31514 细菌胞质蛋白的提取方法
细菌蛋白提取方法(双向电泳用)
产品组成：
产品组成 规格
细菌蛋白提取液 A（2D） 细菌蛋白提取液 B
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3182-1 50 assays
25ml 250ul 100ul
பைடு நூலகம்
BB-3182-2 100 assays
50ml 500ul 200ul
储存条件： 蛋白提取液 A 室温保存； 蛋白提取液 B 和蛋白酶抑制剂-20℃保存。
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124
细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE 上样 Buffer
有效期： 一年。
产品简介： 贝博细菌总蛋白提取试剂盒（双向电泳用）可以从各种原核细菌样本中提取总蛋白，
提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提 取高质量的蛋白提供了保证。
提取的蛋白用于双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE 电泳检测、Western blotting、
BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒，请联系本公司选购其他货号的试剂盒。
使用方法： 裂解液的准备：根据所需要提取的样本量，每 500ul 蛋白提取液中 A 加入 5ul 试剂 B 和 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。 在 4℃ 12000RPM 条件下将菌液离心 5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体， 用 PBS 洗菌体 2 次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。 按每 20mg 湿重菌体样本加入 500ul 裂解液，吹打混匀，冰上放置 30 分钟，间隔一 段时间振荡。（选做步骤：300w，10s 超声/10s 间隔条件下冰浴超声至菌液变清。 若不做，请延长裂解液作用时间至 2 小时。） 在 4℃ 12000RPM 条件下将提取液离心 5 分钟。 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细菌总蛋白。 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH ）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，% Triton X-100，调pH 值至备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。
6、替代方案：将3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中，在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次，1000g离心10min去除沉淀，上清可直接用于蛋白实验。
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min， 2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。
全菌体蛋白提取方法
1.取单菌落至液体或固体培养基过夜培养
2.取一接种环细菌至1.5mL EP管（可用2mL管子好超声），液体培养基视菌液浓度确定使
用体积（菌量大致为1*10^9个）
3.使用冰浴预冷的低盐PBS清洗细菌3遍
离心条件：6000rpm，4℃，5min
PBS尽量用枪头吸净
4.每管加入1mL冰浴预冷的裂解液重悬细菌
5.冰浴超声
40%振幅，超2s停2s，超声4min
注意避免气泡或泡沫产生
6.14000rpm，4℃，离心30min，取上清
7.加DNase、RNase消化残留核酸
DNase使用的是Turbo DNase每100μL加入1μL
RNase 10mg/mL每100μL加入2μL
室温孵育30min
10000rpm，4℃离心，3min，取上清
8.Bradford法测蛋白浓度
各取50μL加入200μL考马斯亮蓝(1：4)，室温孵育10min
再各取混合液100μL至96孔板，酶标仪测量595nm吸光度，绘制标准曲线
样品使用同样的方法测量吸光度，通过标准曲线计算蛋白浓度。
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白(简易法)1、自配裂解液( pH 8.5-9.0)：50 mM Tris-HC，l 2 mM EDTA, 100 mM NaC，l 0.5% Triton X-10Q调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100卩g/m溶菌酶，1卩l/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g 湿菌体。
2、将40ml菌液在12000g, 4C下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤 2 遍，沉淀加入1ml 裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w, 10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3 次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1%SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting 结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol 裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8C下10000g离心15min,上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1mlTrizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min, 28C不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min, 28C下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol 加入2ml 洗液，室温放置20min, 2-8C下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml 无水乙醇，涡旋后室温放置20min, 2-8C下7500g离心5min,弃上清。
