生。 GA3、ABA抑制成胚;
3)氨源形态的影响 还原N(NH4+) 氧化N(NO3-) 有机氮 (氨基酸、水解酪蛋白等) 野生胡萝卜叶柄节段的培养中,只有在含一定
人工种子是指外面包裹一层有机薄膜的植物胚状体。
胚状体或芽:有生命的物质结构。 人工胚乳:供胚状体维持生命力。 人工种皮:保护作用。
人工种子的优点:
1)结构完整,体积小,便于贮藏与运输,可直 接播种,易于机械化操作;
2)不受季节限制,不受环境制约,胚状体数量 多、繁殖快、有利于工厂化生产;
3) 有利于繁殖生育周期长、自交不亲合、珍贵稀 有的一些植物,也可大量繁殖无病毒材料;
石龙芮胚状体发生的过程
玫瑰心形体细胞胚
香蕉心形体细胞胚
3.2 体细胞胚的产生方式
1)直接在器官上发生
胚性愈伤组织
2) 悬浮培养细胞发生途径
3)愈伤组织发生途径 : 幼胚、胚和子叶
4)单细胞发生途径:花药培养中的小孢子发育成
4)原生质体发生途径
3.3 体细胞胚状体诱导的影响因素
1)生长素 2)其他植物生长物质的作用 3)氨源形态的影响 4)其他培养条件对胚状体发生的影响
不同胚性愈伤率小麦胚发育过程生化和显微结构特征研究
不同胚性愈伤率小麦胚发育过程生化和显微结构特征研
究
1. 引言
1.1 研究背景
小麦作为我国重要的粮食作物之一,其种植面积广泛,产量巨大。在小麦的种植过程中,经常会遇到胚性不良的情况,即部分小麦种子
胚发育不健全,影响了小麦的生长和产量。对不同胚性小麦的胚发育
过程进行深入研究,探究其生化和显微结构特征,对解决小麦胚性不
良问题具有重要意义。
目前,关于不同胚性小麦的研究还比较缺乏,特别是在胚发育过
程的生化和显微结构特征方面的探讨更是不足。本研究旨在选取不同
胚性小麦,观察其胚发育过程,分析其生化特征,研究其显微结构,
以期为解决小麦胚性问题提供科学依据和理论支持。
通过对不同胚性小麦的研究,我们可以深入了解小麦胚发育过程
中的生化和结构特征,为种植和育种工作提供重要参考,促进小麦产
量和质量的提高,推动我国农业的发展。本研究具有重要的理论和实
际意义。
1.2 研究意义
小麦是世界上最重要的粮食作物之一,其生长发育过程中胚发育
是一个至关重要的阶段。不同胚性小麦在胚发育过程中表现出不同的
特征,在实际生产中具有不同的应用价值。通过对不同胚性小麦的胚
发育过程进行生化和显微结构特征研究,可以深入了解不同胚性小麦
的生长发育规律,为进一步优化种植管理和育种选取提供科学依据。
该研究将有助于提高小麦的产量和品质,促进小麦产业的可持续发展。对不同胚性小麦的胚发育过程生化和显微结构特征进行研究具有重要
的理论和实践意义。
2. 正文
2.1 不同胚性小麦的选取
不同胚性小麦的选取是本研究的第一步。在实验中,我们选择了
具有不同胚性的小麦品种作为研究对象,包括胚性愈伤率高和胚性愈
愈伤组织的诱导形成及分化
第五章 愈伤组织的诱导、形成及分化
第一节 愈伤组织的诱导、形成及特点
一、愈伤组织的诱导和形成
愈伤组织是在离体培养条件下,经植物细胞脱分化和不断增殖所形成的无特定结构的组织。经一段时间的生长和增殖以后,在其内部出现一定程度的分化,产生出一些具有分生组织结构的细胞团、色素细胞或管状分子。
植物外植体在培养基和外界环境的作用下,经过一个复杂的过程形成愈伤组织,即: 外植体+培养基+环境
愈伤组织
愈伤组织的形成一般可分为三个时期:诱导期、细胞分裂期和细胞分化期(见图4.1)。
图4.1 愈伤组织的形成特点
1. 诱导期
愈伤组织诱导期又称启动期,是指外植体组织受外界条件刺激后,开始改变原来的分裂方向和代谢方式,合成代谢活动加强,大量合成蛋白质和核酸物质,为细胞分裂做准备。
诱导期的长短因植物种类、外植体的生理状态和外部因素而异,即使是同一种物种不同基因型同一外植体的愈伤组织,其诱导期也不同。有的植物愈伤组织诱导期只有1天(菊芋),而有的植物诱导期需要数天(胡萝卜)。刚收获的菊芋块茎的诱导期仅22 h ,但经贮藏5个月后,诱导期延长为2天。
2. 分裂期
外植体在培养基上经过离体诱导后,外层细胞开始发生分裂,细胞脱分化。愈伤组织的细胞分裂快,结构疏松,缺少组织结构,颜色浅而透明(见图4.2)。分裂期的细胞分裂局限在愈伤组织的外缘,主要是垂周分裂。
小麦幼胚 分裂期 分裂期
分化期 分化期
图4.2 小麦幼胚愈伤组织诱导分裂期与分化期
(东北农业大学小麦研究室,李文雄,曾寒冰,胡尚连等,1994)
愈伤组织进入分裂期时,外植体的脱分化因植物种类、基因型、外植体种类和生理状况而有很大差异。烟草、胡萝卜等的脱分化很容易,而禾谷类则较难;花器官脱分化较易,茎叶较难;幼茎组织脱分化较易,而成熟的老组织较难。
植物组织原理
2、影响细胞再分化因素:
从理论上讲,在离体培养条件下经过再分化可获 得各种类型的细胞、组织、器官以及再生植株。但是 目前,还不能让所有植物的活细胞都再生植株。主要 原因是: (1)不同植物种类再分化的能力差异很大; (2)对某些植物再生条件还没有完全掌握。
第二节 离体条件下植物器官发生
