肝肺综合征大鼠血细胞因子和肺血管巨噬细胞观察

合集下载

巨噬细胞极化形成的影响因素研究进展

巨噬细胞极化形成的影响因素研究进展程相朝;毛福超【摘要】巨噬细胞是生物体中宿主防御的重要调节者.为了满足机体不同的需要,巨噬细胞可以在不同刺激因子作用下转化为具有不同功能表型的状态,这个过程称为极化.不同影响因素下的静息巨噬细胞(M0)可极化形成不同的表型,促炎表型(M1)和抗炎表型(M2).极化后的巨噬细胞也可通过逆转它们的表型进一步重新编程.巨噬细胞极化和重编程在维持免疫系统的稳定状态中发挥重要作用,并参与许多疾病的发生发展过程.论文对巨噬细胞极化形成的影响因素进行了论述,为相关研究提供参考.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2019(040)006【总页数】6页(P72-77)【关键词】巨噬细胞;极化;信号通路【作者】程相朝;毛福超【作者单位】洛阳职业技术学院,河南洛阳471099;河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南洛阳471023;河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南洛阳471023【正文语种】中文【中图分类】S852.4巨噬细胞(macrophage)是机体的固有免疫细胞，在体液免疫和细胞免疫中均发挥着不可替代的作用。

巨噬细胞具有很强的可塑性和功能异质性，当机体环境发生改变时，为了满足机体的需求，巨噬细胞将发生极化。

巨噬细胞在不同因素刺激下产生的极化类型也不相同，根据极化后巨噬细胞的表面标志物、其本身细胞因子和趋化因子的分泌以及转录因子的不同，将巨噬细胞分为两种极化类型，即经典活化巨噬细胞(classically activated macrophage，M1)和替代活化巨噬细胞(alternatively activated macrophage，M2)。

M1的激活可由γ干扰素(i nterferon γ，IFN-γ)和Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)等介导，活化后的M1可分泌大量的促炎因子及趋化因子和高表达诱导型一氧化氮合酶(inductible nitric oxide synthase，iNOS)及活性氧(reactive oxygen species，ROS)，释放大量NO和ROS，从而杀伤细菌、病毒和真菌感染的主要物质。

肝肺综合征的诊断与治疗

现出肺内血管收缩功能降低，可能发生ＨＰＳ者达４％～１９％。ＨＰＳ多见于肝硬化而少见于肝外门静
脉阻塞者。ＨＰＳ诊断的成立还应具备： ① 患者原先可能无肺部或心脏的基础性疾病； ②不论是否存在低氧血症，氧分压（＜７０ｍｍＨｇ）降低是ＨＰＳ的可靠证据，
术语由Ｋｅｎｎｅｄｙ和Ｋｎｕｄｓｍ等于１９７７年首次提出，由于缺乏统一的诊断标准，文献报道慢性肝病患者中
ＨＰＳ的发生率为４％～２９％…，可发生于各年龄段，无
性别差异。在等候肝移植的患者中，１３％～４７％患者被证实存在肺内血管扩张。约３０％的肝硬化患者表
症肝炎、Ｗｉｌｓｏｎ病、Ｂｕｄｄ—Ｃｈｉａｒｉ综合征、胆道闭锁、
１．２血液分流
尸检发现肺实质及胸膜上有很蛛痣），肺内毛细血管及前毛细血管的扩张突出，特别是在肺基底部更为明显，
低及肺内血管阻力的降低。此外，组胺、血管活性肠肽（ＶＩＰ）、前列腺素、降钙素、Ｐ物质、胰高血糖素、心房尿钠因子等均被认为是肺血管系统的血管扩张因素。实验性ＨＰＳ证实，血管内有巨噬细胞贮积，这些细胞可产生大量的ｉＮＯＳ及亚铁血红素加氧酶（ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ＨＯ），通过ｉＮＯＳ衍生的ＮＯ及ＨＯ衍生的ＣＯ，进一步促进血管的扩张。

噬血细胞综合征

噬血细胞综合征噬血细胞综合征(hemophagocytic syndrome，HPS），是一组骨髓、脾脏、淋巴结等造血组织中良性、反应性增生的组织细胞吞噬自身血细胞而引发的一系列临床病症。

临床表现为持续高热，肝、脾、淋巴结大，外周血细胞减少，肝功能异常，凝血功能障碍等。

1979年首先由Risdull等报告，多发于儿童。

可由感染病毒，或是因为用药不当,以及体内有肿瘤(对于小孩来说肿瘤几率低）等诱发，由于婴幼儿自身抵抗能力弱，调节不当，致使单核巨噬细胞增生而且对自身血细胞发生攻击并消除，使得婴儿贫血导致死亡。

嗜血细胞综合征 - 分类原发性HPS,或称家族性HPS,为常染色体隐性遗传病，其发病和病情加剧常与感染有关.继发性HPS分为感染相关性HPS（infection—associatedhemophagocytic syndrome,IAHS），此型多与病毒感染有关，由病毒引起者称病毒相关性HPS （virus-associated hemophagocyticsyndrome，VAHS)；由肿瘤引起者称肿瘤相关性HPS（malignancy-associated hemophagnocytic syndrome，MAHS）。

嗜血细胞综合征 - 流行病学本病以儿童多见，男性多于女性。

儿童原发性HLH（FHL）的年发病率约为0.12/1O 万,80%的患者在2岁以前发病.继发性HPS在任何年龄均可发病.所以，一般认为2岁前发病者提示的原发性可能性大，8岁后发病者则提示继发性的可能性大，2－8岁发病者则根据临床表现进行判断.在日本和亚洲国家发病率较高。

本病来势凶险，东方患者的死亡率约为45％。

嗜血细胞综合征 - 病因巨噬细胞图册HPS可以看作细胞因子病（cytokine disease），或巨噬细胞激活综合征.作为免疫应答的反应性T细胞（Th1和Tc）和单核吞噬细胞过度分泌淋巴、单核因子〔巨噬细胞增生的诱导因子（PIF）〕激活巨噬细胞。

