人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达
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ｔａ Ｎ ｆ ｅ ｅ ｎ ｙｒ ｅｓ ｔｎｃｉ ｉ －ｏ ｍ ｒ ｅｃａ ａｔｎ（ ＴＰ Ｒ ， ｅ ｅＨ Ｖ ８ ６ｇｎ ｅ ｅｃ ａ — ｏ ｌ Ａ ｏ Ｈ ｌ ｃｌｌｅｂ ｖｒ ａｓｒ ｔｎｐｌ ｅａ ｈｉ ｒ ｃｏ Ｒ －Ｃ ）ｔ ｎｔ Ｐ １Ｅ ｅｅｓ ｎｅｗ ｓｎ ｔＲ ａ ｌｉ ｅ ｅｒ ｐｏ ｙ ｓ ｎｅ ｉ ｈ ｈ ｕ ｑ ｉ
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ｐ ×ｆ ｇｍ ｃＣ －４Ｈ Ｖ ８ ６真核表达载体 的成 ３ ｌ － ｙ—ＭＶ２ Ｐ １Ｅ ａ 体可 以被 限制性 内切酶 Ｈｎ Ⅲ、ａＩ切开 ， ｉ ｄ Ｓｌ 电泳可显示相应条 带 ， 测序其 序列与设计 的一致 ， 经 转染 到 Ｈ ｌ 细胞 ４ ｅ ａ ８ｈ 后经 Ｗｅｔ －ｌ 检测可见 Ｈ Ｖ ８ ６的高表达及 ｆ 的表达 。结论 ｓｒ ｂ ｔ ｅ ｏ ｎ Ｐ １Ｅ ｌ ｇ ａ 功构建为进一步研究 Ｈ Ｖ ８ ６的致癌 机制奠定 了基础 。 Ｐ １Ｅ
ｕ ｅ ｓ ｔｅ ｅ ｐ ｅ ｓ ｎ ｌｖ ｌ ｆ ａ ｄ Ｈ Ｖ１ Ｅ ｆ ｒ ８ ｈ． ｓ ｌ Ｔ ｅｐ ｓｄ ｔ ｔ ｔ ｘ ｒ ｓｉ ｅｓ ｇ ａ Ｐ ８ ６ ａｔ Ｒｅ ｕｔ ｈ ３×ｆ － ｅ Ｃ ｏｅ ｈ ｏ ｅ ｏｆ ｎ ｌ ｅ４ ｓ ｌ ｍｙ － ＭＶ一 一Ｉ Ｖ１ Ｅ ｕ ａ ｙ ｔ ｘ ｒ ｓ ｇ ａ ４ － ２ ＩＰ ８ ６ ｅ ｋ ｒｏｉ ｅ ｐ ｅ — ｃ
中 国 实验 诊 断 学
２１００年 ２月
第 １ ４卷
第２ 期
～
１ ５９ 一
文 章 编 号 ：０７— ２７ ２ １）２ １９— ３ １０ ４ ８ （００ ０ —０５ ０
人乳头瘤病毒 １ 型 Ｅ ８ ６蛋 白真 核 表 达 载体 的构 建 及 其 在 子 宫 颈癌 细胞 株 Ｈ ｌ 胞 中的表 达 ｅ ａ细
关 键 词 ： ｅ 细 胞 ； 核 表 达 载体 ； Ｐ ８ ６ ｆ Ｈｌ ａ 真 Ｈ Ｖ１Ｅ ；ａ ｌ ｇ 中 图分 类 号 ： ７０ ２ １ Ｒ ３ ．３
ＺＵ Ｈ
文献标识码 ： Ａ
一