5、冷冻干燥5-10min, 1%SDS容液溶解，反复吹打，50C温浴使其完全溶解，2-8C下10000g离心10min去除不溶物。
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min， 2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。
提取菌体全蛋白
提取菌体全蛋白
菌体活化，培养，离心后用PBS洗3次，加入裂解液进行悬浮，超声破碎（约400W，工作10s，间歇10s，30个循环，共3-4次），12000r离心20min，取上清，加丙酮，丙酮：裂解液约为4-5:1，可置于冰箱4o C过夜，去上清，取沉淀，然后再用预冷丙酮洗3次，前两次为100%丙酮，第3次为90%丙酮，然后采用氮吹或者放置去丙酮，待沉淀中丙酮挥发完全后即为提取的粗蛋白。
裂解液配方：6M尿素，2M硫脲，65mM DTT，Bio-lyte 1mL,4%CHAPS，40mM Trisbase，加超纯水至终体积20mL。
注：新鲜配制或-20o C冻存，使用时加入cocktail蛋白酶抑制剂和DTT存储液至DTT终浓度为1%，例如，200uL裂解液中加入13uL 15.5×的DTT存储液。
注意事项：
一、如何判断是否超声完全：
1、外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明，清澈。
2、液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。
3、高速离心：离心之后的沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。
二、一些需要注意的问题：
1、丙酮要提前至于-20o C预冷。
2、如果超声出现黑色沉淀，说明超声功率太强，可适当减小功率。
3、超声时间不宜过长，否则会对蛋白活性有影响。
4、尽量防止泡沫的产生。
5、超声过程中，要将菌体至于冰浴条件下，防止超声过程中温度过高对蛋白产生影响。
胞质蛋白的提取
1，弃去培养基用PBS洗2次后，加入冷的裂解液，裂解液配方：50 mM Hepes, 150 mM NaCl, 3 mM MgCl2, 调整pH至7.5, 根据需要加入蛋白酶抑制剂，有钱可以买pierce的蛋白酶抑制剂鸡尾酒（英文好像是cocktail）。
2，在裂解液中用细胞刮子收集所有细胞，转移裂解液至EP管，用21号针头反复吹打裂解细胞。
3，1000g*3min离心，将上清转移至另一EP管(A管)，沉淀用适量含1%SDS的裂解液（上述裂解液加入SDS）溶解即可得到核蛋白。
4，将A管上清21460g*1h 4 °C离心，即可得到胞浆蛋白（上清）和胞膜/骨架蛋白（沉淀）。
对于沉淀根据需要有两种处理，
A, 将沉淀用含SDS的裂解液溶解，即可得到溶于SDS的胞膜/骨架蛋白。
B, 将沉淀用含TritonX-100裂解液(100 mM phosphate buffer, 150 mM NaCl, measured pH 8, 1.5% TritonX-100, 10% glycerol, plus inhibitors)溶解，即可得到溶于Triton X-100（Sol）的胞膜/骨架蛋白，转移上清后剩下沉淀使用含SDS裂解液溶解，即可得到不溶于Triton X-100（Insol）的胞膜/骨架蛋白。
一种大肠杆菌细胞周质蛋白的提取方法
一种大肠杆菌细胞周质蛋白的提取方法大肠杆菌是一种常见的细菌，它在生物学和生物工程领域中被广泛应用。
大肠杆菌细胞周质蛋白是一类重要的蛋白质，它在细菌的细胞结构和代谢过程中扮演着重要角色。
提取大肠杆菌细胞周质蛋白对于研究细菌生长、代谢和相关疾病具有重要意义。
本文将介绍一种用于提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法，并探讨其在研究和应用中的意义。
1. 方法介绍我们需要了解大肠杆菌细胞周质蛋白的特性和结构。
细胞周质蛋白通常位于细菌细胞壁周围，起到维护细胞形状和保护细胞内部免受外界环境的影响。
提取细胞周质蛋白需要一定的技术和方法支持。
在实际操作中，一种常用的提取方法是利用生物化学技术和分离纯化技术相结合。
细胞周质蛋白需要从大肠杆菌的细胞壁中分离出来，这需要利用酶解和化学方法来破坏细胞壁，释放出蛋白质。
随后，通过差速离心、过滤和层析等技术，可以将细胞周质蛋白从其他细胞组分中分离出来，得到纯净的蛋白质样品。
2. 意义和应用提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法在生物工程和医学研究中具有重要应用价值。
利用这些提取的蛋白质样品，可以对细菌的结构和功能进行深入研究，有助于揭示细菌生长和代谢的机制。
另细菌细胞周质蛋白还可以作为药物靶点或疫苗候选物，用于研究和开发抗菌药物或疫苗。
3. 个人观点和理解作为一种重要的蛋白质组分，大肠杆菌细胞周质蛋白的研究和应用具有重要意义。
通过掌握提取方法，可以更好地理解细菌的生物学特性和生理功能。
在未来的研究和应用中，提取方法的改进和创新将为深入探索细菌的奥秘和开发新型药物提供重要支持。
总结和回顾通过本文对一种提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法的介绍，我们对这一重要的生物学研究课题有了基本的了解。
提取方法的掌握对于研究和应用都具有重要的意义，希望未来能够有更多科研人员投入到这一领域，为生物学和医学研究做出更大的贡献。
在本文中，我们深入探讨了提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法及其意义，希望能够为读者提供有益的知识和启发。
蛋白质提取原理
蛋白质提取原理
蛋白质是生物体中最重要的大分子有机化合物之一，它在细胞生长、代谢、分化、修复和调节等方面起着重要作用。
因此，研究蛋白质的提取原理对于生物学、医学和食品工业等领域具有重要意义。