肝肺综合征病理发生机制的研究进展

［文献标志码】Ａ
【文章编号】１００８ — ８１９９（２０１３）１０ — １０９２－０４
Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｈｅｐａｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＨＰＳ）ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｓｅｒｉｏｕｓｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆａｃｕｔｅｏｒｃｈｒｏｎｉｃｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ，ｗｈｉｃｈｉｓ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｈｅｐａｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ；Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ；ＮｉｔｒｉｃｏｘＩｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｎｄｏｔｏｔｅｍｉａ；Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
０引
言
１ＨＰＳ的定义
ＨＰＳ于１９７７年由Ｋｅｎｎｅｄｙ和Ｋｎｕｄｓｏｎ第１次正式提出后，主要以“ 肝病一肺微血管扩张．动脉氧合异常 ” 为三联征的临床表现。目前证实，ＨＰＳ也发生在无门静脉高压的急慢性肝炎或有门静脉高压但

噬血细胞综合症

传染性单核细胞增多症
恶性组织细胞病（MH）
本病无血脂改变，外周血或骨髓中可发现异常组织细胞：外周血、骨髓、淋巴结、肝、脾等组织中可找到恶性组织细
胞，支持MH；恶性组织细胞对乙酸萘酚脂酶、酸性磷酸酶染色阳性，免
疫组化是细胞内链及链均阳性； HPS的中性粒细胞碱性磷酸酶活性可增高； MH血清铁蛋白和血管紧张素转换酶增高，组化染色见巨噬
脑脊液:压力升高，细胞数增多，5-20×106/L，但以淋巴细胞为主，可有单核样细胞，蛋白升高，但也有脑炎症状明显而脑脊液正常者。
免疫学检查:家族性HPS常有自然杀伤细胞及T细胞活性降低。 ANA、Coomb’s test可阳性
实验室检查
骨髓检查：骨髓多数增生活跃，在骨髓涂片的尾部可发现单独存在或成团分布的噬血细胞性组织细胞增生，阳性率为75％。但有少数病例早期仅表现为增生活跃，并无嗜血细胞，病程晚期出现增生低下。
与其他疾病鉴别—
与全血细胞减少相关疾病鉴别：恶性组织细胞病：骨髓见异常组织细胞，多无血脂改变。再生障碍性贫血：肝脾不大，骨髓无噬血细胞。白血病：骨髓及外周血可见原始细胞其他疾病：传染性单核细胞增多症败血症类风湿关节炎系统性红斑狼疮等。以上疾病均可合并继发HLH疾病，需鉴别。
4. 高甘油三脂血症和 ( 或 ) 低纤维蛋白原血症，甘油三脂 ≥3.0mmol/L或纤维蛋白原＜1.5g/L; 5.骨髓、肝、脾、淋巴结组织细胞非恶性增生伴嗜血细胞现象; 6.NK细胞活性降低或完全缺少; 7.血清铁蛋白≥500mg／L； 8.可溶性CD25 (IL-2受体)≥2400u／ml；
细胞中大量抗核蛋白酶；部分MH含有特异性染色体组织细胞增生症
LCH发病是以婴儿多见，2岁以上少见。表现为发热、皮疹、肝脾淋巴结肿大、肺部浸润、N-S受

肝硬化大鼠肺脏的病理变化

巨噬细胞和中性粒细胞聚集大量促炎介质tnfail一1il一6il一8inos血小板激活因子白三烯等和抗炎介质可溶性tnfa受体il一4il一10il一1抑制因子ill受体拮抗剂等的释放当促炎和抗炎诸因素取得平衡时肺组织的炎性反应基本得到控制
第２卷第１３期２００９证２月
长治医学院学报
本机制。
关键词
中图分类号
肝硬化；内毒素；肝肺综合征
Ｒ６３３文献标识码Ａ文献编号１００６一（０９０ —０７４２０）１０ —０
ＰａｈｏｏｉａｔｌｇｃｌＣｈａｅｆＬｕｎｔ ⅡｌＬｉｅｒｈｓｓｎｇｓｏｎｇｉＲａｓｗｉｖｒＣｉｒｏｉ
ＴａａｘａＪａＪａｔｏｉｉｇｕｎｔ１ｉｎＸｉｏｉ，ｉｉｎａ，Ｊｎｑａ，ｅ．Ｊａ
ＤｐｒｅｔｆＰｔｏｈｓｌｙＣａｇｈＭｅｉｌｏｅｇｃＣｌ
ｅｉｅｔｃｅｅｉｈｔｔ．ｈｙｗｒｆｒｅｘｃｒａｄｉｃｒｏｃｒｓａｔｊｃｎｉｎｄｓｖｎｌｉｒａｄｉｃｏｃｒｓＴｅｅｅｕｔｒａｅｂｔｉｈｔａｆｒｎｅｔｇａｖｏｅｏｄｙｎｓｎｒｉａｈｅｅｎｒｉｔｅｉｉｇｅｆ
仅在维持内环境稳定、保证机体各系统器官功能的
正常活动中具有重要意义，同时也是最易招致致病
参考文献
ｌｊＹ，ｕａＨ，ｍｇＸ，ｅａ．Ａｔｈｏｂｉｅｅｔｏｐｏｎ．ｌｅＪＤｍＹａｔ１ｎｔｍｏｓｆｃｆａｉｉｒｓｆ

肝损伤与肺损伤相互影响的机制研究进展

肝损伤与肺损伤相互影响的机制研究进展王轶铭，蒙臣，王雪，王思露，曾文，王贤裕湖北医药学院附属医院（十堰市太和医院），湖北十堰442000摘要：肝和肺的相互影响在临床工作中非常常见，它们之间的关联性在许多疾病中都有体现。

研究发现，肝损伤在一些疾病中可以导致肺损伤，如肝肺综合征、酒精相关性肺炎以及肝源性脓毒血症等；肺损伤在一些疾病中也可以导致肝损伤，如急性呼吸窘迫综合征、新型冠状病毒肺炎、慢性阻塞性肺疾病等。

研究肝损伤与肺损伤相互影响的可能机制，或可为临床工作中更好地治疗患者提供一些思路。

关键词：肝损伤；肺损伤；相互影响；肝肺综合征；急性呼吸窘迫综合征doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2021.05.031中图分类号：R-1文献标志码：A文章编号：1002-266X（2021）05-0111-04现代医学研究表明，人类所面对的疾病是一个多阶段、多组织器官共同参与的过程。