➢ 植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或
分裂期:外层细胞分裂,中间细胞常不分裂,形成小芯。细胞 分裂快,结构疏松,缺少结构,浅而透明。在原培养基上,细 胞必分化,及时转移,其可无限制地进行细胞分裂,维持不分 化状态。
分化期:细胞在形态和生理功能上的分化,出现形态和功能各 异的细胞。
2、愈伤组织的生长
(1)生长:诱导期后,外植体外层细胞分裂,在组织受伤表 面形成一层愈伤组织, 细胞数目迅速增多,表层细胞平均重 量下降,体积变小;降低温度,可以使细胞生长速度减慢,平 均大小可增加。
第一节 植物细胞全能性和细胞分化
植物组织培养的核心理论: 植物细胞全能性理论
(Haberlandt, 1902)。
细胞全能性概述
细胞脱分化
细胞再分化
一、植物细胞的全能性(Totipotency)
➢ 定义:1902年由Haberlandt提出,即植物体细胞 在适当的条件下,具有不断分裂和繁殖、发育成完整 植株的能力。 20世纪80年代,每一个植物细胞具有该植物的全部 遗传信息,在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传 信息,分化出植物有机体所有不同类型细胞,形成不 同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整再生植株。
第十章 植物愈伤组织
+
+
-
-
非胚性愈伤组织
non-embryogenic
+
+
+
+
callus
胚性愈伤组织发生率
embryogenic callus
78
1
0
0
generating rate(%)
马铃薯不同基因型对愈伤组织诱导的影响
2 外植体
①一般而言,分化水平较低的薄壁细胞和处于分裂的分生组织细胞 较易诱导出愈伤组织。薄壁细胞分化水平较低,有较大发育的可塑性, 其进行分裂的潜力可保持很多年,如25年树龄的椴属茎的薄壁细胞还 可以诱导形成愈伤组织。
愈伤组织形成
特点
诱导期 分裂期
改变原来的分化方向和代谢方式, 合成代谢加强,合成大量蛋白质和 核酸物质为细胞的分裂和增殖奠定 基础
外植体外层细胞开始分裂,细胞 脱分化,愈伤组织结构疏松,缺 少组织结构,颜色浅而透明
分化期
Callus表层细胞分裂逐渐停止, 而转向其内部的局部地区,并改 变分裂面的方向,出现瘤状结构 外表,Callus中可以发现维管组 织,但不形成维管系统
**硝酸钾含量较高的培养基,如B5(Gamborg等,1968)、N6(朱至清等, 1975)、SH(Schenk 和 Hildebrandt,1972),这类培养基的盐浓度也很高, 其中NH+4和PO-34是由NH4H2PO4提供。
5-愈伤组织的形成
第二十七页,编辑于星期二:二十三点 十三分。
4.2 器官分化
愈伤组织分生细胞团可进行再分化,即进行形态建成,可再 产生完整的植株。
形态建成:外植体在适宜的培养条件下经脱分化、再分化或直 接发育成各种形态完整的植物体的过程。
在愈伤组织培养物中,细胞分裂常以无规则方式发生,并产生无
•2.每个细胞平均鲜重下降。这是由于细胞鲜重的增加不如细胞数目的增加快 的缘故。
第六页,编辑于星期二:二十三点 十三分。
3.细胞体积小,内无液泡,如同根尖和茎尖的分生组织细胞特 性。
4.细胞的核和核仁增大到最大。
5.随着细胞不断分裂和组织生长,细胞的总干重、蛋白质和 核酸含量大大增加,新 的细胞壁的合成极快。
•(1)直接发生:外植体直接分化成器官的过程。(由茎尖、腋 芽、原球茎、块茎、鳞茎等器官发生)
•(2)间接发生:外植体(已分化的成熟组织)经脱分化形成愈伤
组织再分化形成器官的过程。
第二十九页,编辑于星期二:二十三点 十三分。
在组织培养中,从外植体形成器官或无性系的形态发生,有下 面两种途径:
1.器官发生途径 通过茎芽的分化形成不定芽实现,指细 胞或愈伤组织培养物,通过形成不定芽再生成植株,这是细 胞和组织培养中常见的器官发生方式。
进细胞分裂的效果不明显时,增加培养基中的氨态氮可起到明显的 促进分裂的作用;当使用细胞分裂素或降低生长素对细胞分裂的抑 制效果不显著时,增加培养基中的硝态氮或减少氨态氮,可起到显 著的抑制分裂的作用。
第四章之二愈伤组织的诱导、形成及分化
胚性细 细胞形 细胞质 核
胞
态
多
小
浓厚 大
圆球形 色深
非胚性 白色 粗糙 松散 少或无 管状 稀薄 小
non-
水渍状
无规则 色浅
embryonic
callus
五、愈伤组织培养的应用
★种质保存
★原生质体
★悬浮培养
★固定化细胞
★植株再生 ★人工种子
第二节 愈伤组织的诱导、形成及特点
一、诱导培养条件
★外植体
叶 幼胚
髓部 根
四、类型 质地:脆软、坚硬(木质化) 颜色:白色、浅黄、浅绿、黄色、绿色、
褐色、红色 表面:光滑、粗糙
脆软
坚硬
黏多糖
生根
Red
white callus Green callus Yellow callus
类型
颜色 表面 质地
胚性
浅黄 光滑 坚硬
embryonic
易碎
callus
0.028
30d