蛋白质提取的原理主要包括细胞破碎、蛋白质溶解和分离纯化三个步骤。
首先，细胞破碎是蛋白质提取的第一步。
细胞破碎的方法有多种，包括机械破碎、超声波破碎、高压破碎等。
在细胞破碎的过程中，需要注意保持蛋白质的完整性和活性，避免因过度破碎而导致蛋白质的降解和失活。
其次，蛋白质溶解是蛋白质提取的第二步。
蛋白质通常存在于细胞的不同部位，如细胞质、细胞核、线粒体等，因此需要采用不同的方法来溶解蛋白质。
常用的蛋白质溶解方法包括盐溶解、酸碱溶解、有机溶解等。
在蛋白质溶解的过程中，需要控制溶解条件，如温度、pH值、离子强度等，以保证蛋白质的溶解率和活性。
最后，分离纯化是蛋白质提取的第三步。
蛋白质的分离纯化通常采用离心、过滤、电泳、层析等方法。
在分离纯化的过程中，需要根据蛋白质的特性和目的进行选择合适的分离纯化方法，以获得高纯度和活性的蛋白质。
总之，蛋白质提取的原理是一个系统工程，需要综合运用生物学、化学、物理学等知识，合理选择合适的提取方法和条件，才能获得高质量的蛋白质。
希望本文的介绍能够帮助大家更好地理解蛋白质提取的原理，为相关研究和应用提供参考。
细菌总蛋白提取方法
有效期： 一年。
产品简介： 贝博细菌总蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取总蛋白，包括革兰氏阳性和革兰氏
阴性细菌，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋 白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋 白提供了保证。该试剂盒提取的蛋白具有天然活性，可用于报告基因检测、SDS-PAGE 电泳 检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验。每毫升菌液大 概可以提得 5-10mg 蛋白。采用 BCA 或 Lowry 法进行蛋白定量。 使用方法：
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产品 总蛋白提取试剂盒 核蛋白提取试剂盒 Bradford 蛋白定量试剂盒 ECL 化学发光检测试剂盒
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501
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产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721
BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
细菌总蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
细菌蛋白提取液 细菌蛋白稳定剂 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物
BB-3123-1 50T 25ml 250ul
100 ul 100 ul
ห้องสมุดไป่ตู้
BB-3123-2 100T 50ml 500ul 200 ul 200 ul
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存；磷酸酶抑制剂 2-8℃保存；蛋白提取液室温保存。
细胞蛋白提取试剂盒 组织蛋白提取试剂盒 细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白的提取方法(总2页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH ）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，% Triton X-100，调pH值至备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS 溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min， 2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。
蛋白质提取的方法总汇
蛋白质提取的方法总汇蛋白质提取的方法总汇中国生命科学论坛Ⅰ、植物组织蛋白质提取方法（summer）1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！Ⅱ、三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！Ⅲ、组织：肠黏膜（newinbio）目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：1.含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）2.倒转混匀，置室温10min3.离心：12000 g，10min，4度，弃上清4.加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）5.振荡，置室温20min6.离心： 7500g，5 min，4度，弃上清7.重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次8.沉淀中加入100％乙醇 2ml9.充分振荡混匀，置室温20 min10.离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀11.1％SDS溶解沉淀12.离心：10000g，10min，4度13.取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。
利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制
利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制1. 引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，存在于许多生物体的肠道中。
大肠杆菌周质蛋白是一类与菌体外环境密切相关的蛋白质，研究其机制对于深入了解大肠杆菌的生物学特性和与宿主的相互作用具有重要意义。
渗透休克法是一种常用的蛋白提取方法，通过利用渗透压的变化来破坏细胞膜，释放出细胞内蛋白质。