该过程不仅存在单个靶器官内细胞间的相互作用，更涉及到多器官之间的相互作用［1］。

因此，疾病的发生虽然存在主要病灶，但其临床表现却是机体多种器官之间相互作用的结果。

这就使得在治疗某一种疾病时，不仅要关注疾病本身，还需要关注其并发症。

肝和肺是人体中非常重要的器官，肝在人体代谢和免疫稳态中起核心作用，负责物质的转化、存储、能量代谢等；肺则主要负责人体与外界的气体交换，维持人体的生命活动。

正常状态下，肝与肺互相调节，相辅相成，共同维持体内环境的稳态；当疾病发生时，肝与肺又可彼此影响，参与疾病的病理生理过程并发挥各自的作用。

现将肝损伤与肺损伤相互影响的可能机制综述如下。

1肝损伤引起肺损伤1.1肝肺综合征（HPS）HPS是在慢性肝病和（或）门脉高压的基础上，继发肺内血管异常扩张、气体交换功能障碍、动脉血液氧合作用异常，进而引发低氧血症等病理生理改变，是肝脏疾病终末期的严重肺部并发症［2］。

目前关于HPS发生发展的研究较多，且其相关机制大多和肝损伤与肺损伤的相互影响有关。

巨噬细胞极化及IL-6、IL-10对COPD大鼠肺血管重塑的作用机制研究

巨噬细胞极化及IL -6、IL -10对COPD 大鼠肺血管重塑的作用机制研究李丽,郝立姣,张志华,李靖,王润钰,李建强,赵卉摘要:目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD )大鼠肺组织中极化巨噬细胞形态㊁表面抗原㊁炎性因子的变化,研究巨噬细胞表型变化与炎性因子改变在COPD 病程中对肺血管㊁肺动脉压和心脏影响的作用机制㊂方法将清洁级雄性SD 大鼠24只随机分为对照组㊁COPD 组,每组12只㊂通过香烟暴露制作COPD 大鼠模型,并通过苏木精-伊红(HE )染色检测COPD 大鼠肺泡组织的形态变化,确定COPD 模型制作成功;通过免疫荧光与免疫组化检测巨噬细胞表面CD 68㊁CD 206㊁诱导型一氧化氮合酶(iNOS )等抗原变化;通过Western Blot 检测相应巨噬细胞的表面抗原表达情况㊂通过ELISA 检测大鼠血液中相应炎性因子的变化㊂结果 COPD 大鼠肺泡组织与正常大鼠肺泡组织相比,结构发生明显变化;与对照组比较,COPD 组巨噬细胞表达增多(P <0.05),特征性表面抗原iNOS ㊁CD 206㊁CD 68表达升高(P <0.05);血液中相关炎性因子白介素-6(IL -6)表达升高(P <0.05),白介素-10(IL -10)表达反而降低(P <0.05)㊂结论 COPD 大鼠巨噬细胞表现出明显的极化现象,相应表面抗原发生显著改变,并且导致相关炎性因子发生变化㊂关键词:慢性阻塞性肺疾病;巨噬细胞;极化;炎症因子;诱导型一氧化氮合酶;白介素-6;白介素-10中图分类号:R 329 文献标识码:A d o i :10.12102/j .i s s n .1672-1349.2019.13.014 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmona -ry disease ,COPD )是一种可逆的以进行性气流受限和肺实质的破坏为特征的慢性炎症性疾病㊂到2020慢性阻塞性肺疾病将成为全球第三大死因[1],并将成为第五大致残病因[2]㊂慢性缺氧㊁高碳酸血症和酸中毒可通过引起COPD 病人肺血管重塑的广泛收缩导致肺动脉高压㊂慢性炎症刺激还可导致血管内皮和平滑肌增生以及肺血管结构变化,例如狭窄㊁闭塞和纤维化导致进一步的肺血管重塑㊂在COPD 晚期,最常见的心血管并发症是肺动脉高压,进一步导致慢性肺心病㊁右心衰竭,甚至全心衰竭㊂最近,一些研究表明肺血管重塑和肺动脉高压是COPD 病人引发肺心病的最关键因素[3-4]㊂因此,早期COPD 肺动脉高压和肺血管重塑的缓解可以延缓心血管并发症的发生,但用于治疗由COPD 诱导的肺动脉高压的靶向药物很少㊂目前为止,COPD 的发病机制尚不清楚㊂已知吸烟㊁遗传因素㊁呼吸道感染和蛋白酶失衡与COPD 的发病机制密切相关㊂吸入气体或物质会引起肺部的氧化应激,破坏蛋白酶和抗蛋白酶之间的平衡,最终导致炎症,这是COPD 发病机制中最重要的因素之一㊂在呼吸道内,慢性暴露于刺激物,特别是香烟的刺激会激活炎性细胞同时激活肺泡巨噬细胞[2]㊂活化的巨噬细胞在肺微环境中释放炎性细胞因子和趋化因子,诱导肺部慢性炎症,黏液增多,最终导致气道重塑和阻塞,基金项目山西省国际科技合作项目(No.2015081033);山西省回国留学人员科研资助项目(No.2015-103);山西省卫生计生委科研课题(No.2017067);山西医科大学第二医院新技术新项目(No.201707)作者单位山西医科大学第二医院(太原030001)通讯作者赵卉,E -mail :zhaohui001@ 引用信息李丽,郝立姣,张志华,等.巨噬细胞极化及IL -6㊁IL -10对COPD 大鼠肺血管重塑的作用机制研究[J ].中西医结合心脑血管病杂志,2019,17(13):1976-1980.造成肺泡和支气管损伤形成肺气肿[3,5-6]㊂巨噬细胞接受炎症因子刺激逐渐极化为经典活化巨噬细胞(M1)和选择性活化巨噬细胞(M2)㊂其中M1高表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS )[4],M2高表达甘露糖受体(CD 206)[7]㊂随着COPD 病程严重程度的增加,M1和M2的比例逐渐增加[8-9]㊂Lu 等[10]研究发现,肺气肿小鼠模型CD 68+气道巨噬细胞表达数量增加,这种巨噬细胞没有遵循经典的M1/M2分型㊂可见巨噬细胞表面抗原的变化与COPD 疾病的严重程度密切相关,并且巨噬细胞的主要功能之一是趋化因子的分泌,这一功能直接影响了炎症因子的分泌[11]㊂故可通过观察香烟暴露制作的COPD 大鼠肺组织的形态变化以及相关抗原㊁炎性因子的表达变化,探讨巨噬细胞在COPD 肺血管重塑和肺动脉高压发生发展的相关机制,为肺源性心脏病提供新的研究策略㊂1 材料与方法1.1 实验动物及分组清洁级雄性SD 大鼠24只(山西医科大学实验动物中心提供),动物合格证编号SXYK (晋)2015-0001,体重(200ʃ20)g ,鼠龄10周㊂将大鼠随机分为对照组㊁COPD 组,每组12只㊂建立COPD 大鼠模型,每日将大鼠置于自制染毒箱内,暴露于16支香烟中2次(对照组大鼠也置于染毒箱内做伪暴露),每次30min ,2次之间相隔不少于4h ;开始燃烧8支香烟,随后每次4支香烟,每支香烟燃烧约12min ,换烟间歇3min ㊂COPD 组吸烟3个月㊂1.2 实验试剂及仪器芙蓉牌香烟(湖南中烟工业有限责任公司,每支含尼古丁1.0mg ㊁焦油12mg );iNOS (ab15323)㊁CD 206(ab64693)㊁CD 68(ab955)购自Abcam (美国);抗β-actin 抗体㊁总蛋白提取试剂盒㊁BCA 蛋白浓度检测试剂盒购自武汉博士德生物公司;免疫组化试剂盒㊁辣根过氧化物酶标记的Ⅱ抗㊁DAB显色剂购自北京中杉金桥生物公司;Western Blot化学发光剂购自江苏南通柯侎克生物科技公司;蛋白电泳系统和ChemiDoc XRS+凝胶成像仪购自Bio-Rad;Lionheart FX智能活细胞成像分析系统购自美国BioTek;ASP6025型脱水机购自德国Leica;5235型石蜡包埋机购自日本Sakura;CP225D电子分析天平购自德国Sartorius;Scope