0.080 0.067 0.069 0.052
0.030
40d
0.107 0.093 0.093 0.069
0.034
50d
0.136 0.120 0.120 0.079
0.042
60d
0.171 0.149 0.15
0.093
实验二植物胚性愈伤组织诱导、胚状体的分化与高再生能力基因型的筛选
植物体细胞胚胎发生
在其发生的最早阶段就具有两极性,即根端 (胚根)和茎端(胚芽),并且与母体细胞或 外植体的维管束无直接联系 胚状体一开始就是一个完整植物的雏形,可通 过根端或类似胚柄结构从外植体或愈伤组织中 取得营养。 很容易从愈伤组织的表面脱离下来,在适宜条 件下长成一株植物。
类似于动物胚胎早期的发育
在离体培养下,植物的体细胞或性细胞被诱导产 生器官分化和再生,成为具有与母体植株相同 遗传信息的植株的能力。
植物细胞全能性的相对性
1. 不是所有基因型的所有细胞在任何条件下都具 有良好的培养反应; 2. 动、植物细胞全能性的表现程度存在明显差异。 3. 细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产 生植物个体。
遗传性状 生理状态 光照
内因
高胚状体发生基因型筛选的原理:
紫花苜蓿:异花授粉(虫媒花),2n=32 从理论上讲每一个植株为一个基因型,将每一个 植物的外植体分别培养,比较分析胚状体发生 数目的差异,从中可挑选出胚状体发生能力高 的基因型。
实验材料与用品
材料:烟草、百脉根 用品:接种器械 、超净工作台、等 培养基:添加不同有机物的培养基,重点观察 有机物对胚状体形成的影响,观察不同外植体 上胚状体的形成。
发育早期2次均等分裂 胚 胎 细 胞 发 生 胚 结 构 形 成
两种愈伤组织生理生化特性和形态结构比较
两种愈伤组织生理生化特性和形态结构比较作者:杨静慧等
来源:《天津农业科学》2014年第08期
摘要:为了解愈伤组织形成单细胞克隆体系的关键因素,以青睐苜蓿为试材,比较了两种形态的愈伤组织的生理生化指标和形态结构变化。结果表明,两种类型的愈伤组织细胞膜透性和丙二醛含量无明显差异;细胞内可溶性糖含量和过氧化物酶POD活性差异较大,其中可溶性糖含量为:松散型>巨大型,松散型是巨大型的2.09倍;POD酶活性:巨大型>松散型,巨大型是松散型的1.35倍;巨大型愈伤组织细胞较大、组织排列疏松、细胞高度液泡化、细胞质较稀薄,而松散型愈伤组织细胞较小、组织排列松散、细胞液泡较小、细胞质较浓。巨大型与松软型愈伤组织细胞的膜代谢程度相同,但松散型愈伤组织细胞中糖积累多,细胞代谢旺盛;而巨大型愈伤组织糖积累少,细胞衰老。
关键词:愈伤组织;形态结构;生理生化;酶;膜代谢
中图分类号:S551.7 文献标识码:A DOI 编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2014.08.005
Abstract: In order to learn the key factors of callus development on single cell clone,characteristics of physiology and biochemistry and morphological structure of two types of alfalfa callus was studied. The results showed that the cell membrane permeability and malondialdehyde content was same for the two types of callus; but their soluble sugar content and peroxidase activity in cells was very different, for the soluble sugar content: soft callus > huge callus, and soft callus was 2.09 times of huge callus; for peroxidase activity: huge callus > soft callus, and huge callus was 1.35 times of soft callus. Huge callus cells were larger, loosely arranged, cell vacuolization and cytoplasm was thiner than soft callus. However, soft callus cells were smaller, loosely arranged, cell vacuoles was smaller and cytoplasm was thicker than hug callus. Huge cells had the same membrane metabolic with soft cells, but soft cells had higher sugar accumulation than huge cells, and soft cells metabolism were vigorous, while huge cells were more aging.