Ｃ ｎｔｕｔ ｎｏ ｐ ×ｆ ｇｍ ｃＣ －４Ｈ Ｖ ８ ６ｆｓ ｎｇｎ ｘｒｓｏ ｅｔ ｎ ｔ ｅｐｅｓ ｎｉ ｅ ｅｓ Ｗ Ｉ ｉ ｏｓ ｃ ｏ ｆ ３ ｌ － ｙ－ ＭＶ ２－ Ｐ １Ｅ ｕｉ ｅｅｅｐｅｓ ｎｖｃ ｒａｄｉ ｘ ｒｓｏ ｎＨ ｌ ｌ Ｅ Ｙｎ ｒ ｉ ａ ｏ ｉ ｏ ｓ ｉ ａＣ ｌ ｇ，
ｌ ｇ ｍｙ — ｆａ － ｃ ＣＭＶ一 一 ４ ２ ＨＰＶ１ ６． ｅ ｐａ ｍｉ ８Ｅ Ｔｈ ｌｓ ｄ ｐ３× ｆ ｇ ｍｙ — ｌ － ｃ ＣＭＶ－２ ＨＰ ８ ｒ ｒ ｎ ｆｃｅ ｎｏ ｔｅ Ｈｅａ ｃ ｌ Ｗ ｅ ｔｍ－ ｌｔｗｅ ｅ ａ ４一 Ｖ１ Ｅ６ ｗｅｅ ｔａ ｓｅ ｔｄ ｉ ｔ ｌ ｅ ｓ． ｓｅ ｂｏ ｒ ｈ
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因片段 连接到 ｐ ８ ＭＤ１Ｔ载体上 ， 通过限制性 内切酶 Ｈｎ １ 、ａＩ酶切 ，４ 接酶连接到含有上述酶 切位点 的 ｐ ×ｆｇ ｉ ］ Ｓｌ ｄ／ Ｔ连 ３ ｌ － ａ
ｍ ｃＣ － ４真核 表达载体上 ， ｙ．ＭＶ ２ 通过脂质体将 ｐ ｌ －ｙ—ＭＶ２ Ｈ Ｖ１Ｅ ３×ｆ ｍ ｅＣ ． Ｐ ８ ６转染 入 Ｈ ｌ 细胞 ４ 后 ， ｓ ｍ．ｌ 检 ｇ ａ ｅ ａ ８ｈ Ｗｅｔ ｂ ｔ ｅ ｏ 测 Ｈ Ｖ ８ ６ ３×ｆ 表达情况 。结果 Ｐ １Ｅ 及 ｌ ｇ ａ ｐ ｌ － ｙ－ＭＶ２一 Ｐ １Ｅ 真 核表 达载体构 建成 功 ， 建 的真核表 达 载 ３×ｆ ｍ ｃＣ －４Ｈ Ｖ ８ ６ ｇ ａ 构
卫 莹， 朱 靖， 王青元 ， 范少君 ， 李 敏 ， 卫华 ， 肖 凌 斌 ， 颖 周
（． １安徽 医科大学 附属 省立 医院 妇产科分子实验室 安徽省分 子医学重点实验室 ， 安徽 合 肥 ２００ ； ３０ １ ２ 中国科技 大学 生命 科学院 免疫学研究所 ） ． 摘要 ： 目的 中的表达。方法 构建并鉴 定 ｐ ×ｆｇｍ ｃＣ Ｖ ２． Ｐ １Ｅ ３ ｌ － ｙ—Ｍ 一 ４Ｈ Ｖ ８ ６真核 表达载 体 ， 转染 Ｈ ｌ 细胞 后 ， ａ 并 ｅ ａ 检测其 在 Ｈ ｌ ｅ ａ细胞 用 Ｒ －Ｃ ＴＰ Ｒ法从 Ｈ ｌ细胞 中扩增 出带 Ｈｎ Ｉ Ｓｌ ｅ ａ ｉ Ｉ、ａＩ酶 切位点 的 Ｈ Ｖ ８ ６基 因片段 ， Ｈ Ｖ ８ ６基 ｄ Ｐ １Ｅ 将 Ｐ １Ｅ
ｅ ｎｕ ｍ ｄ ａ ｕｉｒｔ， ｅｉ ３０ １ Ｃ ／ ｄｔ Ａ ｈｉ ｅｉ ｎ ｅ ｉ Ｈｆ ００ ， ｈ￣） ｏ ｃ ｌ ｖ ｓｙ ｅ ２ ，
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