A1型显微成像系统购自德国ZISS;BD368498SSTII分离胶促凝管;ELISA试剂盒购自E-EL-R0015c[白介素-6(IL-6),Elab-science];E-EL-R0016c[白介素-10(IL-10),Elab-science]㊂1.3方法1.3.1组织标本的留取将对照组和COPD组麻醉后生理盐水灌流处死,将气管与双肺暴露,将左肺取出,OCT冰冻切片包埋剂包埋,冰冻切片后,4%多聚甲醛[含0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)]中固定,常规石蜡包埋㊂将右肺取出置于液氮中速冻,用于Western Blot检测㊂1.3.2肺组织苏木精-伊红(HE)染色4%多聚甲醛灌流固定肺组织,再常规浸泡于此固定液中72h,石蜡包埋㊂切成6μm厚度的切片㊂烤片后,脱蜡㊁水化,苏木精染色5min,盐酸酒精分化数秒,氨水浸泡15 min,伊红染色2min,蒸馏水冲洗,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封片㊂1.3.3肺组织免疫组化染色取石蜡包块切片,厚度5μm,二甲苯㊁乙醇脱蜡至水,用3%H2O2封闭10 min,高压抗原修复2.5min,冷却至室温后滴加封闭液㊂兔抗iNOS㊁兔抗CD206用抗体稀释液稀释(1ʒ250),4ħ过夜㊂滴加相应二抗,DAB显色,阳性结果为棕黄色㊂正置显微镜拍照,Image-Pro Plus6.0图像分析软件分析㊂1.3.4肺组织免疫荧光共染取冰冻组织切片,厚度5μm,丙酮固定10min,将切片置于0.1%Triton X-100溶液中10min破膜,磷酸盐缓冲溶液(PBS)清洗3次;将切片置于湿盒中,滴加5%羊血清封闭液室温孵育30min,去血清;分别滴加一抗:小鼠抗CD68㊁兔抗iNOS㊁兔抗CD206;4ħ过夜,PBS冲洗3次,每次10 min;滴加荧光二抗:山羊抗小鼠FITC㊁山羊抗兔RBIC,室温放置1.5h;PBS洗3次,每次10min;DAPI 工作液滴加于切片上,染色10min;PBS清洗10minˑ3次,荧光封片剂封片,Lionheart FX智能活细胞成像分析系统获取图像㊂1.3.5Western Blot实验于液氮中取出大鼠肺组织,用RIPA(P0013B,碧云天)提取大鼠肺组织总蛋白质,制备成50μL蛋白上样缓冲液(1μg/μL)用于Western印迹㊂将蛋白质样品进行变性(95ħ5min)处理,制成待测样本㊂用10%伯乐免染胶分离不同分子量大小的蛋白质,并转移到PVDF膜检测㊂膜在5%脱脂牛奶中封闭,兔抗iNOS㊁CD206按1ʒ500稀释,β-actin按1ʒ1000稀释,4ħ孵育过夜,二抗1ʒ7000稀释,室温孵育2h㊂使用ChemiDoc XRS+凝胶成像仪成像并进行半定量分析㊂1.3.6ELISA实验实验大鼠腹腔注射7.5%的水合氯醛(1mL/kg)进行麻醉㊂将大鼠的四肢和头部按仰卧姿势固定,使用1mL注射器进行心脏采血,静置于促凝管中30min后,1500r/min㊁4ħ离心10min,取上清液液氮保存㊂在各孔中加入标准品和样品各100μL,37ħ孵育90min;倒去孔内液体,加入100μL生物素化抗体工作液,37ħ孵育60min;洗涤3次;加入100μL酶结合物工作液,37ħ孵育30min;洗涤5次;加入90μL 底物溶液,37ħ孵育15min;加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD值㊂建立标准曲线,进行计算㊂1.4统计学处理使用SPSS24.0软件进行统计分析㊂计量资料用均数ʃ标准差(xʃs)表示,方差齐时,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验;方差不齐时,两两比较采用Mann-Whit-ney U检验,多重检验校正采用Bonferroni校正㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1COPD大鼠肺组织病理变化与对照组相比, COPD组大鼠肺泡结构紊乱,支气管肺内出现以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,支气管壁杯状细胞数目增多,腺体增生肥大,部分肺泡出现破裂㊂详见图1㊂2.2大鼠肺组织中巨噬细胞M1㊁M2型极化免疫荧光显示COPD组大鼠肺组织中M1(CD68+iNOS+)㊁M2(CD68+CD206+)型巨噬细胞数量较对照组增加㊂通过对肺组织免疫组化的灰度值分析,COPD组大鼠M1型及M2型巨噬细胞较对照组明显升高(P<0.05)㊂详见图2~图4㊂2.3大鼠肺组织中M1㊁M2型巨噬细胞相关蛋白表达变化Western blot结果显示,与对照组相比,COPD 组大鼠iNOS和CD206蛋白水平明显升高(P<0.05)㊂详见图5㊂2.4大鼠血液中炎性因子IL-6㊁IL-10表达变化ELISA结果显示,与对照组相比,COPD组IL-6含量显著升高(P<0.05),IL-10含量则显著下降(P<0.05)㊂详见图6㊂图1两组大鼠肺组织HE 染色A图中蓝色荧光标记细胞核,绿色荧光标记CD68抗原,红色荧光标记iNOS抗原;B图中蓝色荧光标记细胞核,绿色荧光标记CD68抗原,红色荧光标记CD206抗原图2两组大鼠肺组织免疫荧光共染比较图3两组大鼠肺组织免疫组化染色结果图4两组大鼠肺组织表面抗原iNOS、CD206比较3讨论COPD是由于有毒颗粒或气体(主要是烟草)在呼吸道内造成慢性炎症增加的一类以气流受限为特征的疾病㊂最近几项研究表明,肺动脉高压和肺血管重塑是COPD发展成肺源性心脏病最重要和最关键的环节[12]㊂因此,控制肺部血管重塑和肺动脉高压诱导COPD对于延缓其心血管并发症很重要㊂既往研究表明,缺氧㊁炎症和其他刺激可以导致支气管和肺血管的损伤和修复过程一次又一次地发生,最终将导致肺血管重塑及肺源性心脏病[13]㊂在COPD与气道和肺实质的慢性炎症中,香烟烟雾是激活固有免疫系统细胞的最初触发器㊂对COPD病人肺组织和气道分泌物的研究表明,固有免疫系统和适应性免疫系统的细胞数量增加和活化发生了变化[14]㊂它以肺泡巨噬细胞㊁中性粒细胞㊁T淋巴细胞和来源于循环的固有淋巴细胞增加为特征[3]㊂其中巨噬细胞是构成固有免疫系统细胞的异质群体[15],可吞噬和杀死摄入的微生物㊂除此之外,可产生许多促炎抗炎介质和效应分子,因此巨噬细胞在功能上不仅能促进炎症和组织损伤,也能通过释放一系列抗炎介质以及通过胞吞作用清除凋亡细胞来控制和消除炎症,修复损伤[16]㊂研究巨噬细胞以及相关联的炎症因子对于COPD的研究具有非常重要的作用㊂在肺组织中主要有3种巨噬细胞,分别为支气管巨噬细胞(BM)[17]㊁间质巨噬细胞(IM)和肺泡巨噬细胞(AM)[18]㊂其中图5Western