植物组织培养第二章
植物愈伤组织的培养
愈伤组织培养是指将母体植株上的各个部分切下,形成 外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组织诱导、生长 和发育的一门技术。 一般情况下,植物组织均能诱发形成愈伤组织,由外植 体形成愈伤组织,标志着植物离体培养的开始。
四、培养条件 1、光 1)光照强度:不同植物及不同材料对光照强度要求不同。 一般情况下,植物所需的光照强度为1000-5000lx。 光照强度对培养物的增殖、器官分化、胚状体形成都有 重大影响。 2)光照长度:一般情况下,植物每日所需的光照时间为 10-16小时。 3)光质:不同波长的光对细胞分裂和器官分化有影响。 对苗再生最有利的光谱是蓝光区,根的发生则是红光区 较有利。 2、温度 不同植物要求的最适温度不同。一般园艺植物的生长适 温为:文竹17℃,百合20℃,杜鹃25℃,石刁柏 26℃,月季25-27℃,葡萄28℃,番茄28℃。
二、培养材料的生理状态
1、植物的发育年龄 2、培养器官或组织类型: 1)种子、幼胚和下胚轴易形成胚状体,茎段、叶片比较困 难; 双子叶植物形态发生常用的外植体依次为叶、茎、胚 轴、子叶等; 单子叶植物特别是禾本科植物,细胞分裂旺盛的分生 组织或器官,如叶基部、茎尖、幼胚、胚珠、幼花序轴等 是极好的外植体。 2)同一器官不同部位的组织,其再生器官能力也不同。 3)外 植体的大小对器官再生有影响。 4)不同季节来源的外植体,其形态发生的能力也有差异。 5)供体植物的生长环境也影响外植体的生理状态。
植物组织培养第二章资料
三、愈伤组织培养
(一)愈伤组织形成、生长和保持 1、愈伤组织的形成
在脱分化过程中,大多数情况下形成愈伤组织。 愈伤组织的结构往往是异质的,无明显极性,其形 成过程可分为诱导期、分裂期和分化期。
一、植物体细胞胚胎发生过程 (一)体细胞胚胎发生过程
不同种类的植物体细胞胚胎发生的主要发育阶段的划分 是不一致的,但一般可分为胚性愈伤组织诱导、体细胞胚 胎诱导、体细胞胚胎早期分化发育、体细胞胚胎成熟、体 细胞胚胎萌发和成苗五个阶段。
在双子叶植物上,体细胞胚胎发生经过原胚、球形胚、 心形胚、鱼雷形胚和成熟胚阶段。
这种情况的发生主要是遗传和生理因素所致。 前者包括染色体畸变、基因突变等;后者是细胞 或组织内激素平衡的改变或细胞对外源生长物质 的敏感性的改变。因生理因素导致的形态发生能 力下降可通过改变培养条件而得以改善。
(二)愈伤组织形态发生
愈伤组织生长过程中,开始细胞分裂局限在 外层细胞,当表面细胞逐渐减慢并停止时,内部 较深处的细胞才开始分裂,且分裂的方向也发生 改变,形成维管化组织和瘤状结构,这是愈伤组 织生长的一个共同特征。
第二章 植物组织培养的基本原理
植物细胞全能性理论是植物组织培养的核 心理论。
离体细胞具有生命的特征属性,在全能性的 基础上,提供合适的营养和环境条件,离体细 胞经历脱分化和再分化过程
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高粱不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异
作者:季艳丽程云伟陈发菊张德春周超
来源:《广西植物》2019年第12期
摘要:; 植物体细胞胚胎发生过程中伴随着复杂的生理生化变化,为进一步揭示胚性愈伤组织的再生潜力,该研究以高粱Sb19未成熟胚诱导产生的两种胚性愈伤组织和一种非胚性愈伤组织为材料,通过测定各愈伤组织中可溶性蛋白、游离脯氨酸和可溶性糖的含量,采用方差分析法对高粱体细胞胚胎发生过程中不同类型愈伤组织的生理生化指标进行了差异比较研究。结果表明:(1)高粱两种胚性愈伤组织中可溶性蛋白、游离脯氨酸和可溶性糖的含量均显著高于非胚性愈伤组织,表明胚性愈伤组织中的代谢活性高于非胚性愈伤组织,能够为体细胞胚胎发生提供更多的物质能量基础。(2)两种类型胚性愈伤组织之间生理生化差异显著,其中,Ⅱ型胚性愈伤组织中可溶性蛋白和游离脯氨酸含量均显著高于I型胚性愈伤组织,相反,Ⅱ型胚性愈伤组织中可溶性糖含量显著低于I型胚性愈伤组织,这种生理生化差异在一定程度上影响了后期的分化。该研究结果为愈伤组织的胚胎发生能力与生化代谢的关系提供理论依据。
关键词:高粱,胚性愈伤组织,非胚性愈伤组织,可溶性蛋白,游离脯氨酸,可溶性糖
中图分类号:; Q945.6文献标识码:; A文章编号:; 1000-3142(2019)12-1613-06
作者简介:季艳丽(1994-),女,湖北随州人,硕士研究生,主要从事植物遗传育种与发育研究,(E-mail)1975891532@。