本文将探讨利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制。
2. 渗透休克法的基本原理渗透休克法是一种通过改变细胞周围环境的渗透压来破坏细胞膜而释放细胞内物质的方法。
其基本原理如下：1.建立高渗透环境：通过向培养基中添加高浓度的溶质（如聚乙二醇），增加培养基的渗透压，使得培养基的渗透压高于细胞内的渗透压。
2.细胞膜破裂：高渗透环境下，细胞外溶质浓度高于细胞内溶质浓度，导致水分子从细胞内向细胞外流动，细胞内的渗透压降低。
由于渗透压差，细胞膜受到张力的作用，最终破裂，使得细胞内的物质释放出来。
3.蛋白提取：细胞膜破裂后，细胞内的蛋白质会释放到培养基中，可以通过离心等方式将其分离出来，从而实现蛋白质的提取。
3. 渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的步骤利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白可以按照以下步骤进行：3.1 培养大肠杆菌在培养基中培养大肠杆菌，可以选择适合大肠杆菌生长的培养基（如Luria-Bertani（LB）培养基）。
确保菌体生长到适当的密度，一般为光密度值（OD600）在0.6左右。
3.2 采集菌体用无菌工具（如无菌吸管）或离心机采集大肠杆菌的菌体。
将菌体转移到无菌离心管中。
3.3 制备高渗透培养基准备含有高浓度溶质（如聚乙二醇）的培养基，增加培养基的渗透压。
确保高渗透培养基的渗透压高于大肠杆菌的细胞内渗透压。
3.4 渗透休克处理将采集到的大肠杆菌菌体转移到高渗透培养基中，使细胞受到高渗透环境的刺激。
可以通过搅拌、振荡等方式加强渗透作用。
处理时间一般为几分钟至数十分钟。
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产品说明书
磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 活性蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 植物核蛋白提取试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 真菌蛋白提取试剂盒 磷酸酶抑制剂混合物 细菌蛋白提取盒（2D 电泳用） 酵母蛋白提取盒（2D 电泳用） 线粒体蛋白提取盒（2D 电泳用）
本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录 活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于 2D 电泳，如下游实验需 要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后 再用于 2D 电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品 BB-38113）。 贝博 TM 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同 样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去 垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，总计 300 多种蛋白提取试剂盒可供选择。贝 博 TM 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞 器的提取试剂盒。
产品特点： 1、 使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235 400-8363-211
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材： 仪器 离心机 振荡器 涡旋混匀器 水浴锅 移液器 冰箱 冰盒 耗材 离心管 吸头 试剂 PBS
（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约
含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
注意事项： 1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。 2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，
避免开盖时试剂损失。 3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并
使用方法：
使用注意事项： 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
产品说明书
3、 按每 100-150mg 湿重菌体样本加入 500ul 冷的提取液 A（大约菌体和提取液体积比 1:3-1:5，完全淹没菌体即可），吹打混匀，在 2-8℃振荡 1-2 小时，至菌体裂解完 全，菌体沉淀减少。
【注】： 必须 2-8℃低温条件下振荡。 振荡器或摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。可以盖紧离心管，将离心管倾斜放置 或者横置，以利于液体振荡。 如果没有 2-8℃持续振荡条件，也可直接置 2-8℃冰箱静置 1-2 小时，中间每隔 10 分钟用 移液器吹打混匀即可。 如果有超声条件，可以在 40-300w，超声 5s/间隔 5s 条件下超声几分钟，至澄清。
有效期： 一年。
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新： 贝博 TM 会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应 的版本更新。使用产品时，请参照试剂盒中随产品附带的印刷版说明书，不能 参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。 需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