Blot检测大鼠肺组织iNOS㊁CD206图6两组大鼠血液中IL-6㊁IL-10含量比较AM被认为是在协调与之相关的炎症事件中起着关键作用,与COPD的病理生理密切相关[19-20]㊂可塑性是AM巨噬细胞的一个明显特征,可分为两个亚群,其中M1保护宿主抵御外源微生物,抗肿瘤,产生大量炎症因子如IL-6㊁肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等,激活抗微生物防御机制,包括有助于杀死入侵生物体的氧化过程和抗肿瘤等[21]㊂与M1功能不同,M2呈现出抗炎特征,与碎片清除和组织修复有关[22]㊂M2可产生大量IL-10㊁转化生长因子-β(TGF-β)㊂特点是高表达CD206[7]㊂香烟等外部刺激气体会导致COPD病人巨噬细胞极化,M1/M2表面抗原表达增加,炎性因子增多㊂但也有文献报道,香烟烟雾使COPD吸烟者的M1巨噬细胞相关基因表达显著下调,而不是上调[8],有趋向M2表达的趋势㊂同样,有些研究也发现COPD病人中,与戒烟者相比,吸烟者的M2巨噬细胞减少,与COPD病人戒烟及巨噬细胞抗炎表型的极化有关[23]㊂以上结果表明,吸烟可引起肺部免疫反应的复杂抑制,包括巨噬细胞激活和宿主防御功能的失活以及组织重塑的发展[24]㊂在病程的发展过程中M1/M2型巨噬细胞在COPD中表达增高还是降低是不断变化的,需要进一步细化研究㊂香烟烟雾刺激制作的COPD大鼠肺组织经过HE染色表明,COPD组大鼠肺气肿明显,肺间质淋巴细胞㊁中性粒细胞浸润明显,还存在支气管壁大量淋巴细胞增生㊁细支气管管壁平滑肌增生㊁管壁平滑肌部分断裂㊁杯状细胞增生等病理改变㊂证实熏烟暴露构建肺气肿大鼠模型形成㊂在此基础上,对COPD大鼠的肺组织进行免疫组化实验,分析可知,iNOS(M1型巨噬细胞表面特征性抗原)和CD206(M2型巨噬细胞表面特征性抗原)表达与正常肺组织AM细胞相比显著升高㊂免疫荧光实验表明,CD68的表达也同时升高㊂Western Blot实验也证明了这个变化㊂说明有香烟烟雾刺激的COPD发展到肺组织损伤㊁结构改变,炎症细胞浸润,支气管壁杯状细胞数目增多这一阶段时,巨噬细胞可塑性增强㊁极化显著㊁分型复杂㊂与巨噬细胞M1/M2极化抗原表达变化不统一,相应的与此相关的炎性介质表达也不一致㊂ELISA结果显示IL-6在COPD大鼠模型血液中表达更多㊂这可能与此阶段COPD 病人T细胞㊁巨噬细胞以及中性粒细胞的数量明显增加㊁浸润现象明显有关㊂上述这些可以在支气管内诱导产生释放多种细胞因子如IL-6㊁TNF-α等[25]㊂与前述不同的是,虽然M2可产生IL-10,但是ELISA结果表明,COPD大鼠血液中的IL-10含量显著低于正常大鼠㊂这可能是由于IL-10是一种细胞的抗炎因子,主要由机体的单核细胞和淋巴细胞产生和分泌,属于如IL-6㊁肿瘤坏死因子家族等细胞因子合成的抑制性因子[26]㊂在此阶段,大鼠模型的炎症因子变化与人群COPD炎症因子变化趋势相似,故模型可以在一定程度上模拟人COPD疾病的发生发展过程㊂综上所述,在香烟诱导产生的COPD大鼠模型中,肺组织已发生实质性改变,炎症反应明显;巨噬细胞可塑性增强,极化现象明显;可用iNOS㊁CD206以及CD68作为检测指标;结合血液中IL-6升高,IL-10含量减少,可共同为COPD的诊断提供依据,大量的研究证据表明,巨噬细胞被募集到受损的血管部位,进一步产生活性氧,分泌炎症因子,促进血管细胞的免疫激活㊁增殖和迁移㊂这种正反馈和相互作用的机制造成恶性循环,加速炎症反应随后的血管重塑以及更严重的肺源性心脏病,这些结果均提示,炎症反应在巨噬细胞参与COPD疾病的发展过程中发挥着巨大而复杂的作用,两者相结合的研究,可以为进一步解释COPD 及并发症的发展机制以及开发新的治疗策略提供依据㊂参考文献:[1]NURWIDYA F,DAMAYANTI T,YUNUS F.The role of innate andadaptive immune cells in the immunopathogenesis of chronic ob-structive pulmonary disease[J].Tuberc Respir Dis(Seoul),2016,79(1):5-13.[2]LOZANO R,NAGHAVI M,FOREMAN K,et al.Global and regionalmortality from235causes of death for20age groups in1990and2010:a systematic analysis for the Global Burden of DiseaseStudy2010[J].Lancet,2012,380(9859):2095-2128.[3]PAN Z,YU H,LIAO J L.Probing cellular and molecular mecha-nisms of cigarette smoke-induced immune response in the pro-gression of chronic obstructive pulmonary disease using multi-scale network modeling[J].PLoS One,2016,11(9):e0163192. [4]LIU Y C,ZOU X B,CHAI Y F,et al.Macrophage polarization in in-flammatory diseases[J].Int J Biol Sci,2014,10(5):520-529. [5]BARNES P J.Inflammatory mechanisms in patients with chronicobstructive pulmonary disease[J].J Allergy Clin Immunol,2016,138(1):16-27.[6]BARNES P J.Cellular and molecular mechanisms of chronic ob-structive pulmonary disease[J].Clin Chest Med,2014,35(1):71-86.[7]SMITH T D,TSE M J,LIU W F,et al.Regulation of macrophagepolarization and plasticity by complex activation signals[J].Inte-gr Biol(Camb),2016,8(9):946-955.[8]SHAYKHIEV R,KRAUSE A,SALIT J,et al.Smoking-dependentreprogramming of alveolar macrophage polarization:implicationfor pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease[J].JImmunol,2009,183(4):2867-2883.[9]CHEN H,COWAN M J,HASDAY J D,et al.Tobacco smoking in-hibits expression of proinflammatory cytokines and activation ofIL-1R-associated kinase,p38,and NF-kappaB in alveolar macro-phages stimulated with TLR2and TLR4agonists[J].J Immunol,2007,179(9):6097-6106.[10]LU J J,XIE L H,LIU C,et al.PTEN/PI3k/AKT regulates macro-phage polarization in emphysematous mice[J].Scand J Immu-nol,2017,85(6):395-405.