Abstract:; There are complex physiological and biochemical changes in the process of plant somatic embryogenesis. In order to reveal the regenerative potential of embryogenic callus, we determined the content of soluble protein, free proline and soluble sugar in two kinds of embryogenic calluses and a non-embryonic callus which were from the induction of Sb19 Sorghum bicolor immature embryos. The differences of physiological and biochemical parameters between different types of callus in S. bicolor somatic embryogenesis were compared by variance analysis. The results were as follows:(1) The contents of soluble protein, free proline and soluble sugar in two kinds of embryogenic callus were significantly higher than that of non-embryogenic callus,which indicates that the metabolic activity in embryogenic callus is higher than that in non-embryonic callus, and embryogenic callus can provide more material energy basis for somatic embryogenesis. (2) The physiological and biochemical differences between the two types of embryogenic callus were also significant. Among them, the contents of soluble protein and free proline in Type Ⅱembryogenic callus were significantly higher than that of Type I embryogenic callus. In contrast, the content of soluble sugar in Type Ⅱ embryogenic callus was significantly lower than that of Type I embryogenic callus. We draw a conclusion that the differences of physiological and biochemical affect the differentiation on a certain degree. This study provides a theoretical basis for the relationship between embryogenic ability and biochemical metabolism of callus.
Key words: Sorghum bicolor, embryogenic callus, non-embryonic callus, soluble protein, free proline, soluble sugar
高粱(Sorghum bicolor)是世界上五大谷類作物之一,具有较强的耐旱性,能够较好地适应半干旱气候,具有比玉米更高的水利用效率(Roby et al., 2017),在食品保障和可再生能源开发中发挥着独特的作用(Mullet et al., 2014; De et al., 2017)。目前,全球粮食、能源危机日益严重,发展高粱生产,将有助于缓解这些危机。建立高效的高粱再生体系和遗传转化体系是高粱分子育种的基础。但是,高粱体细胞胚胎发生当前面临的最大问题就是胚性愈伤组织再生能力的保持,其次是基因型和褐化问题。近年来,关于高粱愈伤组织继代培养后再生能力下降的研究多有报道(Liu et al., 2015; Li et al., 2017),但是未见对其再生率下降机理的研究。同时,在对其他禾本科植物如水稻的研究中发现,随着继代次数的增加,愈伤组织形态逐渐由胚性向非胚性转化,从而导致愈伤组织胚性的丧失(都晓龙等,2016)。因此,如何使体细胞转变为具胚性能力的细胞是保持愈伤组织分化能力的关键。