常见问题分析： 蛋白浓度低？ 细菌蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分样本时可能没有裂解完 全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。最好在持续振荡的 条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 用什么方法定量蛋白？ 建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份， 导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。 提取的蛋白具有活性吗？ 本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的 相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
250ul
500ul
31514B
组份 C：细菌胞质蛋白提取液 C
10ml
20ml
31514C
组份 D：蛋白酶抑制剂混合物
100ul
200ul
31514D
使用说明书
1
1
各组份储存条件：
蛋白提取液 2-8℃保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】：蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以 2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
4、 将菌液在 2-8℃低温下 12000g 离心 5 分钟，取上清。 5、 在 37℃水浴 10 分钟。 6、 在 37℃， 1000g 离心 3 分钟。
【注】： 此步骤必须 37℃条件下离心。 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者 在室温条件下离心，缩短离心时间至 1 分钟。
2、 离心收集需要提取蛋白的菌体，用 PBS 洗菌体 2 次。
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电话：021-33921235 400-8363-211
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如 果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235 400-8363-211
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
1、 提取液制备： 每 500ul 冷的提取液 A 中加入 5ul 提取液 B 和 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀 后置冰上备用。
【注】： 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取 液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
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产品号
产品
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本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品号 -4-
总蛋白提取试剂盒 核蛋白提取试剂盒 膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒 Bradford 蛋白定量试剂盒 ECL 化学发光检测试剂盒 细胞蛋白提取试剂盒 组织蛋白提取试剂盒 细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 昆虫蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 总蛋白提取试剂盒（2D 电泳用） 植物蛋白提取盒（2D 电泳用） 细菌膜蛋白提取盒（2D 电泳用）
产品说明书
细菌胞质蛋白提取试剂盒
货号：BB-31514
V1.7.9
试剂盒储存条件： 2-8℃保存。
试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成
BB-31514-1
BB-31514-2
组份编号
规格
50T
100T
组份 A：细菌胞质蛋白提取液 A
25ml50ml源自31514A组份 B：细菌胞质蛋白提取液 B
7、 此时液体分为 2 层，小心吸取上层溶液，即为胞质蛋白。
【注】： 下层为粘稠状液体。
8、 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】： 建议用 BCA 法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。 可以根据需要用试剂 C 稀释蛋白样品，调整浓度。
质量控制： 贝博 TM 对每批产品进行严格测试以确保产品质量一致。
产品说明书
技术支持： 产品技术问题可发邮件至 bestbio@ 咨询。 如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时联系我们。
知识产权： 贝博 TM BBproExtraTM 系列试剂盒及其使用方法包含专有技术。
BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3182 BB-3185 BB-3191
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咨询邮箱：bestbio@
产品说明书
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包
含 6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。 该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白 酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 5、 本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。 6、 本品不含 EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。