[11]MURUGAN V,PECK M J.Signal transduction pathways linkingthe activation of alveolar macrophages with the recruitment ofneutrophils to lungs in chronic obstructive pulmonary disease[J].Exp Lung Res,2009,35(6):439-485.[12]JO Y S,PARK J H,LEE J K,et al.Risk factors for pulmonary arte-rial hypertension in patients with tuberculosis-destroyed lungsand their clinical characteristics compared with patients withchronic obstructive pulmonary disease[J].Int J Chron ObstructPulmon Dis,2017,12:2433-2443.[13]ANDERSEN K H,ANDERSEN C B,GUSTAFSSON F,et al.Pul-monary venous remodeling in COPD-pulmonary hypertensionand idiopathic pulmonary arterial hypertension[J].Pulm Circ,2017,7(2):514-521.[14]SHAYKHIEV R,CRYSTAL R G.Innate immunity and chronic ob-structive pulmonary disease:a mini-review[J].Gerontology,2013,59(6):481-489.[15]MURRAY P J,WYNN T A.Protective and pathogenic functions ofmacrophage subsets[J].Nat Rev Immunol,2011,11(11):723-737.[16]MANTOVANI A,BISWAS S K,GALDIERO M R,et al.Macrophageplasticity and polarization in tissue repair and remodelling[J].The Journal of Pathology,2013,229(2):176-185.[17]MONIUSZKO M,BODZENTALUKASZYK A,KOWAL K,et al.Bronchial macrophages in asthmatics reveal decreased CD16expression and substantial levels of receptors for IL-10,but notIL-4and IL-7[J].Folia Histochem Cytobiol,2007,45(3):181-189.[18]FATHI M,JOHANSSON A,LUNDBORG M,et al.Functional andmorphological differences between human alveolar and intersti-tial macrophages[J].Experimental and Molecular Pathology,2001,70(2):77-82.[19]BRIELAND J K,JONES M L,CLARKE S J,et al.Effect of acuteinflammatory lung injury on the expression of monocyte che-moattractant protein-1(MCP-1)in rat pulmonary alveolar macro-phages[J].Am J Respir Cell Mol Biol,1992,7(2):134-139. [20]JIANG Y L,BELLER D I,FRENDL G,et al.Monocyte chemoat-tractant protein-1regulates adhesion molecule expression andcytokine production in human monocytes[J].The Journal of Im-munology,1992,148(8):2423-2428.[21]HUANG W C,CHAN M L,CHEN M J,et al.Modulation of macro-phage polarization and lung cancer cell stemness by MUC1anddevelopment of a related small-molecule inhibitor pterostilbene[J].Oncotarget,2016,7(26):39363-39375.[22]HUANG C B,ALIMOVA Y,EBERSOLE J L.Macrophage polariza-tion in response to oral commensals and pathogens[J].Patho-gens and Disease,2016,74(3):ftw011.[23]KUNZ L I,LAPPERRE T S,SNOECK-STROBAND J B,et al.Smoking status and anti-inflammatory macrophages in bron-choalveolar lavage and induced sputum in COPD[J].RespiratoryResearch,2011,12(1):34.[24]CHANA K K,FENWICK P S,NICHOLSON A G,et al.Identificationof a distinct glucocorticosteroid-insensitive pulmonary macro-phage phenotype in patients with chronic obstructive pulmonarydisease[J].Journal of Allergy and Clinical Immunology,2014,133(1):207-216.[25]KIM S E,THUY T T T,LEE J H,et al.Simvastatin inhibits induc-tion of matrix metalloproteinase-9in rat alveolar macrophagesexposed to cigarette smoke extract[J].Experimental and Molec-ular Medicine,2009,41(4):277.[26]MOLEN T V D,MIRAVITLLES M,KOCKS J W.COPD manage-ment:Role of symptom assessment in routine clinical practice[J].International Journal of COPD,2013,8(default):461-471.(收稿日期:2018-11-09)(本文编辑郭怀印)。

