分子生物学考试复习资料 山东大学

1.复制和转录的异同：共同点：反应都是核苷酸的聚合过程，模版是DNA，酶依赖DNA的聚合酶，化学键3，5磷酸二酯键，方向5-3延伸，配对是碱基配对规律。不同点：底物不同分别是dNTP和NTP ；酶不同分别是DNA聚合酶和RNA 聚合酶；模版不同，分别是整个染色体双链DNA和部分基因模板链转录；产物不同，分别是子代双链DNA和mtrRNA ；引物分别是需要和不需要；碱基配对分别是A=T，GC和A=UT=AGC

2.转录的过程：模板DNA原料：NTP（ATP,GTP,CTP,UTP）酶：RNA聚合酶（RNA-pol）其它蛋白质因子：如ρ因子，转录因子(TF)等. A转录起始过程，RNA聚合酶全酶结合，DNA双链解开，在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物b转录延长，伽马o亚基脱落，核心酶变构，与，模版结合松弛，沿着DNA模板前移在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长，合成方向沿5-3进行c终止转录RNA聚合酶在DNA模板上停止前进，转录产物RNA链在转录复合物上脱落下来。

3.基因克隆的步骤：目的基因的获取；目的基因与载体的拼接，将重组体导入受体细胞，重组体筛选和鉴定，扩增和表达a获取，从基因组文库中制备，从CDNA 文库中制备，PCR扩增目的基因，人工合成目的基因b目的基因片段与适当的载体经限制性内切酶剪切后，再在DNA连接酶的催化下即可相互连接形成人工重组体，粘性末端连接，平端连接，同聚物加尾连接，人工头连接c氯化钙法，电穿孔法，脂质体转染法，显微注射法d遗传学法，分子杂交法，免疫化学筛选法，PCR筛选法e重组体的扩增与表达。

4.寡核苷酸定点诱变技术所依据的原理是:首先制备单链核酸,即按体外DNA重组技术，将待诱变的目的基因插入到M13噬菌体上，制备此种含有目的基因的M13单链DNA，即正链DNA。再使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸短片段作引物，启动M13单链DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成为新合成的DNA子链的一个组成部分。因此所产生的新链便具有已发生突变的碱基序列,将其转入细胞后,经过不断复制,即可获得突变的DNA分子,再经表达即可获得改造后蛋白质.为了使目的基因的特定位点发生突变，所设计的寡核苷酸引物的序列除了所需的突变碱基外，其余的则与目的基因编码链的特定区段完全互补。B 诱变过程1)合成含有目的基因的正链DNA；2)合成含有特殊突变碱基的引物；3）

制备异源双链DNA；4）富集和转化双链DNA分子；5）筛选突变体并鉴定

5.Kunkel定点诱变法基本原理：是一种通过筛除含有尿嘧啶(U)的DNA模板链进行的寡核苷酸定点诱变法。它的基本原理是:

模版。(细胞内的dUTP酶能将细胞内的dUTP降解,使其含量减少; ung能将误入DNA新生链中的dUTP切除.在dut和ung双缺陷的大肠杆菌中,新合成的DNA 链中含有U.)dut缺陷导致细胞内dUTP水平上升，并在DNA复制时，部分取代dTTP进入DNA新生链中。又由于ung缺陷使掺入DNA的dUTP残基不能除去。由这种大肠杆菌菌株产生的M13单链DNA大约有1%的T被U所取代，然后以其为模板体外合成DNA的另一条链(不含U)，双链DNA导入正常的大肠杆菌中，其N-尿嘧啶脱糖苷酶切去DNA链上的尿嘧啶碱基。结果原来的M13模板链被降解。只有突变链因不含U，被保留下来。这种方法产生的M13噬菌体中含有突变DNA的比例大大增加。

6.PCR定点诱变的原理步骤①将待诱变靶基因克隆到质粒载体上，并分装到两个反应管中；②在每一个反应管中加入两种特定的引物，其中引物1和3均含有错配核苷酸，但两个引物分别与质粒DNA的不同链不完全互补，引物2和4均不含有错配核苷酸，二者分别与质粒DNA的引物1和3杂交链的互补链完全互补；③进行PCR扩增获得含有突变碱基的线型质粒DNA；④将两个反应管中的线型质粒DNA混合，再经过变性和复性，一个反应管中的一条链和另一个反映管中的互补链杂交，通过两个粘性末端形成带有缺口的环状DNA分子；⑤转化入大肠杆菌，环状DNA分子的缺口可被大肠杆菌修复。如果同一反应管中的两个互补链又互相杂交，则继续形成线状DNA分子，在大肠杆菌中不稳定，易被降解。该方法把特异突变点导入克隆基因，无需把基因插入M13中，即可在大肠杆菌中进行表达。7翻译过程从阅读框架的5'-AUG开始，按mRNA模板三联体密码的顺序延长肽链，直至终止密码出现。分成翻译的起始翻译的延长翻译的终止3个阶段。肽链合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成，原核生物翻译起始复合物形成核蛋白体大小亚基分离；mRNA在小亚基定位结合；起始氨基酰-tRNA的结合；核蛋白体大亚基结合。肽链合成延长

指根据mRNA密码序列的指导，按次序添加氨基酸从N端向C端延伸肽链，直到合成终止的过程。肽链延长在核的反密码蛋白体上连续性循环式进行，又称为核

蛋白体循环（ribosomal cycle），每次循环增加一个氨基酸，包括以下三步：进位成肽转位。肽链合成的终止是当mRNA上终止密码出现后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核蛋白体等分离，这些过程称为肽链合成终止。8a蛋白质翻译后的加工过程，多肽链折叠为天然的三维结构新生肽链经盘曲折叠形成空间结构。新生肽链的折叠可能是随着肽链的不断延伸而逐步完成的，逐渐产生正确的二级结构、模序、结构域, ，最终形成完整空间构象。一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。B肽链一级结构的修饰肽链N端的修饰：去除N-甲酰基或N-蛋氨酸。2个别氨基酸的共价修饰：磷酸化修饰；羟基化修饰：羟脯氨酸、羟赖氨酸。3二硫键的生成4多肽链的水解修饰C高级结构修饰，亚基聚合辅基连接

9.原核生物的DNA生物合成。复制的起始，DNA解开成单链，提供模板合成引物，提供3 -OH末端。复制的延长，指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐个加入引物或延长中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不断生成，复制的终止原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点处汇合。

9遗传密码的特点：连续性，编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉。简并性是几种密码子代表一种氨基酸的现象成为密码的简并性，密码的简并性主要是由于密码子的第三个碱基发生摆动现象形成的。通用性是蛋白质生物合成的整套密码，从原核生物岛人类都通用，密码的通用性进一步证明各种生物进化自同一祖先。摆动性转运氨基酸的TRNA的反密码需要通过碱基互补与MRNA上的遗传密码反向配对结合，但反密码与密码间不严格遵守常见的碱基互补规律