肝肺综合征PPT课件

初步诊断：
慢加急性肝衰竭肝硬化失代偿期门脉高压腹水脾大脾亢？食管胃底静脉曲张自发性腹膜炎？
肺部感染？败血症戊肝病毒感染右侧胸腔积液待查
结核？肿瘤？
诊疗方案：
特级护理，心电监护，面罩吸氧。右侧胸腔闭式引流，腹腔置管引流。美罗培南静滴抗感染，异甘草酸镁针静滴
护肝，泮托拉唑针静滴护胃，腺苷蛋氨酸针静滴退黄。输血浆，补充白蛋白，利尿消肿，止咳排痰，维持电解质平衡等对症支持治疗。
血气分析（2014-01-08）：
血气分析（2014-01-10）：
诊断HPS
有慢性肝病基础，肝功能紊乱表现低氧血症，P/F低，考虑门脉高压引起肺部
无效血容量增加，氧饱和度差患者本身无基础的心肺疾病，杵状指具有
一定的特异性，提示慢性长期氧分压不足，可能已存在亚临床的HPS 血气分析结果支持HPS，但也可能由大量的血性胸水压迫肺部和大量腹水使横膈抬高所致。
患者五年前体检发现肝功能异常（具体不详），住院治疗半月（具体不详），并予中药服用治疗一年余；三年前体检发现 “早期肝硬化”，检查报告未见。
体检：
体温37.2度；脉搏111次/分；呼吸22次/分；血压 109/56mmHg。
神清，精神可，全身未及肿大淋巴结。皮肤、巩膜黄染，眼睑无水肿，肝颈静脉回流征阳性，双手、颈部及前胸多处有蜘蛛痣。心律齐，各瓣膜区未闻及病理性杂音，左肺呼吸音粗，右肺呼吸音消失，未闻及干湿啰音。腹韧，全腹压痛，无反跳痛，肝脾触诊未及，Murphy’s征阴性，肝区轻微叩击痛，移动性浊音阳性，肠鸣音4次/分。双下肢胫前水肿明显，巴氏征阴性。
可以完善的相关检查：
肺功能检查经食管的超声心动图或者对比-增强超声心

大鼠肝脏巨噬细胞分型

大鼠肝脏巨噬细胞分型
巨噬细胞作为炎症反应的主要作用细胞，在不同条件下，有着明显的形态和功能差异。

目前根据活化状态、发挥功能以及分泌因子的不同，巨噬细胞主要可分为经典活化的M1型巨噬细胞和选择性活化的M2型巨噬细胞。

M1型巨噬细胞通常表达CD11c、CD80、CD86和MHC-Ⅱ类分子，并能产生一些细胞因子和趋化因子，如IL-1β、IL-6、TNF-α和NO等，主要参与免疫防御和炎症反应。

M2型巨噬细胞通常表达CD163、CD206、CD209和CD226等，具有较弱的溶酶体活性和较低的细胞因子产生能力，主要参与组织修复、清理凋亡细胞和促进血管生成等过程。

需要注意的是，巨噬细胞的分型受到多种因素的影响，包括刺激因素、细胞来源、培养条件等。

因此，在进行巨噬细胞分型时，需要根据具体情况选择合适的方法和试剂。

巨噬细胞活化综合征

2021/10/10
6
该病的临床表现的程度变化非常大,可以非常严重,由于脑功能、心脏功能、呼吸功能和肾脏功能衰竭而入ICU,也可以仅表现为持续发热,不伴有明显的器官增大,血象相对降低,轻微的凝血功能障碍。
2021/10/10Fra bibliotek7二、发病情况及诱因
MAS在儿童全身性炎症性疾病中的发病率并不十分清楚, 以往认为是一种罕见的并发症,但目前来看,MAS的实际发病情况可能更高。虽然也有其他风湿性疾病并发MAS 的报道,但与SOJ IA相比少得多。引起MAS的原因并不十分清楚, 可能与患者本身免疫细胞功能紊乱有关。发生MAS有时有诱因,如:疾病的复发,应用阿司匹林等NSA ID药物,应用金制剂、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤(MTX)及 D-青霉胺等,病毒感染(常见的有单纯疱疹病毒、EB病毒等) [ 22 ] ,但也可以毫无诱因,毫无预兆。
2021/10/10
3
临床表现
不可缓解的高热,往往持续不退,有的表现为SOJ IA时的弛张热,但多为稽留热,持续高热常常是MAS的首发症状;
肝脾增大,淋巴结增大,增大程度具体病例不同; 肝功能急剧恶化,可以表现为恶心、呕吐、黄疸及肝酶在短期内迅
速增高,程度可达数千甚至过万国际单位每升,并可以出现肝脏其他代谢功能紊乱; 皮肤黏膜易出血现象,可以表现为紫癜、易损伤、黏膜出血,消化道出血,也可能出现弥漫性血管内凝血(D IC) ; 中枢神经系统功能障碍,可以有嗜睡、烦躁、定向力障碍、头痛、抽搐、昏迷; 偶有肾脏、肺脏及心脏受累。本病的临床特征类似于脓毒败血症, 或原发病的复发,所以需要鉴别。
2021/10/10
9
T淋巴细胞和分化完好的巨噬细胞的增生和过度活化是HLH和MAS发病的基础,持续的过度增生可以造成细胞因子,如TNF-α、 L-1、L-6在短期内的瀑布样释放,导致了上述的临床特征和实验室改变,如:持续发热、肝功异常、全血细胞降低,肺、肾、脑等脏器损伤和凝血功能异常以及骨髓的改变, 已有研究证明TNF-α水平增加与凝血功能紊乱有非常大的相关性。

噬血细胞综合征PPT课件

爆发性传染性单核细胞增多症伴有病毒相关的噬血综合征丙种球蛋白异常淋巴组织增生性恶性肿瘤再生障碍性贫血血管和肺部淋巴瘤样肉芽肿继发性或获得性噬血细胞综合征外源性因素病原体毒素所致感染相结缔组织性疾病巨噬细胞活化综合征mas恶性肿瘤恶性淋巴瘤急性白血病等相关fhl19q21322的两个与细胞周期负调控相关的基因突变th1细胞分泌炎症因子下调障碍巨噬细胞持续活化fhl220的患者存在穿孔素基因突变细胞毒细胞nkcdcd56表面缺少穿孔素表达导致对某些病毒或细菌感染失控促炎症细胞因子水平异常升高fhl317q25上unc13基因突变损伤了细胞毒性颗粒溶解性颗粒的出胞过程fhl46q24上stx11基因缺失转运囊胞由细胞内区域至细胞表面功能障碍发病机制免疫缺陷相关性chs为常染色体隐性遗传病色素沉着不足伴hlht和nk细胞功能降低
实验室检查
高细胞因子血症：在家族性HLH及继发性 HLH的活动期常见下列因子增多：IL-l受体拮抗因子、可溶性IL-2受体（sIL－2）、 γ -干扰素（IFN-γ ）、肿瘤坏死因子（TNF）等。血脂：可见甘油三酯增多，可在疾病的早期出现，脂蛋白电泳常见极低密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇升高，高密度脂蛋白胆固醇降低。当病情缓解时，脂蛋白胆固醇可恢复正常。
发病机制——获得性噬血细胞综合征
可能使体内的某些原因启动了免疫系统的活化机制所引发的一种反应性疾病。主要是活化的T淋巴细胞刺激巨噬细胞分泌超量的细胞因子，导致了细胞因子风暴，使T淋巴细胞及巨噬细胞本身处于失去控制的活化状态，导致机体细胞免疫调节系统失控，TH1与TH2细胞比例失衡， TH1细胞过度活化→大量的IFN-r、IL-6、 GM-CSF→CD8+T细胞、巨噬细胞活化→巨噬细胞吞噬功能增强→HLH

2022年潍坊医学院预防医学专业《病理学》科目期末考试卷A

2022年潍坊医学院预防医学专业《病理学》科目期末考试卷A一、判断题1、缝线刺激肉芽组织增生。

（）2、目前全球HIV感染者中约75%是通过异性性接触感染。

（）3、酸性气溶胶可刺激呼吸道上皮，改变黏膜纤毛上皮细胞的自净功能，进一步加重哮喘病患者的呼吸功能。

（）4、唐氏综合征患者可合并先天性心脏病。

（）5、肝细胞气球样变最终可发展成凝固性坏死。

（）6、菌血症患者血液中可查到细菌，机体无中毒症状。

”（）7、急性蜂窝织炎性阑尾炎最容易导致阑尾穿孔。

（）8、淋巴细胞消减型往奇金淋巴瘤是预后最差的霍奇金淋巴瘤类型。

（）9、某些癌基因和机体的免疫状态可能与HPV病毒有协同作用，促使癌前病变及癌的发生。

（）10、肾益肾炎男性发病多于女性。

（）11、Aschoff body 是风湿病特征性病变.具有诊断意义。

（）12、大叶性肺炎病变主要表现为细支气管为中心的化脓性炎。

（）13、单纯性神经元萎缩是神经元慢性渐进性变性直至死亡的过程。

（）14、由垂体功能异常引起的甲亢中，患者血清中多有TSH的增高和甲状腺素的增高。

（）15、结核杆菌的致病性与其菌体细胞壁的结构成分密切相关。

（）二、选择题16、决定器官梗死灶形状的因素是（）A.该器官的血管分布B.梗死灶内的含血量C.梗死灶的大小D.梗死的类型E.侧支循环的建立17、细菌进入血中大量繁殖，产生大量毒素，并在肺、肾等处形成多发性脓肿，被称为（）A.菌血症B.毒血症C.败血症D.病毒血症E.脓毒血症18、脂肪坏死后，可形成肉眼可见的（）A.动脉阻塞B.静脉阻塞C.含铁血黄素蓄积D.蛋白变性凝固E.钙皂19、骨髓的间充质干细胞可以分化为（）A.血管B.脂肪C.肌肉和肌腱D.骨和软骨E.以上均是20、关于副肿瘤综合征，说法错误的是（）A.不能用肿瘤的直接蔓延或远处转移加以解释的病变和临床表现B.由肿瘤产物或异常免疫反应等原因间接引起C.内分泌腺的肿瘤导致的病变或临床表现也属于副肿瘤综合征D.副肿瘤综合征可先于肿瘤发现E.应与肿瘤转移相鉴别21、流式细胞仪采用的光源系统是（）A.可见光B.激光C.紫外线D.射线E.荧光22、由细菌直接感染形成的肾脏疾病是（）A.急性弥漫性增生性肾小球肾炎B.膜性肾小球病C.膜性增生性肾小球肾炎D.急性肾盂肾炎E.快速进行性肾小球肾炎23、垂体性休儒症的特征是（）A.常伴有促性腺激素、促甲状腺素等其他激素水平的异常B.腺垂体分泌生长素（GH）正常C.性器官发育正常D.患者智力正常E.常见病因是垂体无功能性肿瘤24、下列关于阴茎癌的叙述正确的是（）A.好发于阴茎根部B.常引起排尿困难C.以肿瘤组织结构多样性为特征D.以高分化腺癌最多见E.以高分化鳞癌最多见25、以下哪种类型的肝硬化并发肝性脑病的概率较高（）A.小结节性肝硬化B.中结节性肝硬化C.大结节性肝硬化D.混合结节性肝硬化E.弥漫性肝硬化26、下列哪项不是急性感染性心内膜炎瓣膜赘生物的特点（）A.主要侵犯二尖瓣和主动脉瓣B.赘生物牢固、不易脱落C.赘生物主要由脓性渗出物、血栓、坏死组织和大量细菌菌落混合而成D.赘生物体积庞大、质地松软、灰黄或浅绿色E.受累瓣膜可发生破裂、穿孔或腱索断裂27、下列不属于常染色体病的是（）A.Down综合征B.18-三体综合征C.13-三体综合征D.5p-综合征E.先天性卵巢发育不全综合征28、男性，60岁，右腹股沟疝，经疝修补术后，伤口抗拉力强度在多长时间内达到顶点（）A.一周B.三周C.五周D.二个月E.三个月29、老年男性，突发气促合并低血压，同时测得颈静脉压力增高，心音遥远低沉。